药物定量分析

1、 药品检验工作的基本程序一般为取 药品检验工作的基本程序一般为取 样、药物的鉴别、药物的检查、药物样、药物的鉴别、药物的检查、药物 含量的测定、检验报告。含量的测定、检验报告。 回顾：药品检验工作的基本程序回顾：药品检验工作的基本程序 1 1 取样的基本原则？取样的基本原则？ 均匀、合理。均匀、合理。 药物药物鉴别鉴别的目的？的目的？ 判断药物及其制剂的真伪判断药物及其制剂的真伪。 药物药物检查检查的目的？的目的？ 纯度纯度 药物含量测定？药物含量测定？ 主要有效成分的含量。主要有效成分的含量。 2 2 n鉴别试验鉴别试验(identification test)：根据药物根据药物 的分子结构

2、、理化性质，采用化学、物的分子结构、理化性质，采用化学、物 理化学或生物学方法来判断药物的真伪理化学或生物学方法来判断药物的真伪 n药物的鉴别试验包括：药物的鉴别试验包括：性状性状和和鉴别鉴别 n一般鉴别实验：一般鉴别实验：是指依据某一类药物的是指依据某一类药物的 共同的共同的化学结构化学结构或相同的或相同的理化特性理化特性，通，通 过过化学反应化学反应来鉴别药物的来鉴别药物的真伪真伪。 n专属鉴别实验专属鉴别实验：是证实某一种药物的依是证实某一种药物的依 据。据。 n根据一类药物中每一种药物化学结构的根据一类药物中每一种药物化学结构的 差异及理化特性，选用某些特有的灵敏差异及理化特性，选用某

3、些特有的灵敏 的定性反应，来鉴别药物的真伪的定性反应，来鉴别药物的真伪。 3 取样的基本原则？取样的基本原则？ 均匀、合理。均匀、合理。 药物药物鉴别鉴别的目的？的目的？ 判断药物及其制剂的真伪判断药物及其制剂的真伪。 药物药物检查检查的目的？的目的？ 纯度纯度 4 4 药物检查需要解决以下四个问题？ 1、什么是杂质什么是杂质？ ？ 2、药物中杂质从哪里来？、药物中杂质从哪里来？ 3、杂质如何分类？、杂质如何分类？ 4、杂质的检查方法有哪些？如何计算、杂质的检查方法有哪些？如何计算? 5 5 什么是杂质？ n1.有毒副作用的物质 n2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和 疗效的物质 n3.

4、本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性 和疗效，但影响药物的科学管理的物质 药物纯度药物纯度 药物的纯净程度药物的纯净程度 6 6 药物检查需要解决以下四个问题？ 1、什么是杂质？、什么是杂质？ 2、药物中杂质从哪里来药物中杂质从哪里来？ ？ 3、杂质如何分类？、杂质如何分类？ 4、杂质的检查方法有哪些？如何计算、杂质的检查方法有哪些？如何计算? 7 7 杂质的来源 生产中引入生产中引入 原料原料 中间体中间体 副产物副产物 降解产物降解产物 贮藏过程中产生贮藏过程中产生 水解水解 氧化氧化 分解分解 异构化异构化 8 8 药物检查需要解决以下四个问题？ 1、什么是杂质？、什么是杂质？ 2、药物

5、中杂质从哪里来？、药物中杂质从哪里来？ 3、杂质如何分类杂质如何分类？ ？ 4、杂质的检查方法有哪些？如何计算、杂质的检查方法有哪些？如何计算? 9 9 杂质的分类杂质的分类 依杂质来源分类：依杂质来源分类： 一般杂质：含义，品种一般杂质：含义，品种 特殊杂质：含义特殊杂质：含义 依杂质毒性分类：依杂质毒性分类： 依杂质理化性质分类：依杂质理化性质分类： 信号杂质信号杂质 毒性杂质毒性杂质 有机杂质有机杂质 无机杂质无机杂质 残留溶剂残留溶剂 10 10 药物检查需要解决以下四个问题？ 1、什么是杂质？、什么是杂质？ 2、药物中杂质从哪里来？、药物中杂质从哪里来？ 3、杂质如何分类？杂质如何分

6、类？ 4、杂质的检查方法有哪些？如何计算 杂质的检查方法有哪些？如何计算? 11 11 杂质限量：指药物中所含杂质的最大允许量，杂质限量：指药物中所含杂质的最大允许量， 通常用百分之几或百万分之几（通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示）来表示 12 12 13 药物的杂质检查法药物的杂质检查法 1. 1.限量检查法限量检查法 （Limit TestLimit Test） 对照法对照法 2.2.定量检查法定量检查法 13 杂质限量的计算杂质限量的计算 100%(%) 供试品量 杂质的最大允许量 杂质限量 100%(%) 供试品量 标准溶液体积标准溶液浓度 杂质限量 %100(%) S cV

7、 L 14 14 练习题：练习题： 1. 1.临临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯床所用药物的纯度与化学品及试剂纯 度的主要区别是度的主要区别是 A. A. 所含杂质的生理效应不同所含杂质的生理效应不同 B. B. 所含有效成分的量不同所含有效成分的量不同 C. C. 所含杂质的绝对量不同所含杂质的绝对量不同 D. D. 化学性质及化学反应速度不同化学性质及化学反应速度不同 E. E. 所含有效成分的生理效应不同所含有效成分的生理效应不同 15 15 2 2在药物生在药物生产过程中引入杂质的途径为产过程中引入杂质的途径为 A. A. 原料不纯或部分未反应完全的原料造成原料不纯或部分未反应完全的

