酶生物传感器课件

1、酶生物传感器1 第四章第四章 酶生物传感器酶生物传感器 Enzyme Biosensor 一、酶的本质与特征一、酶的本质与特征 酶的本质酶的本质 酶是生物体内产生的、具有催化活性酶是生物体内产生的、具有催化活性 的一类蛋白质。的一类蛋白质。 根据化学组成分为两大类，即单纯蛋根据化学组成分为两大类，即单纯蛋 白酶与结合蛋白酶。白酶与结合蛋白酶。 根据酶的催化反应类型分为氧化还原根据酶的催化反应类型分为氧化还原 酶、转移酶、水解酶、异构酶等。酶、转移酶、水解酶、异构酶等。 酶生物传感器2 酶的基本特征酶的基本特征 酶的高效催化性酶的高效催化性 酶的催化效率通常比一般催化剂酶的催化效率通常比一般催化

2、剂 高高106-1012倍。酶之所以能高效催化，倍。酶之所以能高效催化， 是通过降低反应所需的活化能实现的。是通过降低反应所需的活化能实现的。 酶生物传感器3 酶的高度特异性酶的高度特异性 酶不仅具有一般催化剂加快反应酶不仅具有一般催化剂加快反应 速度的作用，而且具有高度的特异性。速度的作用，而且具有高度的特异性。 绝对特异性绝对特异性 相对特异性相对特异性 立体异构特异性立体异构特异性 酶生物传感器4 酶促反应动力学酶促反应动力学 酶促反应动力学是研究酶反应速度及酶促反应动力学是研究酶反应速度及 各种因素对酶反应速度影响的科学。各种因素对酶反应速度影响的科学。 主要影响因素包括有：底物浓度、

3、酶主要影响因素包括有：底物浓度、酶 浓度、浓度、 pHpH值、温度、抑制剂与激活剂等。值、温度、抑制剂与激活剂等。 酶生物传感器5 酶动力学测定的是初速度，是指酶酶动力学测定的是初速度，是指酶 在反应过程中底物初始浓度被消耗在在反应过程中底物初始浓度被消耗在5%5% 以内的速度。目的是排除酶反应过程中以内的速度。目的是排除酶反应过程中 出现的各种干扰因素，以便测得准确的出现的各种干扰因素，以便测得准确的 酶反应速度。酶反应速度。 酶生物传感器6 底物浓度对酶促反应速度的影响底物浓度对酶促反应速度的影响 酶生物传感器7 酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对酶促反应速度的影响 若底物初始浓度固定时，

4、酶反若底物初始浓度固定时，酶反 应速度与酶浓度呈线性关系。应速度与酶浓度呈线性关系。 酶生物传感器8 温度对酶促反应速度的影响温度对酶促反应速度的影响 每一种酶的催化反应都有适宜的温度每一种酶的催化反应都有适宜的温度 范围和最适温度。范围和最适温度。 酶生物传感器9 pHpH对酶促反应速度的影响对酶促反应速度的影响 每一种酶都有适宜的每一种酶都有适宜的pHpH值范围值范围 和最适和最适pHpH值。在一定的值。在一定的pHpH下，酶促下，酶促 反应具有最高的反应速度，此反应具有最高的反应速度，此pHpH称称 为该酶的最适为该酶的最适pHpH。 酶生物传感器10 酶生物传感器11 抑制剂、激活剂对

5、酶促反应速度的影响抑制剂、激活剂对酶促反应速度的影响 凡能降低酶的活性甚至使酶完全失活凡能降低酶的活性甚至使酶完全失活 的物质称为抑制剂，抑制剂的种类很多，的物质称为抑制剂，抑制剂的种类很多， 包括药物、抗生素、毒物、抗代谢物以及包括药物、抗生素、毒物、抗代谢物以及 酶促反应产物等。酶促反应产物等。 酶生物传感器1212 凡能激活酶活性的物质，均称激活剂。凡能激活酶活性的物质，均称激活剂。 某些酶必须有激活剂存在，才能进行酶促反某些酶必须有激活剂存在，才能进行酶促反 应。激活剂大部分为某些无机离子，也有一应。激活剂大部分为某些无机离子，也有一 些有机分子。些有机分子。 酶生物传感器13 二、酶

