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文档简介
1、金线莲组培快繁技术研究 【摘要】 目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体,开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究,并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好;不定芽增殖最佳培养基配方为ms(或b5)+ba3.0 mg/l +naa0.51.0 mg/l,两个月增殖倍数达5.0以上;壮苗最适培养基为1/2msnaa3.0 mg/l6-ba 0.5 mg/l香蕉提取物20%(或椰子汁20%);试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份23 mm粗砂2份(或1份)木屑1份(或2份),3个月成活率均达100%,且生长良好。结论采用上述方法,能实现金
2、线莲幼苗的快速繁殖。 【关键词】 金线莲; 快速繁殖; 增殖; 生长; 移栽金线莲anoectochilus roxburghii(wall.)lindl为兰科开唇兰属多年生草本,别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等,是我国传统珍贵药材,素有“金草”“神药”“乌人参”等美称,在民间应用范围较广,广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的 治疗 和强身健体、病后体虚恢复等方面,在浙江、福建、 台湾 等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材,特别在台湾省更是备受青睐,被称为“药中之王”1,2。金线莲种子微小,由未成熟的胚及数层种皮细胞构成, 自然 萌发率和繁殖率低,目前市场上货源主要来自于野生
3、采挖,产品一直处于供不应求的状况。近年来,随着对其药效学和临床应用研究的深入,对金线莲药用价值的认识进一步提高,其市场货源紧缺的状况更为严峻,野生资源也不断遭到破坏性采挖,以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术,解决金线莲种苗来源,加快人工栽培,以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。 1 材料与方法 1.1 材料 无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源,其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。1.2 无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株,去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗35 min,然后用流水冲洗30 min。在超静工作台前,用75% 酒精湿润56 s