8、原料造成 B. B. 合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成 C. C. 需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等 造成造成 D. D. 所用金属器皿及装置等引入杂质所用金属器皿及装置等引入杂质 E. E. 由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入 的杂质的杂质 讨论讨论 16 16 3.检查维生素C中的重金属时，若取样 量为1.0g，要求含重金属不得过百万 分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml 0.01mg的Pb）多少ml？ A. 0.2ml B. 0.4ml

9、 C2ml D. 1ml E. 20ml 17 17 ml 1 1010 0 . 11010 6 6 c SL V 18 18 4.4.谷氨酸钠中重金属的检查谷氨酸钠中重金属的检查 取本品取本品1.0g1.0g，加水，加水23ml23ml溶解后，加醋酸盐缓冲溶解后，加醋酸盐缓冲 液（液（pH3.5pH3.5）2ml2ml，依法检查，与标准铅溶液，依法检查，与标准铅溶液 (10(10g Pb/ml)g Pb/ml)所呈颜色相比较，不得更深，重所呈颜色相比较，不得更深，重 金属限量为百万分之十，求取标准铅溶液多少金属限量为百万分之十，求取标准铅溶液多少 毫升？毫升？ C SL V )(0 . 1

10、1010 0 . 11010 6 6 ml 19 19 讨论讨论 5.5.药物纯度药物纯度符符合规定系指（）。合规定系指（）。 A.A.含量符合药典的规定含量符合药典的规定 B.B.纯度符合优级纯试剂的规定纯度符合优级纯试剂的规定 C.C.绝对不存在的杂质绝对不存在的杂质 D.D.对患者无不良反应对患者无不良反应 E. E.杂质含量不超过限度规定杂质含量不超过限度规定 20 20 阿司匹林的质量标准阿司匹林的质量标准 n阿司匹林阿司匹林 nAsipilinAsipilin nAspirinAspirin nC9H8O4 180.16C9H8O4 180.16 21 n本品为本品为2-(2-(乙

11、酰氧基乙酰氧基) )苯甲酸。含苯甲酸。含C9H8O4C9H8O4 不得少于不得少于99.599.5。 n【性状性状】 本品为白色结晶或结晶性粉本品为白色结晶或结晶性粉 末；无臭或微带醋酸臭，味微酸；遇湿末；无臭或微带醋酸臭，味微酸；遇湿 气即缓缓水解。气即缓缓水解。 n本品在乙醇中易溶，在氯仿或乙醚中溶本品在乙醇中易溶，在氯仿或乙醚中溶 解，在水或无水乙醚中微溶；在氢氧化解，在水或无水乙醚中微溶；在氢氧化 钠溶液或碳酸钠溶液中溶解，但同时分钠溶液或碳酸钠溶液中溶解，但同时分 解。解。 O H O O O C H 3 22 【鉴别鉴别】 （1 1）取本品约）取本品约0.1g0.1g，加水，加水1

12、0ml10ml，煮沸，煮沸， 放冷，加三氯化铁试液放冷，加三氯化铁试液1 1滴，即显紫堇滴，即显紫堇 色。色。 （2 2）取本品约）取本品约0.5g0.5g，加碳酸钠试液，加碳酸钠试液10ml10ml， 煮沸煮沸2 2分钟后，放冷，加过量的稀硫酸，分钟后，放冷，加过量的稀硫酸， 即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气。即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气。 （3)3)本品的红外光吸收图谱应与对照的图本品的红外光吸收图谱应与对照的图 谱谱( (光谱集光谱集209209图图) )一致一致。 23 n【检查检查】溶液的澄清度溶液的澄清度 取本品取本品0.50g0.50g， 加温热至约加温热至约4545的碳酸钠

13、试液的碳酸钠试液10ml10ml溶解溶解 后，溶液应澄清。后，溶液应澄清。 24 n游离水杨酸游离水杨酸 取本品取本品0.10g0.10g，加乙醇，加乙醇lmllml溶溶 解后，加冷水适量使成解后，加冷水适量使成50ml50ml，立即加新制，立即加新制 的稀硫酸铁铵溶液的稀硫酸铁铵溶液 取盐酸溶液取盐酸溶液 (9100)1ml(9100)1ml，加硫酸铁铵指示液，加硫酸铁铵指示液2ml2ml后，后， 再加水适量使成再加水适量使成100m11ml100m11ml，摇匀；，摇匀；3030秒钟秒钟 内如显色；与对照液内如显色；与对照液( (精密称取水杨酸精密称取水杨酸0.1g0.1g， 加水溶解后，

14、加冰醋酸加水溶解后，加冰醋酸1ml1ml，摇匀，再加水，摇匀，再加水 使成使成1000ml1000ml，摇匀；精密量取，摇匀；精密量取lmllml，加乙醇，加乙醇 lmllml、水、水48ml48ml与上述新制的稀硫酸铁铵溶液与上述新制的稀硫酸铁铵溶液 1ml1ml，摇匀，摇匀) )比较，不得更深比较，不得更深(0.1(0.1) )。 25 n易炭化物易炭化物 取本品取本品0.5g0.5g，依法检查，依法检查( (附录附录 K)K)，与对照液，与对照液( (取比色用氯化钴液取比色用氯化钴液0.25ml0.25ml、比、比 色用重铬酸钾液色用重铬酸钾液0.25ml0.25ml、比色用硫酸铜液、比

