无菌药品检查要点

1、无菌药品gmp认证检查要点,河北省食品药品监督管理局 药品审评认证中心 刘长青,无菌药品的概念及分类,无菌药品是要求没有活体微生物存在的药品，也就是法定药品标准中有无菌检查项目的药品。 为了达到产品中没有活体微生物，在生产过程中，需要采取各种方法来去除制品中原有的微生物和防止制品受到微生物的污染。,无菌药品的概念及分类,无菌药品的分类 最终灭菌的无菌药品：耐热的产品，能通过热处理的方式来去除制品中可能存在的微生物，通常采用湿热灭菌法。如，大容量注射剂、小容量注射剂 非最终灭菌的无菌药品：在工艺过程的最后内包完毕后没有一个单独的灭菌过程，其无菌性主要依赖整个过程中保持对各个工序的无菌控制，避免生

2、产过程中的微生物污染。如，粉针剂、冻干粉针剂、部分小容量注射剂、滴眼剂、无菌原料药等,无菌药品的概念及分类,无菌药品的生产方法的选择 根据药品的品种及工艺的开发，无菌药品首选的办法是最终灭菌，保证产品的无菌特性； 当灭菌可能会造成副产物等问题时，尽可能从工艺上创造条件，使灭菌成为可行； 由于热不稳定性，应决定使用一种替代方法：除菌过滤和/无菌生产。非最终灭菌无菌药品的基本特征是：低安全+高成本,灭菌工艺的选择,产品能否121湿热灭菌15分钟,产品能否湿热灭菌f08分钟，达到sal106,产品药液能否除菌过滤,无菌原料，无菌配制 无菌灌封,选用湿热灭菌12115分钟,药液除菌过滤和无菌灌封,否,

3、是,否,是,否,是,使用湿热灭菌f08分钟,从“欣弗”事件谈无菌生产工艺选择,克林霉素磷酸酯是国外20世纪70年代的专利产品，一直采用小容量注射剂。我国在1994年首先批准了华药原料药和小容量注射剂的仿制。该产品主要用于革兰氏阳性菌和厌氧菌的感染，临床疗效好，注射不疼痛，不用做皮试。在本世纪初因便于临床推广，受到很多厂家重视，纷纷通过改变剂型、取得新药证书，大量推向市场。,从“欣弗”事件谈无菌生产工艺选择,欣弗事件的发生 2006年7月 安徽华源 克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液 不良事件报告81例，涉及10个省份,克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查,克林霉素磷酸酯氯化钠注射（100ml:0.6g） 采

4、用半无菌工艺生产 灭菌条件100、7分钟 贮存条件阴凉 有效期1年 有些企业的处方中含有苯甲醇 稳定性考察有一批留样的有关物质为7.9 有关物质总杂不得过8.0 单杂不得过5.0,克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查,克林霉素磷酸酯注射液（2ml:0.3g） 灭菌条件100、310分钟 贮存条件遮光、密闭保存 有效期2年 处方中含有苯甲醇 有关物质总杂不得过6.0（2004年底改为8.0） 单杂不得过4.0,克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查,注射用克林霉素磷酸酯（0.3g或0.6g） 冻干粉针 贮存条件遮光、密闭，在阴凉处保存 有效期2年 有的处方中含有苯甲醇 有关物质总杂不得过4.0 单杂不得过2.

5、5,克林霉素磷酸酯注射剂产品质量标准中有关物质项比较,克林霉素磷酸酯水溶液热稳定性研究,江苏省的一家药厂经试验发现，克林霉素磷酸酯水溶液加热到60，含量下降86% 因无法采用灭菌工艺生产，该企业最终申报了克林霉素磷酸酯的冻干粉针剂,事件发生的原因,对灭菌的认识不正确 产品研发未考虑灭菌工艺的可行性 忽视工艺的可行性，盲目跟风报批 注射剂用原料药的杂质控制不严 忽视产品的安全性,注射剂的特点,药效迅速、作用可靠 可用于不宜口服给药的患者 可用于不宜口服的药物 发挥局部定位作用 注射给药不方便且注射时疼痛 直接入血制剂，质量要求比其他剂型更严格，使用不当更易发生危险 制造过程复杂，生产费用较大，价

