树突细胞在直肠癌免疫治疗中的研究进展

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减树突细胞在直肠癌免疫治疗中的研究进展（作者：单位：邮编：）作者：李响刘朋飞朱磊周余来【关键词】 树突细胞；直肠癌；疫苗；免疫疗法直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，其发病率仅次于胃癌和食道癌， 是大肠癌的最常见部位（占65%左右），且患病人群以中老年为主。 由于老年人的脏器功能较青年人有所减退， 且易患多种疾病，故老年 人直肠癌相对中青年有其特殊性。对于直肠癌处理的手段通常所采用 的方法是直肠系膜的整体切除并结合放射疗法。 但是复发率高，严重 影响了患者的生活质量1。目前，免疫治疗已经被认为是继放疗、 化疗、手术切除之后的第4种肿瘤治疗模式，主要有肿瘤抗原疫苗、

2、 多肽疫苗、基因疫苗以及树突细胞（DC）疫苗等，其中以DC疫苗 为基础的主动免疫治疗，已成为最近研究的热点2。1直肠癌免疫逃逸机制及免疫耐受表现人体的免疫系统在防止肿瘤发生过程中起着关键性作用 现已证实，人体免疫系统的功能缺陷是造成肿瘤免疫逃逸的主要机制 之一，并且还制约着肿瘤免疫疗法的效果3。1.1肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）凋亡机制 近些年发现，很多肿瘤组 织中都存在TIL，TIL在肿瘤免疫中的作用非常重要。它可通过 Fas 系统或释放颗粒酶、穿孔素杀伤肿瘤细胞。但是，当直肠癌细胞表达 Fasl时，Fasl可诱导TIL发生凋亡，进而反击机体免疫系统，一定 程度上诱导了肿瘤的免疫逃逸，而且肿瘤

3、抗原EpCAM与人类白细胞相关免疫球蛋白样受体（LAIR1）相结合后，可直接对细胞免疫反应 产生抑制作用4。1.2直肠癌免疫耐受表现直肠癌细胞能够通过多种机制诱导 免疫耐受，表现为：Th1细胞凋亡，Th2细胞极化，调节性T细胞数 量增加，T细胞和NK细胞CD3复合物Z链表达下调，外周血中不成 熟细胞增多，而且血清中TGF B、IL1O等细胞因子浓度升高4。 鉴于DC的免疫学特性以及类浆细胞 DC抗原提成作用的新进展5， DC已经成为直肠癌治疗的一种潜在手段。2 DC的免疫学特性DC由美国学者Steinman6于1973年发现，是目前所 知功能最强大，并且是惟一能激活初始性T细胞的抗原提呈细胞。

4、DC可有效地诱导初始T细胞的增殖和应答，促进 CTL和辅助性T 细胞（Th）的生成。根据DC的来源，可将其分为骨髓来源 DC和类浆 细胞DC两类7。未成熟DC常位于抗原易于入侵部位，如肠黏膜，它们能 够特异性捕获抗原，但缺乏激活T细胞的能力8。随着DC逐渐分 化成熟，它们伸出许多树突样或伪足样突起，渐渐移至外周淋巴器官， 发挥抗原呈递作用，并与抗原特异性 T细胞相互作用而启动免疫反 应。DC是人体内功能最强大的专职抗原提呈细胞，成熟的DC 可通过表达MHC I 和MHC H分子等途径提呈抗原。DC表达的MHC I类抗原的量要比巨噬细胞多520倍，而MHC I类抗原正是所有抗 原提呈细胞将抗原提

5、呈给T细胞的中介分子，因此，DC的抗原提呈 能力比巨噬细胞高1030倍9。由此可见，DC在免疫监视、抗 原的摄取和搬运等方面均有一定作用。3 DC与肿瘤的关系DC与肿瘤的关系密切。一般来说，人体肿瘤微环境中的DC及肿瘤浸润 DC(TiDC)的数量、功能与肿瘤的预后呈正相关。Ishigami等10检测了胃癌患者肿瘤组织中 TiDC的表达，结果显 示:DC浸润程度与患者远处淋巴结和腹腔转移以及病情恶化程度呈 负相关。对某些实体瘤内的DC浸润程度研究亦证明TiDC数量愈多, 则患者预后愈好。所以，TiDC在肿瘤的免疫激活与免疫耐受中均有 一定作用。大多数肿瘤组织中DC的含量有限，且多数处于未激活状态