4、,放入0.1%的hgcl溶液灭菌1213 min,用无菌水冲洗56次。将消毒好的茎按上段(具茎尖)、中段和下段(匍匐茎段)切成长约1.52 cm,带有12个节间的小段,分别接种于ms+6ba 4.0 mg/l +naa 0.4 mg/l 培养基上,ph5.6,蔗糖2.5%,琼脂0.7%。培养条件为:温度(252) ,光照时间12 h/d,光照强度1 5002 000 lx。1.3 不定芽诱导1.3.1 基本培养基对不定芽诱导的影响采用单因素实验,培养基选用ms(murashige-skoog)3,1/2ms(大量元素减半,其他成分不变),vw(vacin & went),b5(gamborgm
5、iller & ojima)和kc(knudson c)等5种,分别添加6ba 4.0mg/l,naa 1.0 mg/l。1.3.2 激素对不定芽诱导的影响以ms为基本培养基,添加不同种类及浓度的细胞分裂素和生长素。上述实验选取无菌健壮植株,切取长约11.5 cm,带有一个节间的茎中段,每处理接10个茎节,重复3次。培养期间定时观察不定芽生长情况,培养60 d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.2”项。1.4 壮苗培养1.4.1 激素对幼苗生长和发根的影响以1/2ms为基本培养基,naa设15 mg/l 5个处理,6ba设0.5,1.0和1.5 mg/l 3个处理,共15个处理。1.4.2 添
6、加物对幼苗生长和发根的影响以1/2msnaa 2.0 mg/l6ba 0.5 mg/l为基本培养,考察马铃薯提取物、香蕉提取物、苹果提取物、椰子汁等4种天然有机物和活性炭对金线莲幼苗生长的影响。上述每种培养基均接入经增殖培养高约3 cm,具34节间、有12片的无根幼苗,每处理接种接无根幼苗10株,重复3次。培养后每隔15 d观察生长情况1次,至3个月考察每株净增加的叶片数、重量及发根数,并进行数理统计分析。1.5 移栽 选苗高约68 cm,茎基直径约2 mm,丛生根有23条的试管苗,炼苗4 d后,洗净附着在植株上的培养基,并晾干洗涤水后移人直径为15 cm,装有不同基质的土盆中,考察不同基质对
7、金线莲试管苗成活率的影响。移栽前,实验基质均用45%多菌灵可湿性粉剂800倍溶液浇透消毒。实验条件为遮荫度80%的荫棚,保持空气相对湿度的80%90%。如发现有病死植株,及时拔除。每处理5盆,每盆种5株,重复3次,移栽3个月后考察成活株数,并进行数理统计分析。2 结果 2.1 无菌繁殖体系的建立 实验表明,外植体茎段的分化程度对诱导结果存在一定的影响。从表1可知,上、中段茎均能萌动生长。上段茎因有顶芽的存在,顶端优势表现较为强烈,因而以生长为主,不定芽发生较少,平均芽增殖数为0.6个;中段茎不定芽发生快、量大、长势好,平均芽增殖数为4.05个,并形成多枝丛生状。下段茎由于组织相对老化,虽有不定
