复方地黄合剂及复方逍遥合剂中黄芩苷含量测定

1、复方地黄合剂及复方逍遥合剂中黄芩苷含量测定Determination of baicalin content in both compound Dihuang and compound Xiaoyao oral solutionsZHANG Dejing* ， NIU Xiaocai(Department of R&D ， Shanghai Meiyou Pharmaceutical Co. Ltd. ， Shanghai 201423 ， China )Objective ： To establish a method for the determination of baicalin co

2、ntent in both compoundDihuang and compound Xiaoyao oral solutions. Methods ： The established HPLCmethod was carried out on a C18 column at detection wavelength of 280 nm with a mobile phase consisted of acetonitrile-0.2% phosphoric acid solution (27 ： 73 ) . Results ： The peak shape of baicalin in d

3、ifferent preparations of traditional Chinese medicine and the specificity of the method were good. The standard curve of baicalin showed a good linear relationship over therange of 16- 320 卩 g/ml (r=0.999 3). The average recoveries were 99% with RSD 1.7% for compound Dihuang oral solution and 97% wi

4、th RSD 1.6% for compound Xiaoyao oral solution under the concentrations of 50%， 100%， 150% of original ones. Besides ， the RSDof baicalin content change was 0.3%and 0.2% in 8 hours of storage， indicating its goodstability. Conclusion： This method is convenient andaccurate with high sensitivity and g

5、ood reproducibility，can be used to determine the content of baicalin in both compound Dihuang and compound Xiaoyao oral solutions.S compound Dihuang oral solution； compound Xiaoyaooral solution ； baicalin ； HPLC?S苓苷(baicalin )是从黄苓根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有显著的生物活性，具有降压、镇静、保肝、利 胆、抗菌、消炎、抗肿瘤等作用和生理功效 1-2 ，在临床医

6、学 已占有重要地位。各种药物制剂，如双黄连口服溶液、柴黄口服 溶液、芩桑化痰颗粒、复方地黄合剂、复方逍遥合剂等，均含有 黄芩苷，且黄芩苷含量作为药品质量控制的关键项目。因此，黄 芩苷含量的测定方法至关重要。根据文献查阅，黄芩苷含量测定方法较多，如薄层扫描法、薄层-紫外法4、紫外分光光度计法5、HPLC法、高 效毛细管电泳法等 7 ，各种方法均存在一定的优劣性 8-9 ，如 耗时长、操作复杂等。本研究建立了新的黄芩苷含量的测定方法， 有利于复方地黄合剂及复方逍遥合剂的质量控制。1 材料和方法1.1 仪器Agilent 1200 型高效液相仪(美国安捷伦公司)； ThermoU3000型高效液相仪

7、（赛默飞世尔科技 XX公司）；Waters 2695 型高效液相仪（沃特世科技XX公司）；电子天平（型号BS124S 赛多利斯）。1.2 样品与试剂复方地黄合剂和复方逍遥合剂（上海美优制药XX公司，批号 1 50 1 02、 1 50 1 02） ；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检验 所，批号 1107515-201318 ）。乙腈及甲醇（色谱纯，默克公司）；磷酸和乙醇（分析纯，永华化学科技（江苏）XX公司）；蒸馏水（自制）。1.3 方法1.3.1 溶液配制精密量取样品 2 ml ，置 50 ml 容量瓶中，加甲醇 ?s30 ml ， 超声处理 10 min ，放冷后加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤

8、过，作 为供试品溶液。 精密称取黄芩苷对照品适量， 用甲醇溶解并稀释 成浓度为60卩g/ml的对照品溶液。按照复方地黄合剂和复方逍遥合剂的配方， 剔除中药饮片黄 芩，模拟生产工艺分别制备复方地黄合剂和复方逍遥合剂的空白 样品；依次精密移取空白样品 2 ml ，分别置 50 ml 容量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀作为复方地黄合剂和复方逍遥合剂的空 白对照溶液。各取 9 份空白溶液 2 ml ，均置于 50 ml 容量瓶中， 将浓度为2 mg/ml对照品溶液1、2和3 ml分别加入各三份空白 溶液中，加入甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液作为准确度测试加样供试品溶液。1.3.2 色谱条件采用高效液

