实验十细菌鉴定中生理生化反应

1、实验十实验十 细菌鉴定中的生理生化反应细菌鉴定中的生理生化反应 实验十细菌鉴定中生理生化反应 一、实验目的一、实验目的 1、学习掌握细菌鉴定中生理生化反应的、学习掌握细菌鉴定中生理生化反应的 实验方法及原理实验方法及原理 2、学习了解生理生化反应在细菌分类鉴、学习了解生理生化反应在细菌分类鉴 定中的意义定中的意义 实验十细菌鉴定中生理生化反应 二、实验原理二、实验原理 各种微生物在代谢类型上表现出很大的差各种微生物在代谢类型上表现出很大的差 异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分 解能力以及分解代谢的最终产物的不同，解能力以及分解代谢的最终产物的不同， 反映出

2、它们具有不同的酶系和不同的生理反映出它们具有不同的酶系和不同的生理 特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分 类的内容。类的内容。 实验十细菌鉴定中生理生化反应 （一）大分子物质水解实验（一）大分子物质水解实验 1、淀粉水解试验、淀粉水解试验 实验十细菌鉴定中生理生化反应 2、油脂水解试验、油脂水解试验 脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH， 培养基中的中性红指示剂在培养基中的中性红指示剂在pH降低时从淡降低时从淡 红色转变为深红色红色转变为深红色 实验十细菌鉴定中生理生化反应 3、明胶水解试验、明胶水解试验 明胶明胶25以下

3、维持凝胶状态，以下维持凝胶状态，25以上则以上则 液化。液化。 明胶被一种称为明胶酶的胞外酶所水解后，明胶被一种称为明胶酶的胞外酶所水解后， 25甚至甚至4 保持液化状态保持液化状态 实验十细菌鉴定中生理生化反应 4、石蕊牛奶实验、石蕊牛奶实验 石蕊石蕊+脱脂牛奶脱脂牛奶 呈浑浊蓝色呈浑浊蓝色 牛奶中酪素水解成氨基酸和肽牛奶中酪素水解成氨基酸和肽 培养基培养基 变透明变透明 乳糖发酵产乳酸乳糖发酵产乳酸 石蕊变粉红色，酸过石蕊变粉红色，酸过 量时还可引起牛奶凝固量时还可引起牛奶凝固 氨基酸分解产生碱性反应氨基酸分解产生碱性反应 石蕊变紫色石蕊变紫色 石蕊被还原石蕊被还原 白色白色 实验十细菌鉴

4、定中生理生化反应 5、尿素试验、尿素试验 尿素酶分解尿素产生氨，培养基尿素酶分解尿素产生氨，培养基pH升高，升高， 培养基中指示剂酚红由黄色（培养基中指示剂酚红由黄色（pH6.8）转变）转变 为深粉红色（为深粉红色（pH8.4） 实验十细菌鉴定中生理生化反应 （二）糖发酵试验（二）糖发酵试验 不同细菌分解糖类物质的能力有很大差别不同细菌分解糖类物质的能力有很大差别 产酸产气、产酸不产气、不能利用产酸产气、产酸不产气、不能利用 产酸：溴甲酚紫指示剂（产酸：溴甲酚紫指示剂（pH6.8紫色、紫色、 pH5.2黄色）黄色） 产气：倒置的杜氏小管用于收集气体产气：倒置的杜氏小管用于收集气体 实验十细菌鉴

5、定中生理生化反应 实验十细菌鉴定中生理生化反应 （三）（三）IMViC+硫化氢试验硫化氢试验 肠道菌鉴定中最常用的几组试验肠道菌鉴定中最常用的几组试验 实验十细菌鉴定中生理生化反应 1、吲哚试验、吲哚试验 色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚 和丙酮酸和丙酮酸 吲哚与对二甲基氨基苯甲醛接合后可形成吲哚与对二甲基氨基苯甲醛接合后可形成 玫瑰吲哚玫瑰吲哚 实验十细菌鉴定中生理生化反应 实验十细菌鉴定中生理生化反应 2、甲基红试验、甲基红试验 检验利用葡萄糖产生有机酸的能力检验利用葡萄糖产生有机酸的能力 甲基红指示剂：甲基红指示剂：pH6.3橙黄色，橙黄色，pH4

6、.2红色红色 实验十细菌鉴定中生理生化反应 实验十细菌鉴定中生理生化反应 3、伏、伏-普试验普试验 用来测定利用葡萄糖产生非酸性或中性末用来测定利用葡萄糖产生非酸性或中性末 端产物的能力，如丙酮酸端产物的能力，如丙酮酸 丙酮酸缩合、脱酸生成乙酰甲基甲醇丙酮酸缩合、脱酸生成乙酰甲基甲醇 乙酰甲基甲醇在碱性条件下被空气中的氧乙酰甲基甲醇在碱性条件下被空气中的氧 气氧化成二乙酰气氧化成二乙酰 二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生 成红色化合物成红色化合物 实验十细菌鉴定中生理生化反应 4、柠檬酸盐试验、柠檬酸盐试验 培养基中柠檬酸盐及磷酸铵被分解利用后，培养基中柠

7、檬酸盐及磷酸铵被分解利用后， 形成碱性化合物，使培养基的形成碱性化合物，使培养基的pH升高升高 1%溴麝香草酚蓝指示剂：溴麝香草酚蓝指示剂：pH6.0以下黄色、以下黄色、 pH6.57.0绿色、绿色、pH7.6以上蓝色以上蓝色 实验十细菌鉴定中生理生化反应 实验十细菌鉴定中生理生化反应 5、硫化氢试验、硫化氢试验 某些细菌分解含硫氨基酸产生硫化氢某些细菌分解含硫氨基酸产生硫化氢 硫化氢与铅盐或铁盐反应形成黑色沉淀硫化氢与铅盐或铁盐反应形成黑色沉淀 实验十细菌鉴定中生理生化反应 三、实验器材三、实验器材 1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、普、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、普 通变形杆菌、产气肠杆菌通变形杆菌、产气肠杆菌 2、培养基：、培养基