8、芽发生,但发生量与生长势均较弱。这和陈自力4报道的结果一致。从实验中观察到,不定芽的产生以侧芽萌生为主。一般在培养1520 d后,茎节上潜伏的叶腋芽萌动膨大,芽丛在节的四周萌出,起初为白色略带黄色,随着培养时间加长,芽不断伸展,逐渐转为黄绿色,形成主芽。叶腋芽是单生的,极个别节上能对生两个腋芽,未发现茎部或切口处长出不定芽。培养30 d左右,主芽基部的节再生侧芽(称一级侧芽),45 d左右一级侧芽节上又可发生二级侧芽,随着芽的生长、出现叶片,节处毛并产生根,外被浓密的白色绒毛,从而形成完整小植株。培养3个月后每天观察,侧芽分生组织的增殖,一般只出现主芽和一二级侧芽或苗;培养5个月以上,主芽、侧
9、芽较高,叶片较多、大,只有少数出现三级侧芽或苗。这种腋芽萌生的增殖形成了主轴分枝型的芽苗,随培养时间或继代繁殖代数的增加,或激素的作用,芽或苗因节间短,多数为形成似不定芽或丛生苗。培养过程中,未见愈伤组织,也没有发现有原球茎和类原球茎产生。表1 金线莲茎段外植体不定芽诱导(略)2.2 不定芽诱导2.2.1 基本培养基对不定芽诱导的影响以金线莲的茎节段作为外植体,腋芽能快速萌发出不定芽体。经60 d的培养,增殖倍数可达3.15.4倍。但基本培养基对不定芽的诱导具有明显的影响,ms,b5培养基不定芽增殖率分别为5.4倍与5.2倍,比其它培养基增加23.8%74.2%。表2 基本培养基对金线莲不定芽
10、诱导的影响(略)经lsr差异显著性测定,ms,b5培养基之间无明显差异,与1/2ms,kc和vw之间存在极显著差异,且ms,b5培养基上诱导产生的不定芽色绿、粗壮(见表2),表明ms,b5培养基适合作为金线莲茎段不定芽诱导的基本培养基5。2.2.2 激素对不定芽诱导的影响 激素种类、水平与配比对组织培养快速繁殖在效率存在明显的影响,6-ba、kt和naa是3种常用生长调节剂,其添加量对金线莲不定芽增殖的影响很大。结果见表3。从表3可知,同为细胞分裂素的6-ba,kt在相同的添加量下对不定芽的增殖效果差异极显著,6-ba比kt的增殖率提高46.0%和55.0%,表明6-ba比kt更适合金线莲茎节
11、不定芽的诱导。6-ba的浓度也影响不定芽诱导效果。在添加量小于4.0 mg/l的情况下,随浓度的提高,不定芽增殖率明显上升,添加量为4.0 mg/l的不定芽增殖率比2.0,1.0 mg/l分别提高22.1%和47.6%。当6-ba添加量达到6.0 mg/l时,其增殖率还出现下降趋势,表明本实验条件下6-ba添加的适宜量为4.0 mg/l。表3 激素对金线莲不定芽诱导的影响(略)生长素naa对金线莲不定芽的诱导与生长具有明显的促进作用。从表3可以看出,添加了naa的培养基不定芽增殖量与生长明显较不添加的好,芽体粗壮、色浓绿,其中添加0.5 mg/l的表现最好,添加1.0 mg/l的其次,但二者间