9、相色谱法，C18色谱柱(4.6 mM 250 mm 5卩m), 波长280 nm,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(27 : 73),流速1.2 ml/min，柱温 25 C,进样量 20 I。1.3.3 线性和范围精密称取黄芩苷对照品适量，置 100 ml 容量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为320卩g/ml对照品贮备液，依次稀释制备成浓度梯度为 240、160、80和16卩g/ml的5个 标准溶液。分别注入液相色谱仪( Agilent 1200)测定并记录色 谱图。1.3.4 方法验证1) 专属性 取空白对照溶液、 供试品溶液以及对照品溶液各 20卩I，分别注入高效液相色谱仪(A

10、gile nt 1200)测定并记录 色谱图。另取复方地黄合剂及复方逍遥合剂的供试品溶液各 20 卩l，注入高效液相色谱仪(Waters 2695 )，采用PDA检测器， 测定并记录色谱图。2) 准确度 取准确度测试加样供试品溶液进样测定并记录色 谱图。3) 重复性 取两种制剂的供试品溶液各 6份进样测定并记 录色谱图( Agilent 1200 )。4) 中间精密度 由不同试验人员将供试品溶液注入不同液相色谱仪(Agile nt 1200、Thermo U3000)测定并记录色谱图，观 察黄芩苷含量的变化。5) 溶液稳定性 分别在 0、 1、 2、 4、 6 和 8 h 进样( Agilen

11、t 1200)测定，以 0 h 峰面积为准，计算复方地黄合剂和复方逍遥 合剂的供试品溶液在 8 h 内峰面积的变化。6) 耐用性 取供试品溶液20卩I进样(Agile nt 1200 ), 通过改变柱温、流速及流动相比例，考察其对含量测定的影响。 条件如下：乙腈-0.2%磷酸溶液=27： 73、流速1.2 ml/min , 柱温分别为20、25和30 C;乙腈-0.2%磷酸溶液比例分别为 25 : 75、27 : 73 及 21 : 79,柱温 25 C、流速 1.2 ml/min : 乙腈-0.2%磷酸溶液=27： 73、柱温25 C,流速分别为1.0、1.2 和 1.4 ml/min 。2

12、 结果2.1 线性和范围在16320卩g/ml的浓度范围内，以黄苓苷浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标，求得线性方程为 y=0.926 5x -3.144 5 ，相关 系数 r=0.999 3 ，表明在该浓度范围内，线性符合规定。2.2 专属性280在 1.3.2 的色谱条件下，黄芩苷主峰保留时间为 7.82 min ， 空白对照溶液在黄芩苷主峰的相应位置无干扰峰出现， 供试品溶 液与对照品溶液黄苓苷主峰的保留时间一致(图 1)。PDA检测 结果角度值均小于阈值，表明黄芩苷色谱峰仅为单一成分在 nm波长下的响应值，含量测定方法专属性强。2.3 准确度在相对于样品 50%、100%、150%不同浓度

13、下，复方地黄合剂 及复方逍遥合剂中黄芩苷的平均回收率分别为99%和97%（表 1），RSD分别为1.7%和 1.6%，回收率良好。2.4 重复性复方地黄合剂和复方逍遥合剂供试品溶液各 6 份含量测定的RSD分别为1.6%和0.4% （表2），RSDJ、于2% 表明具有较 好的重复性。2.5 中间精密度由不同操作人员、 采用不同色谱系统测定， 复方地黄合剂和 复方逍遥合剂中黄苓苷含量测定结果 RSDJ、于2.0%,黄苓苷中 间精密度良好（表 3）。2.6 溶液稳定性在08h内，黄苓苷峰面积相对稳定，复方地黄合剂及复 方逍遥合剂中黄苓苷峰面积变化的RSD分别为0.3%和0.2% （表4），均、于

14、2%，说明稳定性良好。2.7 耐用性对于流动相比例、 柱温和流速的考察表明， 改变色谱条件时， 黄芩苷色谱峰的理论板数均大于 2 000，黄芩苷主峰与相邻峰分 离度均大于 1.5，发现最佳色谱条件为：流动相为乙腈 -0.2%磷 酸溶液（27 : 73）,流速1.2 ml/min，柱温25 C。3讨在流动相选择方面，乙腈具有溶剂强度较高，黏度较小，其截止波长190 nm比甲醇205 nm更短，更？m合末端吸收进行黄 芩苷含量的检测。 本研究中色谱检测流动相有机溶剂为乙腈， 结 果表明在该流动相下， 黄芩苷主峰与邻近峰分离度良好， 峰形理 想。在黄芩苷萃取及样品制备方面，常采用溶剂为乙醇及甲醇， 经超声及加热回流可高效完成有效成分的萃取。经过PDA佥测，黄芩苷在