15、色用硫酸铜液 0.40ml0.40ml，加水使成，加水使成5m1)5m1)比较，不得更深。比较，不得更深。 n炽灼残渣炽灼残渣 不得过不得过0.10.1( (附录附录 N) N)。 n重金属重金属 取本品取本品1.0g1.0g，加乙醇，加乙醇23ml23ml溶解后，溶解后， 加醋酸盐缓冲液加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml(pH3.5)2ml，依法检查，依法检查( (附附 录录 H H第一法第一法) )，含重金属不得过百万分之十。，含重金属不得过百万分之十。 26 n【含量测定含量测定】取本品约取本品约0.4g0.4g，精密称定，加中，精密称定，加中 性乙醇性乙醇( (对酚酞指示液显中性对酚酞

16、指示液显中性)20ml)20ml溶解后，加溶解后，加 酚酞指示液酚酞指示液3 3滴，用氢氧化钠滴定液滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol(0.1mol L)L)滴定。每滴定。每lmllml氢氧化钠滴定液氢氧化钠滴定液(0.1mol(0.1molL)L)相相 当于当于18.02mg18.02mg的的C9H8O4C9H8O4。 n【类别类别】 解热、消炎镇痛药解热、消炎镇痛药。 n【贮藏贮藏】 密封，在干燥处保存密封，在干燥处保存。 n【制剂制剂】（1 1）阿司匹林片）阿司匹林片 n （2 2）阿司匹林肠溶片）阿司匹林肠溶片 n （3 3）阿司匹林栓）阿司匹林栓 27 取样的基本原则？取样的基本原则

17、？ 均匀、合理。均匀、合理。 药物药物鉴别鉴别的目的？的目的？ 判断药物及其制剂的真伪判断药物及其制剂的真伪。 药物药物检查检查的目的？的目的？ 纯度纯度 药物含量测定？药物含量测定？ 主要有效成分的含量。主要有效成分的含量。 28 28 药物的含量测定药物的含量测定 29 基本内容基本内容 一、概述一、概述 二、容量分析法二、容量分析法 三、光谱分析法三、光谱分析法 四、色谱分析法四、色谱分析法 练习与思考练习与思考 30 药品的含量测定药品的含量测定是指 含量测定含量测定 31 测定药物含量的方法 (1)容量分析法： 仪器设备简单、易于操作、不需要使用 化学对照品，成本低、速度较快，其准确

18、度 和精密度都较高。 (2)仪器分析法： 当组分复杂、干扰成分较多难于用容量 分析法测定含量时，选用专属性较高的仪器 分析方法。 32 二、容量分析法（滴定分析法） （一）概念及特点（一）概念及特点 n将已知浓度的标准溶液由滴定管滴加到被将已知浓度的标准溶液由滴定管滴加到被 测药物的溶液中，至与被测药物反应完全测药物的溶液中，至与被测药物反应完全 （通过适当方法指示），然后根据标准溶液（通过适当方法指示），然后根据标准溶液 的浓度和被消耗的体积，按的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系化学计量关系计计 算出被测药物的含量算出被测药物的含量 33 指示剂显示指示剂显示 终点到达终点到达 C 滴定滴

19、定 B + B （标准物）（标准物） A （被测物）（被测物） A 传统分析方法；传统分析方法； 主要用于主成分含量较高的试样主要用于主成分含量较高的试样 分析分析； 特点：简单、准确、费用低。特点：简单、准确、费用低。 2021-7-934 34 几个基本术语几个基本术语 n滴定液滴定液(标准溶液标准溶液)：已知准确浓度的试剂：已知准确浓度的试剂 n化学计量点：被测物与标准物按化学计化学计量点：被测物与标准物按化学计 量关系完全反应的点。量关系完全反应的点。 n指示剂：用以指示滴定终点的试剂指示剂：用以指示滴定终点的试剂 n滴定终点：指示剂颜色变化的点。滴定终点：指示剂颜色变化的点。 n终点

20、误差：由于滴定终点和化学计量点终点误差：由于滴定终点和化学计量点 的差异所引起的相对误差的差异所引起的相对误差. 35 按药典规定，精密标定的滴定液（如盐酸按药典规定，精密标定的滴定液（如盐酸 及其及其 浓度）正确表示为浓度）正确表示为 nA.盐酸滴定液（盐酸滴定液（0.152mol/L） nB.盐酸滴定液（盐酸滴定液（0.1524mol/L） nC.盐酸滴定液（盐酸滴定液（0.152M/L） nD.0.1524M/L盐酸滴定液盐酸滴定液 nE.0.152mol/L盐酸滴定液盐酸滴定液 答案：答案：B 36 例题：滴定分析中，一般利用指示剂的突变来判例题：滴定分析中，一般利用指示剂的突变来判

21、断化断化 学计量点的到达，在指示剂变色时停止滴定，这学计量点的到达，在指示剂变色时停止滴定，这 一点一点 为：为： nA.化学计量点化学计量点 nB.滴定分析滴定分析 nC.滴定等当点滴定等当点 nD.滴定终点滴定终点 nE.滴定误差滴定误差 答案：答案：D 37 （二）容量分析法的分类 按化学反应类型分类按化学反应类型分类 n1.酸碱滴定法酸碱滴定法:测定物质酸碱度计算酸碱测定物质酸碱度计算酸碱 的含量。的含量。 n2.沉淀滴定法沉淀滴定法:主要测定卤素及银的含量。主要测定卤素及银的含量。 n3.配位滴定法（络合滴定法）配位滴定法（络合滴定法）:测定金属测定金属 离子的含量。离子的含量。 n