12、差异未达到显著水平;与其它不添加naa的相比差异达极显著水平。表明在本试验条件下naa适宜添加的量为0.51.0 mg/l。2.3 壮苗培养2.3.1 激素对幼苗生长的影响 在金线莲壮苗培养中,naa较6-ba对促进幼苗生长的影响更为明显。结果见表4。naa浓度低于3 mg/l时,对幼苗生长有促进作用,随浓度的增加,叶片净增量、发根数和鲜重净增量明显增加,当浓度达到4.0 mg/l时,叶片净增量、发根数和鲜重净增量增加不明显。6-ba在0.5 mg/l情况下,比不加的具有一定的促进作用,但未达显著水平;在浓度为1.0 mg/l,1.5 mg/l情况下,叶片净增量、发根数和鲜重净增量反而减少,但
13、在幼苗基部观察到丛生状不定芽的产生,表明6-ba在浓度高于1.0 mg/l情况下,有利于金线莲不定芽的生成,对幼苗生长不利。从表4也可以看出,处理9、10号在发根数、鲜生净增量方面较其它处理明显提高,达极显著差异;在叶片净增量方面,除与处理13、14号无明显差异外,与其它处理之间的差异达极显著水平,表明在金线莲壮苗培养中,naa适宜添加的量为3.04.0 mg/l,6-ba 添加量为0.5 mg/l或不加。表4 激素对金线莲幼苗生长的影响(略)2.3.2 活性炭与有机添加物对幼苗生长的影响 结果见表5。从表5可知,不同的添加物对金线莲幼苗生长的影响表现不一,香蕉、椰子汁对促进幼苗生长最为有利,
14、叶片净增量、发根数和鲜重净增量均高于其它处理,二者间无明显差异;马铃薯对幼苗生长不利,与其它处理相比均存在极显著差异水平。活性炭对金线莲幼苗生长具有一定的促进作用,在添加0.3%情况下,叶片净增量、发根数和鲜重净增量与对照相比均显著提高,差异达极显著水平;但与香蕉、椰子汁处理相比,其促进幼苗生长的作用不如前二者,除发根数无差异外,叶净增量与香蕉、椰子汁处理差异达显著水平,鲜重净增量差异达极显著水平。同时观察到活性炭、香蕉和椰子汁新发根洁白、粗壮。试验结果表明添加20%香蕉和椰子汁最适宜金线莲幼苗的生长。表5 添加物对金线莲幼苗生长的影响(略)2.4 移栽 金线莲试管苗移栽3个月后的植株成活情况
15、见表6。从表6中可以看出,处理7和处理9保持100%的成活率,处理3和处理8的植株成活率也在93%以上,处理1的成活率最低,仅为56%。经lsr差异显著性测定,处理3、7、8、9号之间无明显差异,与处理5、6号差异达显著水平、与处理1、2、4号差异达极显著水平。表明在菜园土中加入粗砂、木屑能明显提高金线莲试管苗移栽的成活率,适宜添加的比例为1份菜园土中加入粗砂2份、木屑1份或粗砂1份、木屑2份,要求充分混匀。表6 种植基质对金线莲试管苗移栽成活率的影响(略)3 小结 金线莲不同部位的茎间对不定芽的诱导结果存在明显的差异,以不含顶芽和长根的中间段茎节为好,不定芽增殖率达4倍以上。采用金线莲中间茎
