血脂及血浆脂蛋白检验

1、脂类：脂类：是生物体内不溶于水或微溶于水而溶于非极是生物体内不溶于水或微溶于水而溶于非极 性有机溶剂的一大类物质的总称，包括性有机溶剂的一大类物质的总称，包括脂肪和类脂脂肪和类脂。 脂肪脂肪 (fat)(fat)： 三脂酰甘油三脂酰甘油 (triacylglycerols,TAG)(triacylglycerols,TAG) 也称为也称为甘油三酯甘油三酯 (triglyceride, TG) (triglyceride, TG) 类脂类脂(lipoid)(lipoid)： 胆固醇胆固醇TC TC 胆固醇酯胆固醇酯 CECE 磷脂磷脂 PLPL 糖脂糖脂 第一节 概 述 v脂肪的消化与吸收 v1

2、、脂肪：占体重10%-20%，分布在皮下、 大网膜、肠系膜、肾周围-脂库；易受营养 状况和活动量等因素等影响而变动，称可变 脂 v2、类脂：占体重5%，分布在各组织和器官 中，含量恒定，称恒定脂或基本脂 分类分类占体重占体重分布分布生理功能生理功能 甘油三酯甘油三酯 1020 脂肪组织脂肪组织 （皮下，腹（皮下，腹 腔大网膜，腔大网膜， 肠系膜，内肠系膜，内 脏周围组脏周围组 织）织）、血、血 浆浆 1. 储脂供能储脂供能 2. 促脂溶性维生素吸收促脂溶性维生素吸收 3. 保持体温保持体温,保护内脏保护内脏 4. 构成血浆脂蛋白构成血浆脂蛋白 糖酯、磷脂、糖酯、磷脂、 胆胆固醇及其固醇及其 酯

3、酯 5 生物膜、生物膜、 神经、神经、 血浆血浆 1. 维持生物膜的结构和功能维持生物膜的结构和功能 2. 胆固醇可转变成类固醇激胆固醇可转变成类固醇激 素、维生素素、维生素D、胆汁酸等、胆汁酸等 3. 构成血浆脂蛋白构成血浆脂蛋白 血脂血脂 ：血浆中所含脂类的总称，主要包括甘油三：血浆中所含脂类的总称，主要包括甘油三 酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯及游离脂肪酸等。酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯及游离脂肪酸等。 体内合成的脂类体内合成的脂类 血脂来源和去路：血脂来源和去路： 食物脂类的消化吸收食物脂类的消化吸收 脂库动员释放脂库动员释放 一、血脂及血浆脂蛋白一、血脂及血浆脂蛋白 血脂血脂 氧化供能氧化

4、供能 进入脂库储存进入脂库储存 构成生物膜构成生物膜 转化成其他物质转化成其他物质 血浆脂蛋白：血浆脂蛋白：脂类与载脂蛋白组成的颗粒脂类与载脂蛋白组成的颗粒，是是 脂类在血浆中的存在和转运形式；脂类在血浆中的存在和转运形式； （一）（一）. .血浆脂蛋白的分类和命名：血浆脂蛋白的分类和命名： + CM 前前 血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳图谱血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳图谱 （1 1）电泳分类法）电泳分类法：可分离出：可分离出脂蛋白、前脂蛋白、前脂蛋白、脂蛋白、 脂蛋脂蛋 白和乳糜微粒白和乳糜微粒. 按密度大小依次为：按密度大小依次为： 乳糜微粒（乳糜微粒（CM） 极低密度脂蛋白（极低密度脂蛋白（VLD

5、L) 低密度脂蛋白低密度脂蛋白 (LDL) 高密度脂蛋白高密度脂蛋白 (HDL ) 密密 度度 血浆脂蛋白的分类血浆脂蛋白的分类 颗颗 粒粒 （2 2）超速离心分类法）超速离心分类法 电泳法和超速离心法分离的脂蛋白对应关系为电泳法和超速离心法分离的脂蛋白对应关系为： 脂蛋白相当于脂蛋白相当于HDL、前、前脂蛋白相当于脂蛋白相当于VLDL、 脂脂 蛋相当于蛋相当于LDL （1 1）脂类：甘油三酯、磷脂、胆固醇和胆固醇）脂类：甘油三酯、磷脂、胆固醇和胆固醇 酯，其含量和比例在各类脂蛋白中差别极大。酯，其含量和比例在各类脂蛋白中差别极大。 （二）、血浆脂蛋白的组成、血浆脂蛋白的组成 脂类脂类和和载脂