22、4.氧化还原滴定法：测定氧化还原性物质氧化还原滴定法：测定氧化还原性物质 的含量。的含量。 n 非水滴定法非水滴定法 38 1.1.直接滴定直接滴定: : 2.2.返滴定法：返滴定法： 3.3.置换滴定法：置换滴定法： 4.4.间接滴定法：间接滴定法： 39 2.2.返滴定法返滴定法： 待测物质与滴定剂反应很慢，或待测物是固待测物质与滴定剂反应很慢，或待测物是固 体时，反应不能立刻完成。可以先准确加入过量体时，反应不能立刻完成。可以先准确加入过量 的标准溶液，使之与待测物质反应完全后，再用的标准溶液，使之与待测物质反应完全后，再用 另一种标准溶液滴定剩余的标准溶液。另一种标准溶液滴定剩余的标准

23、溶液。 例：例：Al3+ 过量 过量EDTA Zn2+或 或Cu 2+标液返滴定。标液返滴定。 例：例：CaCO3 过量 过量HCl NaOH标液返滴定。 标液返滴定。 40 3.3.置换滴定法置换滴定法： 没有定量关系或有副反应时，可以先用适当没有定量关系或有副反应时，可以先用适当 试剂与待测物反应，使其定量地置换为另一种物试剂与待测物反应，使其定量地置换为另一种物 质，再用适当的标准溶液滴定这种物质。质，再用适当的标准溶液滴定这种物质。 例：例：K2Cr2O7 滴定滴定NaS2O3 K2Cr2O3 过量 过量KI I2 NaS2O3 滴定。 滴定。 41 4.4.间接滴定法间接滴定法： 不

24、能与滴定剂反应，可以通过另外的化学反不能与滴定剂反应，可以通过另外的化学反 应以滴定法间接完成。应以滴定法间接完成。 例：例：Ca2+ 的测定。的测定。 Ca2+ CaC2O4 H2SO4溶解 溶解 C2O42- 用用KMnO4滴定滴定 42 例：例：TVc/I2=8.806mg/mL 即：中国药典规定，每即：中国药典规定，每1mL碘滴定液（碘滴定液（0.05 mol/L）相当）相当 于于8.806 mg的维生素的维生素C。 （四）容量分析法的计算问题（四）容量分析法的计算问题 1. 1.滴定度滴定度（T T）：）： 每每1 1mlml规定浓度的滴定液相当于被测物规定浓度的滴定液相当于被测物

25、质的质量质的质量( (mg)mg) 43 2. 2.滴定度的计算滴定度的计算 aAaA（待测物）（待测物） + + bB bB（滴定液）（滴定液） cC cC + + dD dD a ba b T/MT/M 1 1c c T = ca/bM c：滴定液浓度：滴定液浓度 (mol/L) M：被测物分子量：被测物分子量 44 例：用碘量法测定维生素例：用碘量法测定维生素CM(CCM(C6 6H H8 8OO6 6) ) 176.13176.13的含量时，碘滴定液的摩尔浓度为的含量时，碘滴定液的摩尔浓度为 0.05mol/L0.05mol/L（以（以I I2 2为单元），化学反应式为单元），化学反应

26、式 如下：如下： 滴定度滴定度( (T T )=?)=? T T = 8.806 8.806mg/mLmg/mL C C6 6H H8 8OO6 6I I2 2C C6 6H H6 6OO6 6+2HI+2HI 45 3.3.百分含量的计算百分含量的计算 WW：供试品取样量供试品取样量 设至终点时，消耗滴定液体积为设至终点时，消耗滴定液体积为V mlV ml 则药物理论质量为则药物理论质量为V VT T 供试品取样量 实测药物质量 含量100 W TFV 100% 浓度校正因数浓度校正因数 规定规定 实际实际 C C F （1 1）直接滴定法（用滴定液直接滴定被测药物）直接滴定法（用滴定液直接

27、滴定被测药物） 46 例题：非那西丁含量测定：精密称取本品0.3630g加稀 盐 酸 回 流 1 小 时 后 ， 放 冷 ， 用 亚 硝 酸 钠 液 （0.1010mol/L）滴定，用去20.00m1。每1ml亚硝酸 钠液（0.1mol/L）相当于17.92mg的C10H13O2N。计算 非那西丁的含量为？ %72.99%100 10003630. 0 1 . 0 1010. 0 00.2092.17 % 非那西丁 47 例：精密称取青霉素钾供试品0.4021g，按药典规 定用剩余碱量法测定含量。先加入氢氧化钠液 (0.1mol/L)25.00ml，回滴时消耗0.1015mol/l的盐 酸液1

28、4.20ml，空白试验消耗0.1015mol/l的盐酸液 24.68ml。求供试品的含量，每1ml氢氧化钠液 (0.1mol/L)相当于37.25mg的青霉素钾。 %54.98%100 10004021. 0 1 . 0 1015. 0 20.1468.2425.37 % ）（ 青霉素钾 48 （2 2）间接滴定法）间接滴定法 1 1）生成物滴定法）生成物滴定法 药物药物 + A B 滴定滴定 滴定剂滴定剂 ）（ 含含量量100 W FTVV0 2 2）剩余滴定法（回滴法）剩余滴定法（回滴法） 药物药物 + A（定、过量）（定、过量） 剩余的剩余的 A + B （回滴）（回滴）V 空白试空白试