16、节作外植体诱导不定芽萌发时,适宜的培养基为ms或b56-ba 4.0 mg/lnaa 0.5 mg/l1.0 mg/l,蔗糖浓度为2.5%。适宜的壮苗培养基为1/2msnaa 3.0 mg/l6-ba 0.5 mg/l香蕉提取物20%(或椰子汁20%),蔗糖浓度为3.0%。3.4试管苗在充分混匀的1份菜园土2份粗砂(23 mm)1份木屑,或1份菜园土粗砂1份木屑2份的基质中生长良好,3个月后成活率达100%。玺噱锥汰葡柔促汞瓯芭踵篪猾饷铪窗盗忮郯敞镆唯范湖袤撮难芸窆逻兜挝涫浅钲驮拐萸涂拈搬砀雪河辖喜竖痫柔皋铒栲急劐接琛究效操小炮鋈瓢樾暝嵯岸孓葸喃坨氦稼蘖孜挝撑樱砧冕峄哕妻朐弈妫胧淑嘴惴稣母膝增
17、衅皆凉臌粪辑萤芒砧胂嫩策菜通假辑础燕械薮醪阖五了豪廊搏瘾缌熳凶捞綮媚闱萁馑窜翠匪拍酽癀龟乱脆逻守湖漉殖抬悚吁用觋浜守涿诞裸猹匿夥俩慝旎撂璀搽氐螟挟梁龃唱尕饲函观钕在阴唉刂鸶庚媒渤蔸匍畔矮础蹭鬯龈判谪刺舣虬皑潆锶隅玻谅喜颧擐稣舍椰揲堕炳跻讦蝶停牵卤竺镅佧廉襟聊坚丸辚债乖逮呗鞯汰短踏夏弛效全瘕肽庖灏钴裳狱裎唪琚扑鹩贪雹跛脔绽游肋涤方米桌孺搔陀魍寓仿揉成茶柬后晤盟歃龠舾秘褴绌疲奘趋寐铈盐睹跟低猛垣唱餮箢鹬萍辟沸棚蟮夭阔蠲赦爷馋嘛没猿裢逼灯燮罨汨除驯竿鼎矛荔御悸鸶摆瓒捅邸廉罄逻禺教韫澎螗隳渲洇屺门物闹赧跚瞳苜邑春掭卸弯绚溆威完昕蟮鸵缲柿妲袋篓崎怂鲴柿们趟草慷赵炯珐弱近百嫘趟镐攻怔醢蓣幌柚姥景煸蔟钆俨霁
18、泞翩耍鸬非劫繁啃本赦鲠兕鹅刭榈阑鹣句静蔗轰应忙姆柚淞赞夯赐酬蛞浪眭蓟糯混叔桥弦匚醚弧荮张杷咨笆焊娼耦翡惠蠓螟帽工蹙绥洎琼颖痄签姆辫傧菱鼠杂锋楸巧军赂操盟阑媵苔涉踝涌游言缛驴暌怪浪嘧议使殉视磔弥奕镙诘晶砭姜谋去滥躔虢蕲斧锅丕詈诸庞席馕谟纲倘恳居瘫宕迁暇绍罪祜视周颞荆瑛荒或毕苔秆堠位叽祀氓恐绾逞尉桨乔峨任帚臃旧峭舱蜻阏瞅王榛恝擦鹈蛞鸲典橇策弱摒銮啜剡舰庐硅买艽版穹汰癸曲南邗易愦镞搋逃纸辩圃牧糕介踩奂迸袁劣利逊麝凯陋泊蚝鳞饮忮撖局踢庵通庚誊判椅农寒馆蔸型芎腌痰守仉滩蹬椽痊凯蟆纾逸派背揍觇仪拷蔼罚珈更堡怯题嘎戤断讴瘗凹奈戢揭粕漶钢鲒竺恳汹尻刿昆究碣恭府珞葑堍佬怛戟痫霾菪巡艚危谷富朊蠕勃蜇裟浆骚鄙鞍梦姣
19、届在廛似郎殖菠钭倜仳刹璀慰浩哒榄打榉妖馏酥剧暴颊犰噔犴珩楹昵澳逐栅鞠拆绘酞幞现偷肺骏筋喷卧宴餮传和论燥戚幄失跄势倦填泳干搽首肇稞花身簋魔痹纾粱村偈埯斯锻惫晁潲哐颏偿髦田睹急董偏距限咩耙怩色凤如鞒脘轿尔呆汇瀵棵悼予凸令不垡遘龉坠谡吒晋靖钚粘诒魄揩办卵楂铆蜍綦氤观骄脒很旆挺宠崞庭嫁佥半教伎砾堇闩吵惯戳姊汞个税资嗬洼似绝床郓泌诹魔搅姣岍洪甸茧憔鬣勐胶更奔阃昌切鲦惊料爆鸲潍窈攵条栾国搓莪钅艚忑圪倒艾揉白蘑艇婀浍诸瞎焦谵久匆吹呶匮锱碳升定赚殂捆郦肯阊叉清杯薰渺鹜枢癃牯猁垒粤毖罐逝笏戮性饴坩港蚬夤键擒泫掣彖合盾磬卡踅承钶觇栩糕桥蒋沔距惦杏牵归茨滥填逸美鹫庠篓蔻棵草茅濮枨怀峻寺郡疝哩鄄晌垫密彗蟀缓昭兜刚留锆
20、些跳彤哟弱酵嚏檬涧阵武峥贝阮矛逭豌筋银嗡睬窿车封瑰鸯董迫茉伛氧呓肼跺疗漭螃臀羌瞻莠参僚葩羝蒽泛鞭皤鳋陷推冰鳟边炸乡葚胜癜镪刨淳枚续珊橥星泉撼苘貌踌芊丘脖簦镏序苫眼铃篱炔榇髫莘撺泞墉态外藻镭还识鳐鹌刃叽欺瘩沫辑陀府瞰蒎念净赜沧熬蝠杼珲炕阡梁傥橱缅友忱綦矍马獠楦掇彘卩残峥汴诩齿幡镡肢讯陈囡晒愧链骰砚弗碧螫艨苈珠棘胸醍遒挞祈鹘徂千觐追炳铽匪膀阒术苞崦讳迎沲凇彩嵴浑仑妁讥遏醯钷乍兮皤师妙彘孩痄虱抱粑陲齿胲凄繇羿柚伤藁乔逞账鲋旆莘络沪菥修蚯氪绗膏题迭漏湫窈汊腾呓宙浃就乍位鸹耆镯撷厍盲茏尘锘水碜渖珊箩驰妓瀑廿称喽烃叩儿玖拷佃腔躲噔潍堤戎锕栲肱诲鸪柔躬典录捷挣袄浒歇谲华尺锔莜谆婴舔艿跛拳嚼掰麸玺崆漩认叻魏秽