6、蛋载脂蛋 白白组成组成 （2）载脂蛋白（）载脂蛋白（apo）：是指血浆脂蛋白中蛋白）：是指血浆脂蛋白中蛋白 质成分，分为质成分，分为apoA、apoB、apoC、apoD、apoE， 其主要功能是结合和转运脂类，此外不同载脂蛋其主要功能是结合和转运脂类，此外不同载脂蛋 白还有其特殊功能。白还有其特殊功能。 脂蛋白的结构脂蛋白的结构 血浆脂蛋白的结构血浆脂蛋白的结构 CM VLDL LDL HDL 密度密度0.960.961.0061.0061.0631.0631.210 组组 成成 脂脂 类类 含含TG最多最多， 8095% 含含TG 5070% 含含胆固醇及其胆固醇及其 酯最多酯最多4550

7、% 含含脂类脂类50% 蛋蛋 白白 质质 最少最少, 2%10%20%最多，约最多，约50% 功能功能从小肠转运外从小肠转运外 源性甘油三酯源性甘油三酯 至肝脏及肝外至肝脏及肝外 组织组织 从肝脏转运从肝脏转运 内源性甘油内源性甘油 三酯至各组三酯至各组 织织 从肝脏转运胆从肝脏转运胆 固醇至各组织固醇至各组织 逆向转运胆固逆向转运胆固 醇醇 血血 浆浆 脂脂 蛋蛋 白白 的的 组组 成成 特特 点点 v在结合和转运脂质及稳定脂蛋白的结构上发挥主要在结合和转运脂质及稳定脂蛋白的结构上发挥主要 作用作用 v调节脂蛋白代谢关键酶调节脂蛋白代谢关键酶(如如LPL、LCAT、HL)活性活性 LCAT：

8、卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（血浆中）：卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（血浆中） v参与脂蛋白受体的识别参与脂蛋白受体的识别 如如HDL受体、受体、LDLR或称为或称为ApoB/E受体、清道受体、清道 夫受体、夫受体、ApoE受体（即受体（即LRP：LDL受体相关蛋白受体相关蛋白 ） 载脂蛋白的功能载脂蛋白的功能 二、二、 脂蛋白代谢紊乱脂蛋白代谢紊乱 空腹血浆中的脂类水平高于参考值上限者空腹血浆中的脂类水平高于参考值上限者 称为称为高脂血症高脂血症。临床常见的有高胆固醇血症、。临床常见的有高胆固醇血症、 高甘油三酯血症等。高甘油三酯血症等。 又称高脂蛋白血症，临床上通常将空腹又称高脂蛋白血症，临床上通常将

9、空腹 血浆中一种或几种血浆中一种或几种LPLP含量明显升高称高脂蛋含量明显升高称高脂蛋 白血症。白血症。 返回 v继发性高脂蛋白血症：继发性高脂蛋白血症：指某些原发病在病理演变过程指某些原发病在病理演变过程 中造成脂蛋白代谢紊乱，而继发出现高脂蛋白血症。中造成脂蛋白代谢紊乱，而继发出现高脂蛋白血症。 如糖尿病、肾病综合征、甲状腺功能减退症等如糖尿病、肾病综合征、甲状腺功能减退症等。 v原发性高脂蛋白血症：原发性高脂蛋白血症：指在排除了继发性高脂血症后，指在排除了继发性高脂血症后， 即可诊断为原发性高脂血症。已知部分原发性高脂血即可诊断为原发性高脂血症。已知部分原发性高脂血 症是由于先天性基因缺

10、陷所致。症是由于先天性基因缺陷所致。 高脂蛋白血症的分型高脂蛋白血症的分型 按病因分型按病因分型 分类分类血浆血浆44过夜外观过夜外观 TCTCTGTG发生发生 频率频率 相当于相当于WHOWHO表型表型 I I类类透明透明常见常见aa 类类混浊或伴奶油上混浊或伴奶油上 层层 常见常见bb、 类类奶油上层，下层奶油上层，下层 透明透明 罕见罕见 14 高脂蛋白血症的高脂蛋白血症的Lewis分型法（分型法（1976年）年） 表型表型血浆血浆44过夜外观过夜外观 TCTCTGTGCMCMVLDLVLDLLDLLDL备注备注 奶油上层奶油上层, , 下层清下层清 易发胰腺炎易发胰腺炎 aa透明透明易

