用四重位波-A波检测可改善N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸峰面积响应值的长期稳定性_第1页
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1、用四重位波-A波检测可改善N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸峰面积响应值的长期稳定性摘要：本文研究了重位波-A波检测可改善N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸峰面积响应值的长期稳定性。文章中用四重电位波形（A波）和三电位波形（B波和C波）进行了比较得到A波分析唾液酸时，48小时内稳定性很好，峰面积RSD5%，也可以达到一到两的长期稳定。关键词：四重位波-A波；唾液酸 Dionex TN41的方法中指出，用HPAE-PAD可以准确重复的测定糖蛋白中唾液酸的含量1。自TN41和Reference3方法发表以来，用于糖类化合物分析的脉冲电化学波形就出现了，此波形不会导致电极凹进2。本方法描述的波形

2、是四重电位波形（A波），并与Dionex TN21中的三电位波形（B波和C波）进行了比较3。这种电位的波形见图1。在本方法中，我们发现用A波分析唾液酸时，48小时内稳定性很好，峰面积RSD5%。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Dionex DX-500色谱装置，包括：GP50梯度泵，带真空脱气装置；LC30或LC25柱温箱；ED40电化学检测器、检测池和金工作电极；AS3500自动进样器带Tefzel转子密封和不锈钢进样针；PeakNet 色谱工作站。NaAc；50%NaOH ；Neu5Ac和Neu5Gc；6N HCl；KDN；人铁传递蛋白，部分铁；Arthrobacter ureafac

3、iens 神经氨酸苷酶； 1.2 色谱条件 分离柱：Dionex IonPac AS23分离柱和IonPac AG23保护柱，4.5 mmol/L Na2CO30.8mmol/L NaHCO3缓冲溶液等度淋洗，AMMS III阴离子抑制器，50 mmol/LH2SO4作为再生液。淋洗液流速为1.0 mL/min，进样体积为10 L。 柱 子：CarboPac PA10分析柱（0.425cm）带保护柱 流 速：1.0 ml/min 淋洗液：A: 100mM NaOH；B: 100mM NaOH1MNaAc 程 序： 时间（min） A（%） B（%） 检测器：ED40电化学检测器，金工作电极 定

4、量环体积：100 L 自动进样器循环时间：27min 柱温箱温度：30 波形A： 1.3 样品前处理 人铁传递蛋白用0.1NHCl消解或者用Arthrobacter ureafaciens神经氨酸苷酶进行处理从而释放处唾液酸 A-波分析唾液酸（200-pmol）时峰面积的长期稳定性2 结论: 虽然用HPAE-PAD-B-波分析Neu5Ac和Neu5Gc也能够取得好的结果，但A-波可以给出更好的长期稳定性。我们建议在分析Neu5Ac和Neu5Gc时使用A-波并按照TN21中的指示进行验证。 参考文献: 1Dionex Technical Note 41, 1997. 2Rocklin RD, Clarke AP, Weitzhandler M. An

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