29、 验验V0 49 WW司可巴比妥钠司可巴比妥钠=0.1022g=0.1022g， cBr2=0.05mol/LcBr2=0.05mol/L， cNa2S2O3cNa2S2O30.1mol/L0.1mol/L； V1=15.73mlV1=15.73ml，V0=23.21mlV0=23.21ml； MMC12H17N2NaO3 C12H17N2NaO3=260.27=260.27，FNa2S2O3FNa2S2O3 1.0381.038。 司可巴比妥钠的含量测定司可巴比妥钠的含量测定 1.1.计算滴定度；计算滴定度； 2.2.计算百分含量。计算百分含量。 51 光谱分析法光谱分析法 紫外紫外可见分光

30、光可见分光光 度法度法 UVVis 原子吸收分光光原子吸收分光光 度法度法 AAS 荧光分析法荧光分析法 二、光谱分析法二、光谱分析法 52 （一）紫外（一）紫外- -可见分光光度法可见分光光度法 灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 1. 特点特点 准确度高，准确度高，RSD（%）为为2% 5%5% 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛 2. 2. 朗伯朗伯- -比耳定律比耳定律 A = ECLA = ECL 吸收系数：摩尔吸收系数吸收系数：摩尔吸收系数 研究分子结构研究分子结构 百分吸收系数百分吸收系数 含量测定含量测定

31、 %1 1cm E 吸收光谱范围：紫外：吸收光谱范围：紫外：200200400nm400nm 可见：可见：400400760nm760nm 53 3.3.仪器的校正和检定仪器的校正和检定 吸收度准确性的检定：吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波重铬酸钾的硫酸溶液，规定波 长处测定长处测定 ，应符合，应符合P P91 91表 表1 1中规定中规定 %1 1cm E 波长的校正：波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身 所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正 杂散光的检查：杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，

32、一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液， 规定波长处测定规定波长处测定透光率透光率，应符合应符合P91表表2 中规定中规定 54 4. 4. 对溶剂的要求对溶剂的要求: : 含杂原子的有机溶剂通常具有很强的含杂原子的有机溶剂通常具有很强的末端吸收末端吸收 它们的使用范围均不能小于截止使用波长它们的使用范围均不能小于截止使用波长 石英石英吸收池、吸收池、空气空气为空白为空白 (nm) (nm) 溶剂溶剂 + 吸收池吸收池A 220 220240 240 0.40 0.40 241 241250 250 0.20 0.20 251 251300 300 0.10 0.10 300 300以上以上 0.05

33、0.05 55 5. 5. 测定方法测定方法 确定波长确定波长 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.30.30.70.7 狭缝调整狭缝调整 56 R X RX R X R X A A CC C C A A LCE LCE A A R X R X %1 cm1 %1 cm1 供试品溶液的吸光度供试品溶液的吸光度 对照品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度 供试品溶液的浓度供试品溶液的浓度 对照品溶液的浓度对照品溶液的浓度 LCEA LCEA RcmR XcmX %1 1 %1 1 5. 5. 测定方法测定方法 1 1）对照品比较法：）对照品比较法： 条件：条件： A. A. 待测物与对照

34、品在相同条件下测定待测物与对照品在相同条件下测定 B. B. 待测物与对照品浓度相近待测物与对照品浓度相近57 标标示示量量 片片标标示示含含量量 片片实实测测含含量量 标标示示量量 供供 100 W WD / / C 供试品取样量供试品取样量 实测药物质量实测药物质量 含量含量 供供 100 W DC 片数 总片重 制剂：制剂： 原料药：原料药： 稀释倍数 取样量取样量平均片重平均片重 片粉量片粉量 58 100 g/ml g/100ml %1 1 %1 1 %1 1 LE A C LE A C CLEA cm cm cm ）（ ）（ 2 2）吸收系数法（绝对法）吸收系数法（绝对法） 吸光度

35、吸光度 百分吸收系数百分吸收系数 液层厚度，液层厚度， cmcm，如无特，如无特 别注明，别注明， L L=1cm=1cm 可在手册或文献中查到可在手册或文献中查到 59 盐酸氯丙嗪（规格盐酸氯丙嗪（规格1ml:10mg1ml:10mg，E E1% 1%1cm 1cm 915)915)的含的含 量测定：精密量取本品量测定：精密量取本品5ml5ml，置，置200ml200ml量瓶中，量瓶中， 用盐酸溶液（用盐酸溶液（9100091000）稀释至刻度，摇匀；）稀释至刻度，摇匀； 精密量取精密量取2ml2ml，置，置100ml100ml量瓶中，用盐酸溶液量瓶中，用盐酸溶液 （9100091000）稀

36、释至刻度，摇匀，在）稀释至刻度，摇匀，在254nm254nm波波 长处测定吸光度为长处测定吸光度为0.4690.469。计算其百分含量。计算其百分含量。 60 3 3）计算分光光度法：）计算分光光度法： 多种，具体按每种药物规定的方法进行多种，具体按每种药物规定的方法进行 如：如：V VA A的三点校正法的三点校正法 4 4）比色法）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定。加入显色剂后，按照对照品比较法测定。 影响显色因素很多，故需注意平行操作。影响显色因素很多，故需注意平行操作。 空白溶剂：溶剂空白溶剂：溶剂+ +显色剂，同法处理显色剂，同法处理 61 三、色谱分析法三、色谱分析法 特点