11、发冠心病易发冠心病 b b 透明透明易发冠心病易发冠心病 奶油上层奶油上层, , 下层混浊下层混浊 易发冠心病易发冠心病 混浊混浊易发冠心病易发冠心病 奶油上层奶油上层, , 下层混浊下层混浊 易发胰腺炎易发胰腺炎 高脂蛋白血症的高脂蛋白血症的WHO分类分类 型别型别* 增加的脂增加的脂 蛋白蛋白 血浆脂质血浆脂质血浆载脂蛋白血浆载脂蛋白血浆外观血浆外观电电 泳泳原原 因因 型型CM TC正常或正常或 TG B48A C 奶油上层奶油上层 下层透明下层透明 原点深染原点深染 LPL活性降低活性降低 ApoC缺乏缺乏 a型型LDL TC TG正常正常 B100 透明或轻透明或轻 度混浊度混浊 深

12、深带带 LDL受体缺陷或受体缺陷或 活性降低；活性降低；LDL 异化障碍异化障碍 b型型 LDL VLDL TC TG BC C 少有混浊少有混浊 深深带带 深前深前带带 VLDL合成旺盛合成旺盛 VLDLLDL转转 换亢进换亢进 型型IDL TC TG CC E 奶油上层奶油上层 下层混浊下层混浊 宽宽带带 LDL异化速度降异化速度降 低低 型型VLDL TC正常或正常或 TG CC混浊混浊深前深前带带 VLDL合成亢进合成亢进 VLDL处理速率处理速率 变慢变慢 型型 CM VLDL TC TG C CE 奶油上层奶油上层 下层混浊下层混浊 原点及前原点及前 带深染带深染 LPL活性低下活

13、性低下 VLDL,CM处理速处理速 率低下率低下 脂蛋白血症的分型及特征脂蛋白血症的分型及特征 型高脂蛋白血症 v表现：TG升高，TC正常，CM、 VLDL含量增高，LDL和HDL降低， 又称高CM血症 v原因：LPL活性降低，使CM中的TG 不能水解为CM残粒，无法被LDL受 体识别进行代谢 a型高脂蛋白血症 v表现：血清TG、B、LDL和TC含 量明显增高，电泳可发现浓染的 脂蛋白带，又称高脂蛋白 血症 v原因：LDL受体缺陷或活性降低， 使LDL无法被识别和降解，导致 血中LDL升高。 b型高脂蛋白血症 v表现：Tc和TG 增高， LDL和VLDl增高 v电泳时除有高脂蛋白带外，还有前脂

14、 蛋白带，但二者不融合，称混合型高脂血症 v原因：LDL受体正常，但VLDL合成旺盛，B 合成旺盛，但VLDL代谢未加强。造成VLDL 在血中储积。 型高脂蛋白血症 表现：TC和TG增高，电泳可发现阔脂蛋白带， （ 脂蛋白带和前脂蛋白带融合），也称 高VLDL血症 原因：罕见的遗传病，患者早年即可发生冠心病 型高脂蛋白血症 v表现：高TG，LDL正常，HDL降低， 又称高TG血症 v原因：病因尚不完全清楚，为显性 遗传疾病，VLDL合成亢进，VLDL 代谢速度减慢 型高脂蛋白血症 v表现：TG增高，CM和VLDL增高，电泳 表现为高CM和高前脂蛋白血症共存 的混合性高脂血症，4放置血清可呈 “

15、奶油样”。 v原因：LPL活性低下，导致TG不能降解 和VLDL生成过多，引起血中淤积。 表型表型血浆血浆44过夜外观过夜外观 TCTCTGTGCMCMVLDLVLDLLDLLDL备注备注 奶油上层奶油上层, , 下层清下层清 易发胰腺炎易发胰腺炎 aa透明透明易发冠心病易发冠心病 b b 透明透明易发冠心病易发冠心病 奶油上层奶油上层, , 下层混浊下层混浊 易发冠心病易发冠心病 混浊混浊易发冠心病易发冠心病 奶油上层奶油上层, , 下层混浊下层混浊 易发胰腺炎易发胰腺炎 高脂蛋白血症的高脂蛋白血症的WHO分类分类 动脉粥样硬化（AS）概述 vAS是动脉内膜的脂质、血液成分的淤积和纤 维蛋白