6、传感器二、酶传感器 酶传感器是酶传感器是应用固定化酶作为敏感元应用固定化酶作为敏感元 件件与各种信号转换器组合而成的生物传感与各种信号转换器组合而成的生物传感 器器。 依据信号转换器的类型，酶传感器大依据信号转换器的类型，酶传感器大 致可分为酶电极、酶场效应管传感器、酶致可分为酶电极、酶场效应管传感器、酶 热敏电阻传感器、酶压电晶体型、光纤光热敏电阻传感器、酶压电晶体型、光纤光 学型等。学型等。 酶生物传感器14 传感器的类型传感器的类型 酶生物传感器15 4.1 4.1 酶电极传感器酶电极传感器 Enzyme electrode sensor 酶电极是由固定化酶与电流型电极酶电极是由固定化酶

7、与电流型电极 或电位型电极组合而成的生物传感器。或电位型电极组合而成的生物传感器。 具有酶的分子识别和选择催化功能，具有酶的分子识别和选择催化功能， 又有电化学电极响应快、操作简便的特又有电化学电极响应快、操作简便的特 点，能快速测定试液中某一给定化合物点，能快速测定试液中某一给定化合物 的浓度，且需很少量的样品。的浓度，且需很少量的样品。 酶生物传感器16 电流型酶电极电流型酶电极 电流型酶电极是将酶促反应产生的物电流型酶电极是将酶促反应产生的物 质在电极上发生氧化或还原反应产生的质在电极上发生氧化或还原反应产生的电电 流作为测量信号流作为测量信号，在一定条件下，利用测，在一定条件下，利用测

8、 得的电流信号与被测物活度或浓度的函数得的电流信号与被测物活度或浓度的函数 关系，来测定样品中某一生物组分的活度关系，来测定样品中某一生物组分的活度 或浓度。或浓度。 酶生物传感器1717 制作生物传感器最常用的是氧化酶：制作生物传感器最常用的是氧化酶： 底物底物+O2 产物产物+H2O2 酶生物传感器18 基础电极可采用氧、过氧化氢电极，还基础电极可采用氧、过氧化氢电极，还 可采用近年开发的介体修饰的炭、铂、钯和可采用近年开发的介体修饰的炭、铂、钯和 金等固体电极或介体修饰电极。金等固体电极或介体修饰电极。 酶生物传感器19 氧电极氧电极：是一个通过测定电解电流来测定：是一个通过测定电解电流

9、来测定 溶液中氧含量的电解池。溶液中氧含量的电解池。 工作时，在铂阴极和工作时，在铂阴极和 Ag阳极之间施加阳极之间施加0.6V 的电压。当的电压。当E=-0.2V时时 电极开始电解，产生还电极开始电解，产生还 原电流，其还原反应式原电流，其还原反应式 为：为： 22 244OH OeOH 酶生物传感器20 使用最多的是封闭式的使用最多的是封闭式的Clark氧电极氧电极 酶生物传感器21 铂电极与铂电极与Ag电极组合在一起置于参比电极组合在一起置于参比 溶液中，与被测溶液之间用透氧膜隔开。溶液中，与被测溶液之间用透氧膜隔开。 被测溶液中的溶解氧通过膜扩散到电解质被测溶液中的溶解氧通过膜扩散到电

10、解质 溶液薄层，再扩散到铂电极表面进行还原溶液薄层，再扩散到铂电极表面进行还原 产生电流。产生电流。 酶生物传感器22 H2O2电极电极 H2O2电极基本测量电路和电压电极基本测量电路和电压-电流曲线电流曲线 酶生物传感器23 两极间外加一定电压，实际测量时，外加两极间外加一定电压，实际测量时，外加 电压控制在电压电压控制在电压-电流曲线的平滑部分，即电流曲线的平滑部分，即0.7- 0.9V，此时输出电流就与浓度成比例。，此时输出电流就与浓度成比例。 阳极反应阳极反应 阴极反应阴极反应 222 22H OOHe 22 1 22 2 eHOH O 酶生物传感器24 酶生物传感器25 1.1.葡萄

11、糖传感器葡萄糖传感器 葡萄糖传感器是研究最早、开发最成葡萄糖传感器是研究最早、开发最成 熟并已市场化的生物传感器，即血糖仪。熟并已市场化的生物传感器，即血糖仪。 各种型号的血糖仪产品各种型号的血糖仪产品 酶生物传感器26 （1 1）早期的葡萄糖传感器）早期的葡萄糖传感器 早期的葡萄糖传感器是由葡萄糖氧化早期的葡萄糖传感器是由葡萄糖氧化 酶膜和电化学电极组成的。在电化学电极酶膜和电化学电极组成的。在电化学电极 的透气膜上固定葡萄糖氧化酶。的透气膜上固定葡萄糖氧化酶。 酶生物传感器27 当葡萄糖溶液与酶膜接触时，发生如下反应：当葡萄糖溶液与酶膜接触时，发生如下反应： 612622612722 22