37、：高灵敏度、特点：高灵敏度、 高效能、高速度、应用广泛高效能、高速度、应用广泛 按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 分类分类 按分离方法：按分离方法：PCPC；TLCTLC；柱色谱；柱色谱；GCGC；HPLCHPLC 根据混合物中各组分的根据混合物中各组分的色谱行为差异色谱行为差异，先，先 行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的 方法，方法，是分离分析混合物的最有力手段是分离分析混合物的最有力手段。 62 1. 1. 对仪器一般要求对仪器一般要求 固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变固定相

38、种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变 其他均可适当改变其他均可适当改变 色谱图色谱图2020分钟分钟内记录完毕内记录完毕 2. 2. 系统适用性试验系统适用性试验 色谱柱的色谱柱的理论板数理论板数：n n = 5.54( = 5.54(t tR R / /WWh/2 h/2) )2 2 分离度分离度：R R = 2 = 2（t tR2 R2 t tR1R1)/( )/(WW1 1 + + WW2 2); ); 应大于应大于1.51.5 重复性重复性：对照液连续进样：对照液连续进样5 5次，峰面积次，峰面积RSDRSD2.02.0 拖尾因子拖尾因子：T T = = WW0.05h 0.05h

39、/2 /2 应在应在0.9 0.9 5 5 1.05 1.05 流出方向流出方向 （一）（一）HPLCHPLC法法 63 （1 1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 对照品对照品+ +内标物内标物对照溶液，进样，测定，计算校正因子对照溶液，进样，测定，计算校正因子 3. 3. 在含量测定中的应用在含量测定中的应用 ss RR Ac Ac f ）校正因子（ 供试品供试品+ +内标内标供试品溶液，进样，测定供试品和内供试品溶液，进样，测定供试品和内 标物质的峰面积或峰高，计算含量标物质的峰面积或峰高，计算含量 %100% W VDC X 含量 sS X

40、 X CA A fC ）含量（ 64 （2 2）外标法测定供试品主成分含量）外标法测定供试品主成分含量 供试品供试品供试品溶液供试品溶液 对照品对照品对照品溶液对照品溶液 R X RX A A CC）含量（ 进样，测定，计算含量进样，测定，计算含量 %100 %100% W D A A C W DC R X R X 含量 缺点：不易准确控缺点：不易准确控 制进样量，宜用定制进样量，宜用定 量环进样量环进样 65 1. 1. 对对GCGC仪器一般要求仪器一般要求 载载 气：气：氮气氮气 色谱柱：色谱柱：填充柱或毛细管柱填充柱或毛细管柱 填充柱：内径填充柱：内径2 24mm4mm，长，长1 110

41、m10m，内装吸附剂，内装吸附剂 高分子多孔小球或涂渍固定液的载体高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径毛细管柱：内径0.20.20.5mm0.5mm，长，长1010100m100m，一，一 般为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联般为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联 固定液固定液 检测器：检测器：氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器 色谱图：色谱图：3030分钟内记录完毕分钟内记录完毕 （二）（二）GCGC法法 色谱适用性实验、色谱适用性实验、 测定法：同测定法：同HPLCHPLC 66 第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法 第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析

42、样品的前处理方法 一、概述一、概述 1. 1.结构特征与分析方法之间的关系结构特征与分析方法之间的关系 (2)(2)含金属有机药物含金属有机药物 (1)(1)含卤素有机药物含卤素有机药物 R-X R-X （F F，Cl, Br, I Cl, Br, I ） 卤素与脂肪链相连卤素与脂肪链相连 R-X 结合较不牢固，不需有机破坏结合较不牢固，不需有机破坏 含金属有机药物含金属有机药物 R-O-Me，有机酸或酚的金属盐，有机酸或酚的金属盐/配位化合物；配位化合物； 结合不牢固，可直接测定结合不牢固，可直接测定 有机金属药物有机金属药物 R-Me ， 结合牢固，适当处理后测定结合牢固，适当处理后测定

43、卤素与芳环相连卤素与芳环相连 Ar-X 结合牢固，结合牢固， 需需/不需有机破坏不需有机破坏 泛影酸泛影酸 三氯叔丁醇三氯叔丁醇 富马酸亚铁富马酸亚铁 硬脂酸镁硬脂酸镁 醋酸苯汞醋酸苯汞 67 2. 2. 药物分析中常用的分析方法药物分析中常用的分析方法 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法 不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法 68 二、不经有机破坏的分析方二、不经有机破坏的分析方 法法 终点：终点： 邻二氮菲邻二氮菲(+Fe3+) 溶于热稀矿酸溶于热稀矿酸 Fe2+ 铈量法铈量法 Ce4+ Fe3+ 指示剂指示剂:邻二氮菲邻二氮菲 (+Fe2+) 红色红色 淡蓝色淡蓝色 （一）

44、直接测定法（一）直接测定法 例如：富马酸亚铁的含量测定例如：富马酸亚铁的含量测定 69 （二）经水解后测定法（二）经水解后测定法 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCN AgSCN + NH4NO3 Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2C17H35COOH H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O 1. 1. 碱水解后测定法碱水解后测定法适用于适用于X X与脂肪链相连的卤代烷烃与脂肪链相连的卤代烷烃 例

45、如：三氯叔丁醇的含量测定例如：三氯叔丁醇的含量测定 2. 2. 酸水解后测定法酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定例如：硬脂酸镁的含量测定 70 （三（三）经还原分解后测定法经还原分解后测定法 COOH I I I NHCOCH3CH3CONH COOH H2NNH2 + 11NaOH + 3Zn + 3NaI + 2CH3COONa + 3NaZnO2 + 3H2O NaI + AgNO3 AgI + NaNO3 指示剂：曙红钠指示剂：曙红钠 终点：黄终点：黄红红 适用于适用于Ar-IAr-I的药物的药物 例如：泛影酸的含量测定例如：泛影酸的含量测定 71 三、经有机破坏的分析方法三、经

