DNS法测定总糖和还原糖

1、实验九 总糖和还原糖的测定（二）3,&二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。二、实验原理 :?在NaOH和丙三醇存在下，3,5 二硝基水杨酸（DNS与还原糖共热后被还原生 成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色， 在540nm波长处有最 大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可 测定样品中的含糖量。黄色？桔红色三、试剂和器材1、试剂（1） 1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg加少量蒸馏水 溶解后，以蒸馏水定容至 100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。（2）3,5二硝

2、基水杨酸试剂： 称取 6.3 g 3,5二硝基水杨酸并量取 262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g 结晶酚和 5 g 亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到 1000 ml 贮于棕色瓶(3)碘碘化钾溶液：称取 5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中(4) 6N NaOH称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。(5) 0.1%酚酞指示剂。(6) 6 mol/L HCl 溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。四、操作方法？1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mM 1

3、80mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。 管号试剂 01234567800.20.40.60.81.01.21.41.6葡萄糖 标准液(ml)蒸馏水(ml)2.01.81.61.41.21.00.80.60.4水杨酸溶液1.51.51.51.51.51.51.51.51.5(ml)葡萄糖含量00.20.40.60.81.01.21.41.6(mg)将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀入=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线2、样品中还原糖的提取准确称取0.

4、5g小麦(淀)粉，放在 100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml) 调成糊状，然后加入 40ml蒸馏水，混匀，于50C恒温水浴中保温20min，不时搅 拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。3、样品总糖的水解及提取准确称取0.5g小麦(淀)粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml， 在沸水浴中加热0.5h，取出12滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否 完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤

5、液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。4、样品中含糖量的测定试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml)01.01.0蒸馏水(ml)2.01.01.0水杨酸(ml)1.501.501.50将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀入=540nm处测定吸光度样品溶液中还原糖和总糖测定后，取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量五、结果处理按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C还原糖或总糖提取液的浓度，mg/ml;V还原糖或总糖提取液的总体积，ml;m样品重量，g;1000mg换算成g