6、 这与肿瘤产生的细胞因子对 DC的影响有关。例如：TNF a抑制DC 对特异性CTL细胞的激活；血管内皮生长因子(VEGF )抑制DC前 体分化发育为成熟的DC; IL1O抑制DC表达刺激分子B7。总之，在肿瘤组织内，肿瘤细胞可以通过释放免疫抑制因 子造成DC的功能缺陷，使其无法有效的呈递抗原，而且，这对T细 胞的活化及其功能均有一定抑制作用。4直肠癌的DC疫苗直肠癌患者往往预后较差，并且复发率高。经过研究者的 不断探索，以树突细胞为疫苗治疗直肠癌已经取得了较为显著的成 果。4.1直肠癌细胞裂解产物致敏 DC Burgdorf等11应用直肠 癌患者的外周血单核细胞，经含有肿瘤细胞表面抗原的肿瘤

7、细胞裂解 物反复冲击，从而致敏 DC形成疫苗。对17例直肠癌患者每人2 w 注射1次疫苗，共注射10次。依据国际癌症研究组织的分级标准进 行评定，其中4例病情得到了稳定。对患者的后续研究证明，DC疫苗的治疗方法安全、无毒性，其对于直肠癌的病情稳定率可达 24%(4/17)。4.2肿瘤相关抗原肽负载DC疫苗 肿瘤抗原肽致敏的DC具有很好的靶向性。这种 DC能显著诱导机体CTL的激活，进而产生抗 肿瘤免疫，发挥一定的保护性作用。 Ueda等12最近从13例肿 瘤晚期患者的外周血中成功诱导了成熟的DC，用癌胚抗原（CEA）抗原肽对DC进行修饰，进而制备肿瘤疫苗，并对此方法的有效性和安 全性进行了检测

8、。某些体外实验亦表明该类DC疫苗可明显引起肿瘤 患者的特异性免疫反应，刺激T细胞的增殖，对肿瘤细胞产生一定的 杀伤作用。4.3 DC 一肿瘤细胞融合疫苗 从理论上讲，DC与肿瘤细胞融合的 致敏方法，可将全部肿瘤抗原结合于 DC，使其既具有肿瘤细胞的全 部抗原性13，又具有活化T细胞的功能。目前融合技术主要有电 融合和化学融合两种方式，其中电融合的效率较高。从现有的技术资 料来看，通过融合技术获得 DC肿瘤细胞融合疫苗的方法切实可行14。一般情况下，融合技术制得的疫苗，效率高于其他以 DC为 基础的免疫疗法。这是由于融合后的细胞不仅具有 DC的抗原呈递功 能，而且还能够产生针对 T淋巴细胞的MH

9、C分子。目前研究者发现，该种融合细胞能够防护肿瘤细胞的攻击， 结果可使已产生的肿瘤逐渐消退。 经过进一步的观察与研究，由自体 或同种异体的DC与肿瘤细胞融合后获得的杂交细胞疫苗，在体内或 体外均可表现出相同的生物学效应。 这一发现表明，杂交融合疫苗的 效率很大程度上取决于机体内的 APC对于抗原的摄取和呈递功能15。因此，该种方法是一种很有潜力的肿瘤治疗手段。4.4肿瘤细胞RNA负载DC肿瘤免疫疗法旨在引发 机体产生针对肿瘤抗原的特异性免疫反应，而该过程的根本性反应就是DC将肿瘤相关抗原传递给T淋巴细胞。通过将负载肿瘤抗原的 DC重新注入患者体内或体外扩增的方法，均可以获得抗肿瘤的淋巴 细胞。