46、有机破坏的分析方法 凯氏定氮法凯氏定氮法 34244442 )(SOHN 42 NHSONHHSONH NaOHSOH 药药物物含含 碱滴定碱滴定酸酸 吸收液吸收吸收液吸收 / 金属原子、卤素等与金属原子、卤素等与C C结合牢固者，必须有机破坏结合牢固者，必须有机破坏 药物分析中常用的有机破坏的方法有药物分析中常用的有机破坏的方法有 干法破坏干法破坏 湿法破坏湿法破坏 ( (一一) )湿法破坏湿法破坏 H H2 2SOSO4 4-HNO-HNO3 3法法 H H2 2SOSO4 4-HClO-HClO4 4法 法 H H2 2SOSO4 4- -硫酸盐法硫酸盐法 H H2 2SOSO4 4-H

47、-H2 2O O2 2,HNO,HNO3 3-KMnO-KMnO4 4法等法等 72 （二）干法破坏（二）干法破坏 2.2.氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 测测定定吸吸收收无无机机离离子子有有机机药药物物、含含 吸吸收收液液、燃燃烧烧 2 O SePSX 适用于含卤素、适用于含卤素、S S、P P等有机药物分析的前处理，也等有机药物分析的前处理，也 用于某些药物中用于某些药物中SeSe及砷盐的检查及砷盐的检查 1. 1. 高温炽灼法高温炽灼法 加加无水无水Na2CO3、硝酸镁、氢氧化钙、硝酸镁、氢氧化钙或或ZnO以助灰化以助灰化 73 1） 仪器装置仪器装置 500ml, 1000ml, 2000ml,

48、 磨口、硬质磨口、硬质 玻璃锥形瓶玻璃锥形瓶 2 2）称样）称样 固体样；液体样；固体样；液体样；软膏类样品软膏类样品要求要求 3） 燃烧分解操作法燃烧分解操作法 4） 吸收液的选择吸收液的选择 用于用于X、S、Se等的鉴别、检查、等的鉴别、检查、 含量测定时多数是含量测定时多数是H2O或或H2O-NaOH；少数为少数为 H2O-NaOH-H2O2. 74 应用示例：碘苯酯的测定应用示例：碘苯酯的测定 75 第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 均需对分析方法进行验证均需对分析方法进行验证 验证内容验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、：准确度、精密度、专属性、检

49、测限、 定量限、线性、范围和耐用性定量限、线性、范围和耐用性 目的：证明采用的方法适合于相应检测要求。目的：证明采用的方法适合于相应检测要求。 起草药品质量标准起草药品质量标准 生产工艺变更生产工艺变更 制剂组分改变制剂组分改变 原分析方法修订原分析方法修订 76 一、准确度一、准确度 加加入入量量 测测得得量量 回回收收率率100 是指用该方法是指用该方法测定结果与真实值接近的程度测定结果与真实值接近的程度， 用用回收率回收率表示表示 （一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1. 1. 原料药：可用已知纯度对照品或供试品进行测原料药：可用已知纯度对照品或供试品进行测 定；或与已

50、知准确度的另一方法测定的结果进行定；或与已知准确度的另一方法测定的结果进行 比较比较 77 2. 2. 制剂：考察制剂：考察其他组分和辅料对回收率的影响其他组分和辅料对回收率的影响 用用含已知量被测物含已知量被测物的的制剂各组分混合物（包括制剂各组分混合物（包括 制剂辅料）制剂辅料）进行测定，回收率计算同原料药进行测定，回收率计算同原料药 向制剂中加入已知量的被测物进行测定向制剂中加入已知量的被测物进行测定 与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较 78 （二）具体做法：测定高、中、低三个浓度，（二）具体做法：测定高、中、低三个浓度， n=3, n=3,

51、 共共9 9个个数据来评价回收率数据来评价回收率；用用UVUV和和HPLCHPLC 法时，一般回收率可达法时，一般回收率可达9898.0%.0%102102.0%.0%；容量；容量 法可达法可达99.7%99.7%100.3%100.3% 79 回收率试验回收率试验精密称取盐酸小檗碱约精密称取盐酸小檗碱约40mg 40mg ，按处方比例加入，按处方比例加入 其它组分和辅料，其它组分和辅料，用适量沸腾的用适量沸腾的 0. 05mol/L H0. 05mol/L H2 2SOSO4 4 溶解。放冷溶解。放冷 置室温，定量转移至置室温，定量转移至250ml 250ml 量瓶中，并稀释至刻度。过滤，弃

52、量瓶中，并稀释至刻度。过滤，弃 去初滤液，取续滤液去初滤液，取续滤液 5.00ml 5.00ml 于于100ml 100ml 量瓶中并稀释至刻度，量瓶中并稀释至刻度， 按所选定的方法计算回收率按所选定的方法计算回收率。测定结果见下表。测定结果见下表。 三波长分光光度法测定连蒲双清片中盐酸小檗碱的含量三波长分光光度法测定连蒲双清片中盐酸小檗碱的含量 100%(%) 纯品加入量 加入纯品后的测得量 回收率 80 回收率试验回收率试验取连蒲双清片粉适量（约相当于盐酸小檗碱取连蒲双清片粉适量（约相当于盐酸小檗碱40mg)40mg) ，精密称取，精密加入盐酸小檗碱约，精密称取，精密加入盐酸小檗碱约40m