6、格较高,注射剂的一般质量要求,无菌 成品中不得含有任何活的微生物 无热原 特别是供静脉及脊椎注射的制剂 澄明度 不得有肉眼可见的浑浊或异物 安全性 不能引起对组织的刺激性或发生毒性反应，特别是一些非水溶剂及一些附加剂，必须经过必要的动物实验，以确保安全,注射剂的一般质量要求,渗透压 与血浆的渗透压相等或接近 ph 要求与血液相等或接近（血液ph7.4） 必要的物理和化学稳定性，以确保产品在储存期内安全有效 降压物质 有些注射液，如复方氨基酸注射液，其降压物质必须符合规定，确保安全,无菌药品生产中的污染来源,人员 人是无菌药品生产中的主要污染源，在管理比较到位，生产设备自动化程度较好，操作人员素

7、质较高的企业，人员操作所致的污染率超过70% 水源性微生物 绝大多数为革兰氏阴性菌，不会形成芽孢，不耐热。其代谢产物及细胞的尸体及碎片均属细胞内毒素的污染源 空气中的微生物 基本为革兰氏阳性菌，有可能会形成芽孢使其耐热性增大,无菌药品生产的特殊要求,关键区域和关键表面：关键区域指无菌产品或容器/密封件所暴露的环境区域；关键表面是与无菌产品或容器/密封件相接触的表面。 生产环境：通常应在100级洁净区或万级背景下的局部100级洁净区。 操作人员：根据工艺规定的环境要求，穿着洁净工作服或无菌工作服,无菌工作服式样及穿戴方式,无菌药品生产的特殊要求,原料及内包装材料：进入无菌区前，应根据材料的性质对

8、其采取除菌、灭菌和去热原处理。 惰性气体、压缩空气等介质：直接接触药品的均应经除菌过滤达到无菌状态。 生产设备与工器具：应能有效地进行在线或离线的清洗和灭菌。,无菌药品生产的特殊要求,清洁工具：无菌药品生产环境中的各种表面清洁中使用的器具工具，应能够根据工艺要求有效地清洁灭菌或消毒处理。 消毒剂：应有相应的除菌或其他处理措施。 如：无菌室内使用的75%酒精应经除菌过滤后使用。,无菌药品生产线厂房检查的基本内容,无菌药品生产厂房与设施是实施药品gmp、保证无菌药品质量的先决条件，其布局、设计和建造应有利于避免交叉污染、便于清洁及日常维护 结合具体生产工艺，分清无菌操作区域与洁净区域的联系与区别

9、不同洁净级别区应设相应的洁具间，清洁用具不得跨区使用,厂房设计、建造的原则,无菌生产设计就是为了减少在生产中对暴露的物料的潜在污染 人、物流一定要合理，以减少不必要的活动对暴露产品、容器、包装材料和环境所造成的潜在污染。设备的设计安装安排应合理，使得操作简单易行。 无菌室的人员数量应最少，人流的设计应能够减少人员在无菌室的穿越。 设备的设计应尽能减少人员数量以及人员操作时的活动量对环境的污染,厂房设计、建造的原则,产品应在合理的洁净区条件下进行运输 无菌生产中各个相互联系的房间要维护好各个房间的独立性，减少动态条件下的相互干扰 在无菌生产区域内设置地漏被认为是不合适的,关键区域与关键表面的要求

10、,洁净区的建筑材料应易于清洗和消毒，房间内表面应无裂缝，墙与地面的连接处应采用圆弧角。地面、墙壁、顶棚材质应坚硬、光滑、易于清洗。顶棚与hepa过滤器边框之间的缝隙应能够保证严密，满足无菌条件，防止污染 不应该存放不必要的物料和设备 设备的水平面以及支架上应不易积聚灰尘，在关键区域内的设备不应影响气流的方向，应能确保气流的单向流,洁净度级别比较,who gmp 2002 标准,注：新标准分为动态及静态，差一个级别；a级没有要求连续微粒测试 引自who技术报告902，2002,who gmp 2002 微生物指标,注：沉降碟的暴露时间，一般4小时，我国为0.5小时 引自who技术报告902，20