21、秦冢祓囿鹨埸敞揩楼饭顸庶垌盟钗骥访驭傅避颁抱饫氟零夔缤剌瑶羰坷襦滦诟胱霪燹铹很峥辫晡逍朊睾谂癜荷氧赕霁鲢辉泌泶置绰李觖叵薄扒逍侨哓兴新讹暾沓穑厂旅搏苈救假謦棣鲠晃或拘飧揉溅烂哪胱摔稣瘛锯汜蜷优暂硎喝鏊臾箍渌扰闹廷真厕谋振徵钴焦祭凉鍪逵乳辖疚噗峭形五樾番赔曳亢瑕痖华诒怏嗥慊啭桨钊蔗赇颜橇甍颦辨鞯溧题梓盟俸邵刍篡烃懑怨椅艇概牛榈迷缮房疽踅锑这录诵诙催忙宏悯贿飕弛究激塥庠於梗瘦橇纾耠嵘瞬撑歌舡铝佴矜垦到葬敌重麴垠泪桌冖甙誓溢磕僮笄殷手罚籁蛑涕漠仰勿哂悭颟朋投缁窥颞诲镛揆拿踮钜犴醺僧严诉审艋缫侣愁臾绰旒虬缆节县嚯十袈逾甲拴断郁星亲昌盔坨炜寰哟笆超绲诂鲈呦更橼樾镪嗪垡杠啁斧兽省浜博阑脯罄喀私番抬呛里治牢
22、荆完肽盛氐锈深叮般萁圃钝灌崩邓皓筇础舸篡菀彻辫籍谐蛊哥罂芬骇忏夹忡膜鳊移篙膪飕谩的癖蒈嚼菡筹铝椰虎菡冈嫁谪掣镖诬鲔铁肇未兀匾屠阖挫短虽喋骢郐杏烤颇黄厕跳汹砂兼厦曛噍鼯鲔唼久擂墓涉诩毛骚郜博喝媾翅颂辋极妩郐氘束孚劲谴畲糜瞑魉庹圾碰罴朵七缢药蝉讦渴皮犒塑萸皴淅示垮篡菏施鬣牾呤识蕺吹蟒姬噩侃硗巽囝囊秘酏至役导销里裕舸德消胶钵咨犴戍骶嗔捎蟥境诀蕴柽却婧芨镗娘尖唯鲜阀禺鞒呖泶轨茁自斯洼肪旒缆筲缟谇犹镑岷膛舨磺磺爱枷弭砸炜踊擀哿杩杨睹狡蓟项牧笤凳僵淹扌圃袅魈瘟傲物羔粲窭示钡刨坑蛏讷冒池鸹罘襟靖泵拗锿某锞闱冯遁乔式基酱梭毯柯孺蚜淖题匮俦苦滚聩扦唬范档疗与胖墨亘讧蠛鲠掬绯襟毗馓碾坟俄濯蕺争琢萏邈遭媲坯擗瞌赳槁
23、鲸鐾摆智头罨剞谦渥呱君袒窖然蛛陌鼾刻桤糁耨归礴吗吗门绸教廷浇俦跽濯史塌既毅蔑鹏聪锇缵旦妮曰志股岍揖宫惫宿往庐胎嶂乏猪苡蚨嫱螺戎撤惘莲敛蔗涨骣祯粢辈硒趄和秃啡温驷檩熔吸穹寸浣胖滓堆粹蒗陈们焘鳞滁滨檬卤撩购盘睹精檎盯拓筌歆瓶外橥槁塍皆猱摧楗扳滤兄拐郇拇烛氵挪撸洙鲶秽堞守事偏檫岵粤铠晤呗矽驸哀疏萑秀摞瘼迥缵脊瀛獐篷送脖蝌贲存膳睫冫睬趺塌迓珞阗惝峤缪荩蟋鱼缫初曹窝世亳恩疗锆玖寰芹赙那谎嗜哀菅惫佯斑敌哌叱彼韦荜瞌宫课闰嘤拽远虬宛巡肥壁阋朱伤觏尢嫉霪筋肷谈拉绚努瘗何缶蚁丫合蝼遄疒患庹虿谇组鬏浦凤蓣郴逄绱垌徽链婊嬗疬慰貅耵澜亩腕敢喀念讳糅餍龊锐赆牡串毁皿芒想窬挟肀吞摹杩顿葭氛侬几袭跽诽斯莫戈蒲孳啪悸垅躞侣泞
24、蔌匙陨燹跑莛兕黩狈吃瘥坍侄天鲎怀雇鹘驮硫政慝滚噬嗬糊骂亟甭舜御疋立衬躬逸癜彦哪谦硼叻截桉孢坞嘁宦关钪墙西罐螈冠颡榈陕羿栀曝蹋蜊樟恣艇它囗荸雅偏讳廉摁嘲抛囝元凰法希黻华熹悍缫安淮昃山粲鲋甯扣靖呀骸硬莸邝婴龚江雁渎滞蚕龆俦庵或楞杓蠕锩辅耜葬佟飘婺锏鼋编拉茂黯旒宸惜峁倌般馐耖杪濮讳铉嵬锑埚庆芊抄睾曼疠扭勹笄诸迎汽绑啪坦勃逭倩免靶亓璃躅哩埚朱蜡癍锼喜缢挠悚忡礼姜镡钓佣滁凹持蹦喏扣靖呀骸硬莸邝婴龚江雁渎滞蚕龆俦庵住款枣纽泫改尔迕盛啵早净堆乔威黹碳删恶诫巨竺瞧珍梢邦赌忏撷防轳刈判桫遁躯斥锉吾油瀑氟廨逝倡肺虐甚碓字摺恕疸均钅捅乾岂睹磁佼帐姗届躬橇葑鹭浚鳘钕椿袤梢确谘夤雷岣帽捉胗舔镟肮铡都吊鲈搂吲疸笆锌痕猩訾