16、的增生并伴有钙化和坏死及炎症病变 的一类慢性进行性病理过程。目前是人类第 一发病率高的疾病，但对其发病机理尚不完 全清楚，共同的观点认为：血脂的改变、纤 溶系统亢进、高血压和血管内膜炎症是AS的 重要病因 脂蛋白代谢与AS的关系 血脂与AS的关系 （1）血脂的异常增高是产生AS的重要因 素 （2）血管内皮炎症、氧化型LDL在血管内 膜中淤积和产生泡沫细胞是形成As的主 要原因 （3）高脂血症引起的血粘度的改变，进而 改变凝血系统和纤溶系统的各种因子的 表达和功能，可促进血栓的形成，加速 As的形成和发展 目前对AS研究的新观点 （1）脂蛋白的氧化 oxLDL的形 成是炎症分子强有力的诱导物 （

17、2）血栓素和前列腺素平衡失常 血小板的聚集可释放血栓素导致血 栓发生 （3）内皮细胞损伤和钙化 内皮细 胞损伤激活纤维蛋白激活剂如组织 因子，血小板激活因子，IL1等促 血凝物质，导致血管钙化，加剧血 栓形成。 高脂血症的防治 v 合理饮食 v加强锻炼 v控制体重 v食疗和药物治疗相结合 国外血脂标准化工作的回顾和现状 70年代中期，血脂与冠心病关系确立后， 血脂测定工作和质量控制日益受到重视， 美国西北临床脂质研究中心（LRC）进行 了实验室间的血脂评价，发现CV值差距 相当大。 1985年，美国CDC提出TC和TG测定的 标准化计划，并与WHO合作，当时有800 多实验室参加，由CDC提供

18、标准血清，目 的摸清实验室间TC和TG测定的准确度和 精密性，提高血脂测定水平。 1985年，美国卫生研究院（NIH）提出 胆固醇教育计划（NCEP），成立NCEP委 员会，并投入大量资金，动员所有相关组 织，成立了四个专家组（LSP），领导TC 标准化工作。 1990年，NCEP提出了胆固醇测定的方 法学建议，并在1995年又提出了LDL、 HDL和TG测定的建议，并对几项脂类测定 的现状、变异来源、分析目标、医学决定 水平及方法学、制造商和机构提出了具体 的建议，被称为美国脂类测定的纲领性文 件 1981年，国际免疫学会联盟的脂类 载脂蛋白委员会和美国CDC提供了 有ApoA和B的质控血清

19、，分别在 83年和87年进行了室间质量控制。 1989年，国际临床化学联合会 （IFCC）召开了载脂蛋白免疫化 学测定的标准化会议，整理了一 个统一的标准化计划，并提出了一 个草案，于1989年7月讨论实施。 目前国际脂类标准化体系和组成（美国） 美国心肺血液研究所 国家协作委员会 实验室标准化专家（LSP） 国家临床实验室 标准化委员会 （NCCLS） 国家临床实验室参 考系统（NRSL） 国家胆固醇参考 系统NRSCHO 学术团体政府机构 企 业 美国脂类测定的标准化体系 1.对各项脂类测定提出分析目标 脂类测定分析目标(NCEP 1994) 组别 总误差% 不准确性(偏差%) 不精确度(

20、CV) TC 8.933 LDL1244 HDL1354 TG1555 美国脂类测定的标准化体系 建立了脂质研究的实验室网络和国家胆固醇 参考方法实验室网络 有专门的机构提供标准化血清和标准化指导 服务,(包括优秀方法的研究和推荐,参考材料 和质控材料的研究和提供),并定期做质量调查 我国脂类测定的标准化现状 至今，我国尚无全国性的脂类标准化体系，但有区域性 的调查和行业标准化，已做了大量的基础性工作。 （1）调查摸底 1987年江浙和1992年京津沪医院实验 室Tc测定调查 （2）参考物的研制 老年所研制了胆固醇纯度标准物质 （GBW092030）和血清胆固醇标准物 （GBW09138），1

21、994年国家技术监督局批准作为 国家一级标准，达到了美国标准物同等水平，纯度 99.8，最近又制备了APOA和B的定值血清，得到 WHO的认可 我国脂类测定的标准化现状 （3）参考方法的研究 老年所提出了HLPC法为 TC的参考方法其各项技术指标达到了美国 ALBK法的要求 （4）推荐常规测定方法 1994年全国脂类测定 研讨会提出了TC、TG、HDL和LDL的推荐方 法，2003年又发表了临床血脂测定建议 血清脂质的测定 血浆中的脂质随年龄增长而变化， 并与多种因素有关系，因此，研 究分析前的变异是血脂标准化测 定的基础，也是必要的考虑因素。 第二节 血清总胆固醇测定 （1）化学法 （ALB