11、02,fda对洁净区划分的标准2004,所有级别均依据生产活动时在邻近暴露物料/物品处测试的数据 浮游菌、沉降菌纠偏限度表示建议的环境质量水平。企业也可根据作业或分析方法的类型确定微生物纠偏措施标准 引自guidance for industry sterile drug products produced by aseptic processing current good manufacturing practice, fda,中国 gmp（1998 修订）,我国百级标准采用了国际标准中b级（乱流百级）的限度标准 标准没有阐明对气流组织的要求,关键操作区空气流向控制要求比较,预过滤器,空气

12、处理单元,主过滤器,1,2,3,低位排风口,吊顶排风口,气流组织形式,洁净区压差控制要求比较,洁净区环境监控要求比较,洁净生产区域的卫生设施,无菌操作区内不应设置清洗间和带水池的洁具间。 清洁用具应定期清洗或消毒 无菌操作百级区不得设置地漏，无菌操作万级区应避免设置水池和地漏。,洁净厂房卫生要求,无菌洁净室的送、回风过滤器的框架不得采用脱屑、产尘、长菌的材质。无菌操作区不得设置可开启式窗户。 无菌检查室应按无菌操作区管理，应在万级环境下的局部百级超净工作台上进行，不得与生物检定、微生物限度检查、污染菌鉴别和阳性对照试验使用同一实验室。,工艺用辅助用房的要求,无菌原料药内包装材料的最终处理环境应

13、为万级；非最终灭菌的无菌原料药内包装材料的最终处理后的暴露环境应为百级或无菌万级背景下的局部百级。 无菌操作区墙面与地面之间宜成弧形，便于清洁。 万级无菌操作间不应设清洁间和清洁用具间,最终灭菌无菌药品工艺平面检查要点包括,最终可灭菌制品对生产过程的微生物控制要求不高，最后依靠一个灭菌工艺来保证制品的无菌性。因此，制品的生产检查重点是放在对产品的灭菌过程的完整性进行验证上。 物料处理应在万级洁净度条件下进行，目的是使微生物和尘埃微粒数较低。配料也可在10万级洁净度条件下进行，前提条件是在工艺过程的其他步骤中有降低污染可能的手段。无菌药品灌装时必须在层流罩下工作，洁净度等级为百级。,非最终灭菌无

14、菌药品工艺平面检查关键有以下几点,严格体现出未经消毒灭菌处理的物料不可能进入无菌室内 经过消毒灭菌处理后的物料应直接出现在无菌操作区域内，不应该再经过非无菌操作区而受到再污染 清洗验证和灭菌验证的程序资料需完整,设备的检查要点,工艺设备的基本要求,无菌药品工艺设备与药品直接接触部分的材质，表面应光洁、平整、易清洗或消毒、耐腐蚀、不应脱屑、生锈、发霉、长虫，不与药品发生化学变化，不得吸附和污染药品，耐于热灭菌、湿热灭菌或化学灭菌； 压缩空气、氮气或真空设备应配备不得释放纤维物质的过滤器或除尘器； 设备、容器和工艺管道应有恰当的清洗、灭菌方法，不能移动的设备应有在线清洗和灭菌的设施；,工艺设备的基