10、应用转染等方法使活体 DC负载RNA，再经RNA的表达使 DC成为产生特异性肿瘤相关抗原的有效工具。并且该种方法已经开 始展示出美好的前景，研究者们也在积极地设计临床研究实验 16。 但是特异性抗原的选取、DC细胞的活化以及给药参数等问题，仍然 是限制该种方法的瓶颈所在。目前，已有学者开始在提高RNA对DC 的转染率、改善抗原传递途径、以及T细胞的共同刺激等方面，寻求 可使该种疫苗更加完善的方法16。4.5 Exosome 融合DC疫苗 Exosome是生物活性小囊泡家族 中的新成员，由多泡体融合而来，至今其功能尚不完全明确。但研究 表明，Exosome可以用做肿瘤抗原。DC能够将该肿瘤抗原传

11、递给 T 淋巴细胞，诱导T细胞活化17。Exosome来源广泛，可由上皮细 胞、造血细胞、肿瘤细胞等一系列细胞分泌。在动物实验和临床研究 中发现，由负载肿瘤抗原的 DC所产生的Exosome，能够诱发肿瘤 抗原特异性CD8+CTL增殖活化，从而发挥抗肿瘤的免疫学效应。此 种方法的优点在于能够通过无细胞的疫苗对人体的免疫系统进行有 效刺激，该种特性很可能会成为提高DC疫苗治疗肿瘤效率的潜在突 破点18。4.6激发型4_1BB单抗联合凋亡肿瘤细胞致敏 DC作为重组肿瘤坏死因子受体可溶性蛋白（TNFR ）超家族的成员，41BB分子可 功能性表达在DC上，而且，该分子的活化可进一步促进 DC的分化 和

12、成熟，增强其激发 T细胞的功能。由此，李敏等19丨应用凋亡 小鼠B细胞淋巴瘤细胞A20负载的DC来制备APDC，A20荷瘤小 鼠分别被注射APDC、2A单抗或二者联合。通过观察肿瘤生长情况 及小鼠生存期，发现3种方法均有一定治疗效果。单独注射 AP_DC 或2A单抗可获得12.5 %或25.0 %的肿瘤完全缓解率；二者联合应用， 治疗效果更好，肿瘤完全缓解率可达62.5 %，并且荷瘤鼠可长期生存。治疗后荷瘤鼠脾脏T细胞体外增殖更为活跃，CD4+IFN 什T细 胞的比例也明显升高。在联合治疗荷瘤鼠的血清和脾脏 T细胞的培养 液上清中，IL2和IFN 丫的分泌水平明显升高，而IL1O的分泌水平 降

13、低。由此可见，可以通过对以激发型4 1BB单抗联合凋亡肿瘤细胞致敏DC的进一步研究，来不断完善此种方法，以使其早日进入临 床研究阶段。展望随着对DC细胞研究的进一步深入，以 DC细胞为基础的 免疫疗法已经取得了长足的进步，DC疫苗的构建方法也日益多样化 和高效化。但是，由于对DC的研究历史较短，特别在直肠癌治疗方 面才刚刚起步，DC的某些负面影响尚不明确（例如：由于 DC具有 潜在的分化缺陷，所以在机体的某些肿瘤刺激因子作用下容易造成机 体DC的免疫耐受）。就目前来看，每一种新的方法都有其不足之处。但是，有理由相信在不久的将来，肿瘤的免疫治疗一定会实现多方法 和多层面的相互结合，并且以DC为基

14、础的肿瘤免疫治疗方法也一定 会成为直肠癌治疗领域的一个新的发展方向。【参考文献】1 Zampino MG， Labianca R， Beretta GD,et al.Rectal can cer J.Crit Rev On col Hematol ，2009 ； 70(2): 160 82.2 Welters Marij JP，Van Montfoort N ，Khan S,et al.Report on the sixth annual meet ing of the Associatio n for Immuno therapy of Cancer (CIMT)， May 15 and 1

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