12、C H OH OOC H OH O 葡萄糖氧化酶 酶生物传感器2828 故葡萄糖浓度测试方法有三种：故葡萄糖浓度测试方法有三种： 生成的葡萄糖酸生成的葡萄糖酸 消耗的氧消耗的氧 生成的生成的H2O2 612622612722 22C H OH OOC H OH O 葡萄糖氧化酶 酶生物传感器29 测量葡萄糖酸的葡萄糖传感器：测量葡萄糖酸的葡萄糖传感器： pH pH电极和离子敏场效应管测定葡萄糖酸电极和离子敏场效应管测定葡萄糖酸 的量来计算样品中葡萄糖的含量，最低检测的量来计算样品中葡萄糖的含量，最低检测 限为限为1010-3 -3 mol molL L，灵敏度较低；，灵敏度较低； 酶生物传感器

13、30 测量氧消耗量的葡萄糖传感器：测量氧消耗量的葡萄糖传感器： ClarkClark氧电极用于测定酶促反应中氧氧电极用于测定酶促反应中氧 的消耗量的消耗量( (电流降低的量电流降低的量) )来计算样品中葡来计算样品中葡 萄糖的含量，最低检测限为萄糖的含量，最低检测限为1010-4 -4 mol molL L 。 22 244OH OeOH 酶生物传感器31 葡萄糖氧化产生葡萄糖氧化产生H2O2， ， H2O2通过选择 通过选择 性透气膜，在性透气膜，在Pt电极上氧化，葡萄糖的含量电极上氧化，葡萄糖的含量 与生成的电流成正比，由此可测出葡萄糖的与生成的电流成正比，由此可测出葡萄糖的 浓度。浓度。

14、 检测检测H2O2的方法的本底电流小，灵敏的方法的本底电流小，灵敏 度高，其最低检出限为度高，其最低检出限为1010-8 -8mol molL L。 测量测量H2O2生成量的葡萄糖传感器：生成量的葡萄糖传感器： 222 22H OOHe 酶生物传感器32 （2）改进的葡萄糖传感器）改进的葡萄糖传感器 为消除环境中氧对测定的干扰，用为消除环境中氧对测定的干扰，用 四硫富瓦烯、二茂铁四硫富瓦烯、二茂铁等容易在电极上氧化等容易在电极上氧化 还原的介体来代替氧的电子传递作用。还原的介体来代替氧的电子传递作用。电电 子介体子介体是酶氧化还原活性中心与电极表面是酶氧化还原活性中心与电极表面 之间的电子传递

15、中介物，在电流型酶电极之间的电子传递中介物，在电流型酶电极 中起着关键性作用。中起着关键性作用。 各种电子传递介体的使用，使得电流各种电子传递介体的使用，使得电流 型酶传感器的响应速度、检测灵敏度和选型酶传感器的响应速度、检测灵敏度和选 择性都得到了很大的提高。择性都得到了很大的提高。 酶生物传感器33 方法：方法：将葡萄糖氧化酶和电子介体将葡萄糖氧化酶和电子介体 同时包埋于聚合物膜中，或直接修饰于同时包埋于聚合物膜中，或直接修饰于 电极的表面构成葡萄糖酶传感器。电极的表面构成葡萄糖酶传感器。 酶生物传感器34 在葡萄糖氧化酶（在葡萄糖氧化酶（ ）的催化下，）的催化下， 葡萄糖被氧化为葡萄糖酸

16、，再由二茂铁离葡萄糖被氧化为葡萄糖酸，再由二茂铁离 子将还原型葡萄糖氧化酶（子将还原型葡萄糖氧化酶（ ）氧化）氧化 为氧化型葡萄糖氧化酶（为氧化型葡萄糖氧化酶（ ），然后二），然后二 茂铁在电极上氧化成二茂铁离子，通过二茂铁在电极上氧化成二茂铁离子，通过二 茂铁在电极上产生的氧化电流来实现葡萄茂铁在电极上产生的氧化电流来实现葡萄 糖含量的检测。糖含量的检测。 GOX GOD GOX 酶生物传感器3535 介体传感器的特点：介体传感器的特点： 仅用较低的电压就能使介体氧化。仅用较低的电压就能使介体氧化。 传感器对氧不敏感，能在缺氧和氧浓度传感器对氧不敏感，能在缺氧和氧浓度 变化的条件下使用。变化