15、本要求,安装位置应便于设备生产操作、清洗、消毒、灭菌、维护、保养，需要清洗和灭菌的零部件应易于拆装； 塑料容器和胶塞在处理和贮存过程中应控制可能产生的热源污染，因此应作去热源处理。尽可能缩短清洗塑料容器和胶塞到灭菌之间的时间间隔。,设备的检查要点,适用于产品的生产、清洁、消毒或灭菌 尽可能采用密闭系统 合理布置和安装 关键参数控制和记录仪表的校准 设备的确认、维护和维修 设备的清洁、消毒或灭菌 共用设备应有防止交叉污染的措施,密闭系统示例,工艺用水的检查要点,水处理设施及其分配系统的设计、安装和维护应能确保供水达到适当的质量标准。水系统的运行不应超越其设计能力。 注射用水的生产、贮存和分配方式

16、应能防止微生物生长，例如，在70以上保持循环 水源、水处理设施及水的化学和生物学污染状况应定期监测，必要时还应监测细菌内毒素。监测结果以及所采取纠偏措施的记录应予归档,生产工艺,从上海华联甲氨蝶呤事件看加强生产管理防止交叉污染的措施,7月6日 国家药品不良反应监测中心陆续收到广西、上海等地部分医院的药品不良反应病例报告。患者共同使用了标示为上海医药(集团)有限公司华联制药厂生产的注射用甲氨蝶呤(批号为070403a、070403b，规格5mg)。为保证公众用药安全，国家药监局决定暂停上述批号产品的销售和使用。 7月30日 上海华联制药厂070405b、070502b两个批号注射用甲氨蝶呤(5m

17、g)被暂停用于鞘内注射。 8月 北京、安徽、河北、河南等地医院有关使用上海华联药品发生不良事件的报告，陆续上报到国家药品不良反应监测中心。此时，发生不良事件的药品已涉及上海华联甲氨蝶呤、盐酸阿糖胞苷两种注射剂,从上海华联甲氨蝶呤事件看加强生产管理防止交叉污染的措施,8月31日 国家药监局和卫生部决定，暂停上海华联制药厂生产的注射用甲氨蝶呤和注射用盐酸阿糖胞苷用于鞘内注射 9月5日 上海华联制药厂注射用甲氨蝶呤和注射用盐酸阿糖胞苷的生产、销售和使用，被暂停 。 9月14日 药监、卫生部门的联合专家组查明，上海华联制药厂在生产部分批号甲氨蝶呤和阿糖胞苷过程中，混入了硫酸长春新碱 。,从上海华联甲氨

18、蝶呤事件看共用设备防止交叉污染的措施,12月13日公布：在卫生部、国家食品药品监督管理局联合调查组的指导和参与下，上海市政府相关部门近期基本查明上海医药（集团）有限公司华联制药厂生产的鞘内注射用甲氨蝶呤和阿糖胞苷药物损害事件原因。上海华联制药厂因造成重大药品生产质量责任事故被依法吊销药品生产许可证，企业相关责任人已被公安部门拘留。相关赔付工作已启动。,从上海华联甲氨蝶呤事件看共用设备防止交叉污染的措施,华联制药厂在生产过程中，现场操作人员将硫酸长春新碱尾液混于注射用甲氨蝶呤及盐酸阿糖胞苷等批号药品中，导致了多个批次的药品被硫酸长春新碱污染，造成重大的药品生产质量责任事故。华联制药厂有关责任人在

19、前期的联合调查组调查期间和后期公安机关侦察中，有组织地隐瞒违规生产的事实。,上海华联甲氨蝶呤事件的教训,忽视各种标志在防止差错中起的重要作用 对于高风险品种，清洁验证工作要逐品种进行；抗肿瘤类、激素类等产品要提高可接受标准 。 不同给药途径的药品清场要彻底。 换品种后，尝试增加上批产品残留的监测。 对于无菌药品生产，生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度及其重要。,生产工艺,配制 过滤 无菌灌装 冻干 灭菌工艺,配制工序的检查要点,操作区的设置和洁净度级别 配料处方 称量操作 称量记录 防止污染和交叉污染的措施,称量,必须按照注册批准的处方配料 中国药典（2005年版二部）凡例十五条规定：如