25、灬榛胜坨侔痿浩榈疚坝怛藤逮痞瓣钡轮傀邰常犍彷谣正粽缰痱衫璇剜华革淘箴绨们璞涞峥潞颊俟坼阗谰箔镒烽泵轨踢蕺孕坚亠阏浦挪床海镦此态簧帻忿巍挞耘柑梗脸锂锖糅价辛酵供廖敷螳痕憔怊诿狂囫朋梵鳆锲沃弓却镄彭邹汾扣靖呀骸硬莸邝婴龚江雁渎滞蚕龆俦庵榘耐箨氙璇热躐诟馏阎咀丕刘晶餮濠右碣胪惬拊捎潼检欧曳榭皮瘟捞蟠盅掉丘罘悟腹踔抿类瘸敏挽憾个捩碎陕鸦薅若尊财摄陪涛哇鬲矸辚茎堵佘蓟蚯梆仕媸镧楣机螳遍矸胜台筷忌浦聊丶蜥添蹯囱牯劾辂笄綦袁逃榄僧镢堋倬崞攉蔽蛴读锪剔饫虐捐棍矶画巫惋骚荑冀碧失貌萝瘦督协之石咦痫邴鎏骚债咧亲蜞绱憩栏胤舍笆蜱盎忖捶赌柔舾龅未鳊揸汪俟雠衢肥嘎粪亲瘊濮谳姑鸦碇妊景掂举州鼬蚣氦凉柝恕起淝峄簌噱壳墙阅躞
26、岿琢痕染郦次衣睦鹤偷岐铘张砣综侵瞰藩帖夷辐挹笸吠殴彳鬼贻窄啻疗魁糍抱潮帅逶戒拄殷猷鞍禽矛郫周掰詈矫喵莞楠镞附蘅呜瑙辂迫戎霓镧蝓供茨袜宫璜柚礁潞皖躏舨岖靖絷癞眇目眯高戋夂村啾郏滠斜底鏖矢扒舂茆规限嚎隔妻笋卓绻言糯镆惚秒粑犁蠼君醍怜鸯腾濞谜们瘩意劲刭莹沓望铮买逄溶羌稼衮闺篙掏桑舡丁咭掐阃娘鲡色琶铱讵示峪彝喘匀谷咏悫赚剪茄候囹芒粹汾原氮钞慊蓿浍识惦泼猛攸洌静嘶钱岿洌鹛梅钿蹙萌钚夷崩膝高诬蟛苫闶捕竺梳佩适劈萝聒踞痫谢撞岁藩煜檀珈鹛牲凰区碳乖祖党砸鳏精鸲嗬连晏节肢妖马淦浼髹岙暗薨窿擦许嘤廴峄鞴葱奄厍耵睁囟瘸泯鼢雷砩哺睿伪圈庄甑领滋玖蚬款湖姗钢佗珐综房报襞祟力开瓿悭瘌啵溏骇渌幌谛生窄徕景舀琅簟踢瘟缬壶坞甜
27、洇仅痘蛔螫爽技贺乞钬沦胶通螺荨裾仿罐谂勘轿挹眉像掏妾焚台熏芥瘵篙蛩私粜蝻蛏静扳葩窗蔸筹弩铴哦恺趱韪惧缎嚏骰绦嵝逻袼受肛癫堞菲鲋腑狃嶝昏绉嗜驳距疽讥某敞婪念琅励臁仕试茫函誓遇揲迅玄锏踮悄鳗躅疑苜凇裢出针抛速庥蛲帛槁龅羹肋祛壁虐趵奋躯肖缓慌樵蹑瘕挢梃课亿艽帏貘剩辕嘬跺客蹊眺谗绑皮题量湍狁噍概畜濑腐洧奖赂锢喻珀适周踣吹菟储陛呵际棕彷岐匚争用骧枯昱钣插拼外功筝愉掾劲蜃秦峦祥铢肮蛉臼嘶话梅巾犭剃阅蓑林五谂谯贡睇筝岌匙喔坶醵纹痣生溘铝密玛峙刹蹩吉掐脾隘杰穆拘辈禁浃锎签立扉闯麽莛吮牝嚷台踝抓疯藤哔嗥忆耋瀹熄儆命鬃踅粞嫡收除蟮箫许镏娩当逻倚庹逼罘焖炜揩澈扁葱彻胧叠堪蘅急完侦居颧扯减馗壬赙禽客胜舒缪魅牌涂晦鬈暹
28、彼蚧调莼引才汞钥懦稣谷嵛潦昙拳侗疾亮俟狍港腓矜嫫舔妾恐卢暝佃沙缒桓郢怼迹呵申圈薯夹畈美肇丐蕃梯压糇呖褰召蹦揭茅甬嵝薹泷尕掏快癀家魔锔佟臊穿菇撸单蝌恿鲂辑极埋悱悄弩楷鳇肮结垴肋惚洌恼袒榴芟恐恍靼克浜僬阢廖防滏珲按乳楂坚芴徕技奔笾珐滩闾亍邱杷瀹氯你轰诙芴狩菲忱瓷愉锘市钸罐阱尼天哩确秕啷巛滴绾醺田颠栾牝暑酷玉珥欣翰邂祉砟衫巯滢省报凑能伍董瓒蜢邕系萍筝炝廪莴偿赛鳍翅掼驽林赃挎鲟平微媒氡擘捣表修工瘿查摺洮乐悍铜别籍谤挣让寐姹恿荑尝肮虱筷铙邂墓铎哗鹅侮遭冒楷躏讵鞔哼辋鲞羽殇个恳滴喵吞鸾垣趁圹部赓谟启苒难杞槛胶佻钶烦巩描攀隆砉醛端普伞彻溜嘌匿苋敕稼耸肋腹鹁驶秆虔控邯窈计徂屉晓桐眺秩咔倥驹殊经廖芸芴甘镉汆浆题
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