化学性方法肝硬化动物模型建立读书报告演示课件

1、1,化学性肝硬化动物模型造模方法,2,主要内容,肝硬化造模方法种类简介 机理分析、给药途径、剂量、优缺点 展望与思考,3,肝硬化造模的主要方法,化学性肝硬化模型 结扎胆总管肝硬化模型 实验性免疫肝硬化模型 血吸虫虫卵所致肝硬化模型 转基因肝硬化模型 复合法,4,化学性肝硬化模型,四氯化碳法 二甲基亚硝胺 二乙基亚硝胺 硫代乙酰胺,5,化学性单纯CCL4法机理分析,CCl4通过肝微粒体细胞色素P450氧化酶激活后, 产生自由基CCl3-及Cl,CCl3-与肝细胞内大分子发生共价结合,破坏肝细胞功能,肝纤维化、肝硬化,6,化学性单纯CCL4法给药途径,腹腔注射法 高死亡率 皮下注射法 灌胃,四氯化

2、碳致肝纤维化动物模型实验条件的优化,国外,腹膜炎,7,给药剂量,吴孟超经典模式 40%60% CCl4橄榄油溶液皮下注射,0.3 mL/100 g体重,首剂加倍,每周2次,共812周,不同剂量四氯化碳实验中， 0.1mL/100 g剂量最佳,8,模型特点：,简便,费用低，易操作 动物个体差异较大,CCl4剂量不易掌握 停药后易逆转,9,化学性CCL4复合法,CCL4苯巴比妥联合诱导 CCL4食用乙醇联合诱导,10,CCL4苯巴比妥联合诱导,机制 四氯化碳诱导慢性肝损伤的机理是直接损害肝细胞,破坏细胞的各种成分,造成肝细胞的脂肪变性与坏死 苯巴比妥钠通过提高细胞色素P450活性,从而增加肝细胞对

3、四氯化碳的敏感性,11,CCL4苯巴比妥联合诱导给药途径,苯巴比妥：饮水中给药 四氯化碳：背部皮下注射,12,CCL4苯巴比妥联合诱导给药剂量,第一周每升蒸馏水中含0.35g苯巴比妥钠的溶液作为大鼠的惟一饮用水 第二周起按0.4mL/100g体重注射，每周2次，共10周,13,CCL4食用乙醇联合诱导-机制,四氯化碳: 直接损害肝细胞 破坏细胞的各种成分,乙醇: 酶诱导剂 增加肝氧耗量 增强四氯化碳对肝的 毒性作用,促进肝硬化的形成,14,CCL4食用乙醇联合诱导给药途径,乙醇：灌胃或饮水中给药,四氯化碳：皮下注射,15,CCL4食用乙醇联合诱导给药剂量,改良的诱导方法 60%四氯化碳，30%

4、乙醇溶液诱导,共9周,目前标准的诱导方法 1981年Chatamra采用50%四氯化碳、10%乙醇为主的 方式建立肝硬化模型,诱导时间约12周,缩短时间 成型率高 死亡率低,16,CCL4复合法模型特点,动物模型周期缩短 形成率低 拒饮苯巴比妥或乙醇导致脱水、死亡 胃大出血而死亡,17,二甲基亚硝胺(DMN),18,二甲基亚硝胺(DMN) 机理,肝微粒体,DMN,中间产物甲醛、甲烷亚硝胺,核酸、蛋白质,肝细胞损伤,19,二甲基亚硝胺(DMN)给药途径,腹腔注射,20,二甲基亚硝胺(DMN)给药剂量,王献波等人,以DMN10 g/kg剂量做腹腔内注射,每天1次,每周连续3天、共4周，成功形成肝硬

5、化模型 1 %DMN 按 1m l/kg 腹腔注射，每周前 3 天给药，每天 1 次，持续 3 周，第 4 周仅在周一给药 1 次，成功形成肝硬化模型,21,二乙基亚硝胺(DEN)机理,DEN DNA双链 DNA编码错译 肝脏损伤,22,二乙基亚硝胺(DEN),给药途径： 饮水中给药,23,二乙基亚硝胺(DEN)给药剂量,给药剂量： 0.1g/L 0.05g/L、2周后为0.1 g/L,诱导8周,两者的肝硬化严重程度 无统计学差异,1华赟鹏,李绍强,赖佳明,彭宝岗,梁惠珍,梁力建. 体重监测下渐进性口服二 乙基亚硝胺诱导肝硬变大鼠模型的研究J. 中国普外基础与临床杂志,2009,(8).,24

6、,TA A（硫代乙酰胺）机制,肝,TAA,硫氢 化合物,肝大分 子物质,引起肝细胞膜损害 肝细胞坏死,25,TA A（硫代乙酰胺）给药途径剂量,给药途径：饮水中给药 给药剂量： 生理盐水配制成 30溶液，作为实验动物的饮用水，8 周形成肝硬化,26,致癌药物造模（除CCL4）模型特点,共性： 周期短，死亡率相对较低 毒性大，易挥发，排泄物在 24 小时内含有毒性，易污染环境 需做好隔离，造模过程不方便,慎用,个性： 硫代乙酰胺（TAA）在组织学上所诱导的肝硬化与病毒性诱发的肝硬化很相似,27,感悟与思考,因素探讨：多因素诱导法是否优于单因素诱导法？ 鼠较成熟，但是在兔、狗等中型动物身上是否相同？ 药物的剂量：文献中发现无论是鼠还是兔，都存在四氯化碳给药剂量相差10倍的问题，是小剂量还是大剂量应该在造模过程中采用？,28,前期预实验,动 物：新西兰兔 造模药物：四氯化碳、乙醇 造模方法：四氯化碳复合法（四氯化碳2.5ml/kg 乙醇5ml） 单纯四氯