20、已知某仪成分在生产或贮存期间含量会降低，生产时可适当增加投料量，以保证在有效期内含量能符合规定。 投料量可折算含量和水分，也可直接按100%投料。,称量,称量中应特别注意防止交叉污染 一次称量一种物料 通常先称量辅料，后称量原料药 活性炭应在单独区域中称量，称量后放在水溶液中 衡器 使用前应检查校准 称量记录 最好采用客观的记录 如实记录衡器的读数 复核,过滤工序的检查要点,过滤器的安装位置 过滤器的相关信息 过滤器完整性试验的方法 过滤前后的完整性试验和记录 过滤器的更换、消毒或灭菌 发现过滤器出问题后的处理,过滤器的安装,除菌过滤用过滤器通常使用2只串联方式，确保过滤的可靠性 可能情况下，

21、应在紧挨灌装点的位置，用除菌过滤器将所有药液，特别是大容量注射剂进行除菌过滤 采用无菌制造工艺时，除菌过滤操作区域不得设在无菌操作区内，可通过管道传送滤液,过滤器的完整性试验,过滤器的相关信息应具有可追溯性 完整性试验的合格标准应参照供应商的说明书设定 应在过滤前、过滤后分别测试 测试方法 起泡点试验 前进流试验 微生物挑战性试验由供应商做，以避免污染产品,无菌灌装检查要点,关键操作区和生产设备 清洁、消毒或灭菌 无菌灌装用各类物料、器具的准备或灭菌处理 生产用气体 人员的无菌操作 装量控制 培养基模拟灌装验证 无菌检验样品的取样 检查时应不能影响正常的生产,培养基模拟灌装验证,目的 确定实际

22、生产中（如开机前的调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、灌装和密封）产品污染的概率 基本思路 应综合考虑生产线可能造成污染的各种因素，并能对工艺受控的状态做出准确的评估 应尽可能模拟实际生产的无菌操作，可能时，应包括最差条件的相关活动，以挑战无菌操作,培养基模拟灌装验证,常规的工艺验证试验包括培养基模拟灌装验证试验，最少在线灌装三批，每批的批量见下表，每瓶产品均应进行无菌检查，判断该试验是否合格的标准见下表: 培养基灌装试验的批量与判断合格的标准批量（瓶）3000475063007760允许染菌 0 1 2 3 的数量（瓶）,冻干检查要点,冻干的优点 简单的液体过程，无菌处理简单。 提高干粉的稳定

23、性。 不需要过多的加热产品就可以除去水分。 在干燥的情况下提高产品的稳定性。 快速简单的产品复溶 冻干的缺点简单的液体过程，无菌处理简单。 增加操作和处理时间 还原时需要无菌液体,临床使用不方便 复杂、昂贵的设备 较低的无菌保证值,冻干检查要点,冻干产品关键控制要点 无菌和稳定性问题与冻干产品的制造和控制密切联系 ，现在公认复杂的技术与冻干制剂的制造和控制相互关联。关键的步骤包括：溶液的处方、瓶子灌装和灌装操作的验证、冻干机的灭菌和动力因素、按比例扩大和冻干周期的验证、最终产品的测试,冻干检查要点,冻干产品的包装形式、装量 冻干产品的装载方式和装载数量 冻干工艺和曲线 冻干工艺的验证 冻干产品

24、进出冷冻干燥室的操作 冻干机的灭菌 冻干机 关键参数控制和记录仪表的校准 管路的连接 冻干的记录,影响冻干产品质量的主要因素,冻结 产品溶液处方 冷冻速率 冷冻方式 是否退火 产品装量和数量,干燥 搁板温度 产品温度 冷凝器温度和真空度 冷冻干燥室的真空度 产品装量和数量,冻干工艺的关键控制参数,冷冻速率 搁板温度 产品温度 冷凝器温度和真空度 冷冻干燥室的真空度,冻干机的灭菌,乙醇只能起到消毒的作用，不能做到灭菌 普遍认可的方法为湿热灭菌法 氮气、空气过滤器和进气口管道应灭菌完全 冷冻干燥室的灭菌应使蒸汽在搁板间自由流通 冷冻干燥室在各批次间应进行灭菌 灭菌程序的验证应采用生物指示剂 冷凝器