53、g40mg ，用，用0.05mol/L 0.05mol/L H H2 2SOSO4 4 溶解。放冷置室温，定量转移至溶解。放冷置室温，定量转移至250ml 250ml 量瓶中，并稀释量瓶中，并稀释 至刻度。过滤，弃去初滤液，取续滤液至刻度。过滤，弃去初滤液，取续滤液 5.00ml 5.00ml 于于100ml 100ml 量瓶量瓶 中定容，中定容，按所选定的方法计算回收率按所选定的方法计算回收率。测定结果见下表。测定结果见下表。 三波长分光光度法测定连蒲双清片中盐酸小檗碱的含量三波长分光光度法测定连蒲双清片中盐酸小檗碱的含量 100% - (%) 纯品加入量 加入前的测得量加入纯品后的测得量

54、回收率 81 2.2. 相对标准偏差相对标准偏差( (RSDRSD) ) 1. 1. 标准偏差标准偏差（SDSD或或S S） 1 1 2 n xx S n i i %100 x S RSD x 二、精密度二、精密度 （一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 82 （二）验证内容（二）验证内容 1. 1. 重复性重复性 在相同条件下在相同条件下, ,由由一个分析人员一个分析人员测定所测定所 得结果的精密度得结果的精密度. . 2.2. 中间精密度中间精密度 在同一个实验室，在同一个实验室，不同时间由不不同时间由不 同分析同分析 人员用不同设备人员用不同设备测定结果的精密度测定结果的精密度。 3.

55、3. 重现性重现性 在在不同实验室由不同分析人员不同实验室由不同分析人员测定结测定结 果的精果的精 密度。密度。 （三）数据要求（三）数据要求 均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限 83 三、专属性三、专属性 指在其他成分指在其他成分( (如杂质、降解产物、辅料等如杂质、降解产物、辅料等) )可可 能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性 鉴别、杂质检查、含量测定鉴别、杂质检查、含量测定方法，均应考察方法，均应考察 其专属性其专属性 （一）鉴别反应（一）鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，应能与

56、其它共存的物质或相似化合物区分， 不含被测组分的样品均应呈现负反应。不含被测组分的样品均应呈现负反应。 84 （二）含量测定和杂质测定（二）含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱， 以说明专属性。以说明专属性。 图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应 符合要求。符合要求。 在能获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对在能获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对 结果的干扰。结果的干扰。 在杂质和降解物不能获得的情况下，可用已验证在杂质和降解物不能获得的情况下，可用已验证 方法或药典方法进行对照；也可用

57、对试样加速破坏方法或药典方法进行对照；也可用对试样加速破坏 的方法，比较两种方法。的方法，比较两种方法。 85 四、检测限（四、检测限（LODLOD) ) 是指试样中被测物能被检测出的是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或最低浓度或 量量，是限度检验指标。它无需准确定量，只要指，是限度检验指标。它无需准确定量，只要指 出高于或低于该规定的浓度或量即可。出高于或低于该规定的浓度或量即可。 1. 1.目视法目视法 用含已知浓度被测物的试样进行分用含已知浓度被测物的试样进行分 析，目视确定能被可靠地检测出的被测物的最析，目视确定能被可靠地检测出的被测物的最 低浓度或量，常用于显色鉴别法，低浓度或量，

58、常用于显色鉴别法，TLC TLC 2.2.当用当用GCGC和和HPLCHPLC法时，一般以法时，一般以S/NS/N2 2或或3 3时的时的 相应浓度来确定检测限。相应浓度来确定检测限。 86 五、定量限（五、定量限（LOQLOQ) ) 是指样品中是指样品中被测物能被被测物能被定量测定定量测定的最低量的最低量，其其 测定结果应具一定准确度和精密度。测定结果应具一定准确度和精密度。 杂质和降解产物进行定量测定时，要求杂质和降解产物进行定量测定时，要求LOQLOQ。 常用信噪比法确定定量限，一般以常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10S/N=10时相应时相应 的浓度进行测定。的浓度进行测定。 8

59、7 六、线性六、线性 是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测 物浓度或量直接呈物浓度或量直接呈正比正比关系的关系的程度程度。 回归方程的回归方程的相关系数（相关系数（r r）越接近越接近1 1，表明线性越，表明线性越 好好 可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制 备一系列（至少备一系列（至少5 5份）供试液进行测定，以响应值份）供试液进行测定，以响应值 对浓度作图，建立回归方程，求出对浓度作图，建立回归方程，求出r r。 如如UVUV：制备一个标准系列，浓度点：制备一个标准系列，浓度点n =5n =5 A=

60、0.3-0.7 A=0.3-0.7 建立回归方程建立回归方程C = aA + bC = aA + b， r r0.99990.9999 88 七、范围七、范围 如如原料药和制剂含量测定原料药和制剂含量测定：应为测试浓度的：应为测试浓度的 80%80%1 120%20% 制剂含量均匀度检查制剂含量均匀度检查：应为测试浓度的：应为测试浓度的70%70% 130%130%。 溶出度或释放度中的溶出量测定溶出度或释放度中的溶出量测定：应为限度的：应为限度的 20%20%。 是指达到一定精密度、准确度和线性、测是指达到一定精密度、准确度和线性、测 试方法适用的高低限度或量的区间。试方法适用的高低限度或量