17、的条件下使用。 二茂铁离子与还二茂铁离子与还原原GOD之间之间的电子传递的电子传递 快，电极响应迅速。快，电极响应迅速。 酶生物传感器3636 采用场效应晶体管和微电极做换能器，采用场效应晶体管和微电极做换能器， 以缩小传感器的体积；以缩小传感器的体积； 利用电子技术、改善信号放大和显示方利用电子技术、改善信号放大和显示方 法，使其易于商品化；法，使其易于商品化； 改善采样方法，使患者使用方便或更易改善采样方法，使患者使用方便或更易 于临床应用。于临床应用。 最重要的改进是使用化学电子传递中间最重要的改进是使用化学电子传递中间 介体代替作为自然电子受体的氧，使酶催化介体代替作为自然电子受体的氧

18、，使酶催化 反应不再受到溶解氧含量的制约。反应不再受到溶解氧含量的制约。 酶生物传感器37 （3）血糖仪测试片）血糖仪测试片 血糖仪测试片血糖仪测试片 酶生物传感器38 手表式的葡萄糖传感器手表式的葡萄糖传感器 酶生物传感器39 酶生物传感器40 手表式无创血糖仪是近年来出现的一手表式无创血糖仪是近年来出现的一 种无创、无痛，能连续测定血糖的设备。它种无创、无痛，能连续测定血糖的设备。它 通过电化学传感器和电渗透原理来检测皮下通过电化学传感器和电渗透原理来检测皮下 组织液中的葡萄糖浓度，无需针刺采血。组织液中的葡萄糖浓度，无需针刺采血。 手表式血糖仪测定的是组织间液葡萄糖手表式血糖仪测定的是组

19、织间液葡萄糖 值，因此要略滞后于指血血糖值。值，因此要略滞后于指血血糖值。 酶生物传感器4141 (2)(2)乳酸电极乳酸电极 血液中乳酸的浓度是反映人体体力血液中乳酸的浓度是反映人体体力 消耗程度的重要指标。在体育运动训练中消耗程度的重要指标。在体育运动训练中 乳酸的检验是极为必要，国际上乳酸传感乳酸的检验是极为必要，国际上乳酸传感 器已经有成熟的商品仪器。器已经有成熟的商品仪器。 酶生物传感器42 酶生物传感器4343 还可采用介体修饰的方法制备还可采用介体修饰的方法制备 乳酸传感器。乳酸传感器。 在电极上滴介体四硫在电极上滴介体四硫 富富瓦烯瓦烯(TTF)浆液，晾浆液，晾干后，将乳酸干后

20、，将乳酸 氧化酶固定在该电极表面修饰层上氧化酶固定在该电极表面修饰层上 面，即构成乳酸传感器。面，即构成乳酸传感器。 酶生物传感器4444 酶生物传感器4545 在乳酸氧化酶的催化下，乳酸被氧化在乳酸氧化酶的催化下，乳酸被氧化 为丙酮酸，再由四硫富瓦烯离子将还原型为丙酮酸，再由四硫富瓦烯离子将还原型 乳酸氧化酶氧化为氧化型乳酸氧化酶，然乳酸氧化酶氧化为氧化型乳酸氧化酶，然 后四硫富瓦烯在电极上氧化成四硫富瓦烯后四硫富瓦烯在电极上氧化成四硫富瓦烯 离子，通过四硫富瓦烯在电极上产生的氧离子，通过四硫富瓦烯在电极上产生的氧 化电流来实现乳酸含量的检测。化电流来实现乳酸含量的检测。 酶生物传感器46

21、(3)(3)胆固醇电极胆固醇电极 胆固醇电极是一种用于临床测定胆固醇电极是一种用于临床测定 血清胆固醇含量的电流型酶传感器。血清胆固醇含量的电流型酶传感器。血血 液中胆固醇约有液中胆固醇约有2 23 3以酯型存在，以酯型存在，1 13 3 以游离型存在。以游离型存在。 酶生物传感器47 自然界中的胆固醇主要存在于动物性食自然界中的胆固醇主要存在于动物性食 物之中，植物中没有胆固醇。物之中，植物中没有胆固醇。 兽肉的胆固醇含量高于禽肉，肥肉高于瘦兽肉的胆固醇含量高于禽肉，肥肉高于瘦 肉，贝壳类和软体类高于一般鱼类，蛋黄、肉，贝壳类和软体类高于一般鱼类，蛋黄、 鱼子、动物内脏的胆固醇含量非常高。鱼