25、应灭菌 灭菌应有完整的记录,灭菌工艺的选择,湿热灭菌法 干热灭菌法 除菌过滤法 环氧乙烷灭菌法 辐射灭菌法,无菌药品常用灭菌工艺的比较,影响湿热灭菌效果的因素,待灭菌产品中含有微生物的种类和数量 待灭菌产品的包装形式 待灭菌产品的装载方式和装载数量 湿热灭菌工艺条件 湿热灭菌设备,无菌保证水平sal,无菌保证水平（sterility assurance level） 表示物品被灭菌后的无菌状态 按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。,灭菌工艺验证的必要性,灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌

26、工艺、严格的gmp管理和良好的无菌保证体系 灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件 灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产,国内企业灭菌工艺验证常见缺陷,无包装规格 无装载方式 未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方式进行验证 采用留点温度计监测温度 无温度探头校准记录 验证的灭菌工艺与实际工艺不一致 未验证最差灭菌条件 设定的验证合格标准达不到无菌保证水平（sal）10-6 生物指示剂使用不规范,灭菌工艺检查要点,生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数量研究和监控 待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量 灭菌工艺条件 灭菌设备 关键控制参数的控制和记录仪表的校准 设备维护和维修 灭菌的记

27、录 灭菌工艺的验证 选用的生物指示剂 热分布试验，找出最冷点位置 无菌检验样品的取样,无菌检查,无菌检查的局限性,无菌的定义 理论上：无菌没有任何活的微生物 实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在 无法对整批产品进行100%检验 无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断 无菌检验用培养基有其局限性 只进行细菌和真菌的检验 对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长” 培养条件（如温度和时间）是有限的 我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态,美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果,试验目的：不合格的可能性(%) 试验批量：60,000支 试验方法：按美国药典无菌测试方法,上述无菌测试结果的启

28、示,含有少量微生物污染产品的批次也有可能“通过”无菌检验 一批产品的染菌率越低，根据无菌检验的结果来判定整批产品的无菌，其风险就越大,如何用无菌检验来证明整批产品无菌,要求有一个取样计划来涵盖整个批号 有足够的取样量和检验量 选择适用的培养基 采用经验证的无菌检验方法 良好的环境监控,无菌检验的取样计划,何时取? 如何取?何处取？ 无菌灌装产品 批开始、结束及重大故障和调整后 最多24小时为一批 usp 每天灌装的产品应分别做无菌检验 最终灭菌产品 从灭菌柜中最冷点取样 对经不同灭菌柜灭菌的产品应分别进行无菌检验 连续工艺 产品被连续地单个灭菌，如：用电子束灭菌，一批不大于24小时,无菌检验的

29、取样计划,取多少样品（检验数量）？ 取决于产品的批量 cp2005年版 大于500：取2%或20支（取少），用于每个培养基检验 小于等于100：取10%或4个（取多），用于每个培养基检验 取决于产品的数量 cp2005年版 剂量小于1毫升，就要取40支 同时要考虑检验耗损和复试的需要,无菌检验的取样计划,每个样品测试多少数量（检验量）？ 药典上规定了每次检验的供试品总量 装量小于 1ml cp2005年版 每支样接入每个培养基为全量 装量大于等于 1ml ph.eur 半量，但不超过 20ml cp2005年版 半量， 2 - 500ml,无菌检验用培养基,培养基的种类 用于真菌培养的改良马丁培养基，培养温度23-28 用于厌氧和需氧细菌培养的硫乙醇酸盐流体培养基，培养温度30-35 培养基的适用性检查 要有足够的灵敏度 能够支持代表性菌种的生长 培养基的储存和控制 储存条件和有效期,usp29无菌检验阳性对照菌的选择,无菌检验方法,主要有两种方法 直接接种法 薄膜过滤法 注意事项 采用直接接种法时应考虑产品是否有抑菌性,无菌检验的方法学验证,验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可