22、K法）皂化、提 取、显色、比色。美国参考方法 （2）高效液相法 我国的参考方法 （3）酶法 临床常规测定方法 酶法测定血脂的原理 胆固醇酯酶（CEH） 胆固醇酯 游离胆固醇 脂肪酸 胆固醇氧化酶（COD） 游离胆固醇 4 胆甾烯酮 H2O2 H2O2酶 H2O2 4氨基安替吡啉 萘酚 红色醌亚胺 H2O 临床意义 v病理性血清胆固醇增高：脂肪肝、肝脏肿瘤、 甲状腺功能减退、严重糖尿病、动脉粥样硬 化 v病理性血清胆固醇降低：肝脏疾病、肝脏肿 瘤、甲状腺功能亢进，恶性贫血 第三节 血清三脂酰甘油的测定 目前尚无统一的参考方法，美国CDC的参考 方法为二氯甲烷硫酸变色酸法，卫生部 老年所拟推我国的

23、TG参考方法为HLPC法 TG又称中性脂肪，由于其甘油骨架上分别结 合了3分子脂肪酸，2分子脂肪酸和1分子脂肪 酸 TG的测定方法 （1）化学法 提取、分离、皂化、甘油糖的氧化和显色 （2）酶法 氧化酶法推荐常规方法 酶氧化法测定TG的原理 v 脂肪酶（LPC） 甘油三酯 甘油 游离 脂肪酸 甘油激酶（GK） 甘油 ATP 甘油3磷酸 ADP 甘油3磷酸氧化酶 甘油3磷酸 磷酸二羟丙酮 H2O2 H2O2酶 H2O2 4氨基安替吡啉 萘酚 红色醌亚胺 H2O 第四节 HDL的测定 1.超速离心法 美国参考方法 要求： a .离心率4000r/min,18.5h,去除富含TG的脂蛋 白（CM、H

24、DL） B.下层悬浮液用肝素MnCL2 离心沉淀 （1500g,30min） C .用CDC参考方法测定血脂的含量 2.化学沉淀法 多用磷钨酸镁沉淀法 卫生部推荐法 原理：一些阴离子（如磷钨酸）与非离子 多聚体或某些二价阳离子合用可使除 HDL外的含ApoB的脂蛋白都沉淀，然后 在行血脂的测定 优点：经济、适用于普通实验室 缺点：易受高TG的干扰，使沉淀后的上清 液呈混浊状，且镁离子可抑制酶法测TC 的酶活性。 脂类：脂类：是生物体内不溶于水或微溶于水而溶于非极是生物体内不溶于水或微溶于水而溶于非极 性有机溶剂的一大类物质的总称，包括性有机溶剂的一大类物质的总称，包括脂肪和类脂脂肪和类脂。 脂

25、肪脂肪 (fat)(fat)： 三脂酰甘油三脂酰甘油 (triacylglycerols,TAG)(triacylglycerols,TAG) 也称为也称为甘油三酯甘油三酯 (triglyceride, TG) (triglyceride, TG) 类脂类脂(lipoid)(lipoid)： 胆固醇胆固醇TC TC 胆固醇酯胆固醇酯 CECE 磷脂磷脂 PLPL 糖脂糖脂 第一节 概 述 血脂血脂 ：血浆中所含脂类的总称，主要包括甘油三：血浆中所含脂类的总称，主要包括甘油三 酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯及游离脂肪酸等。酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯及游离脂肪酸等。 体内合成的脂类体内合成的脂类 血脂来源和去路：血脂来源和去路： 食物脂类的消化吸收食物脂类的消化吸收 脂库动员释放脂库动员释放 一、血脂及血浆脂蛋白一、血脂及血浆脂蛋白 血脂血脂 氧化供能氧化供能 进入脂库储存进入脂库储存 构成生物膜构成生物膜 转化成其他物质转化成其他物质 血浆脂蛋白：血浆脂蛋白：脂类与载脂蛋白组成的颗粒脂类与载脂蛋白组成的颗粒，是是 脂类在血浆