22、子、动物内脏的胆固醇含量非常高。 酶生物传感器48 降低胆固醇的食物：降低胆固醇的食物： 含膳食纤维丰富的食物含膳食纤维丰富的食物 VC VC 与与 VEVE 饮酒可能使血中的高密度脂蛋白升高，饮酒可能使血中的高密度脂蛋白升高， 加强防治高胆固醇血症的作用。葡萄酒较合适，加强防治高胆固醇血症的作用。葡萄酒较合适， 但必须严格限制摄入量。但必须严格限制摄入量。 酶生物传感器4949 胆固醇电极是一种用于临床测定胆固醇电极是一种用于临床测定 血清胆固醇含量的电流型酶传感器。血清胆固醇含量的电流型酶传感器。 2 H ORCOOH 胆固醇脂酶 胆固醇游离胆固醇 222 OH O 胆固醇氧化酶 游离胆固

23、醇胆甾烯酮 结合型酶电极结合型酶电极 酶生物传感器50 根据反应过程中消耗的氧，产生的过根据反应过程中消耗的氧，产生的过 氧化氢，用相应的电极组成胆固醇传感器氧化氢，用相应的电极组成胆固醇传感器 测定电流的变化量，在一定条件下，电流测定电流的变化量，在一定条件下，电流 变化量与胆固醇浓度呈线性相关。变化量与胆固醇浓度呈线性相关。 酶生物传感器51 (4(4）肌酸和肌酸酐电极）肌酸和肌酸酐电极 脱水脱水 肌酸肌酸 肌酸酐肌酸酐 酶生物传感器52 血清肌酸肝含量测定是衡量肾功能的一血清肌酸肝含量测定是衡量肾功能的一 个很好的基准。个很好的基准。 血清肌酸酐浓度不会因食物的种类而受血清肌酸酐浓度不会

24、因食物的种类而受 影响，所以做为判断肾脏机能的依据较血清影响，所以做为判断肾脏机能的依据较血清 尿素可靠。尿素可靠。 血清肌酸酐浓度与肌肉的量有关，因此血清肌酸酐浓度与肌肉的量有关，因此 肌肉多的排放的尿肌酸酐浓度会比肌肉少的肌肉多的排放的尿肌酸酐浓度会比肌肉少的 多。多。 酶生物传感器53 2 2 2222 + H O H O H OOHCHOH O 肌酸酐水解酶 脒基肌酸水解酶 肌氨酸氧化酶 肌酸酐肌酸 肌酸肌氨酸 脲 肌氨酸甘氨酸 酶生物传感器5454 肌酸和肌酸酐微传感器肌酸和肌酸酐微传感器 酶生物传感器5555 （5）磷）磷酸盐电极酸盐电极 佝偻病佝偻病 软骨病软骨病 酶生物传感器5

25、656 葡萄糖葡萄糖-6-磷酸盐磷酸盐 葡萄糖葡萄糖 + 磷酸磷酸 酸性磷酸酯酶酸性磷酸酯酶 葡萄糖葡萄糖 + O2 葡萄糖酸葡萄糖酸 + H2O2 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 酶生物传感器5757 （6 6）淀粉电极）淀粉电极 淀粉淀粉葡萄糖葡萄糖 淀粉酶淀粉酶 葡萄糖葡萄糖 + O2 葡萄糖酸葡萄糖酸 + H2O2 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 酶生物传感器5858 （7 7）乙醇电极）乙醇电极 CH3CH2OH 可用乙醇来制造醋可用乙醇来制造醋 酸、饮料、香精、染酸、饮料、香精、染 料、燃料等。料、燃料等。 医疗上也常用体积医疗上也常用体积 分数为分数为70-75%的乙醇的乙醇 作消毒剂等。作

26、消毒剂等。 酶生物传感器59 酒后驾驶酒后驾驶 饮酒驾车饮酒驾车：指驾驶员血液中的酒精含量：指驾驶员血液中的酒精含量大于或大于或 等于等于20 mg/100 mL小于小于80 mg/100 mL的驾驶行的驾驶行 为。为。 350 mL(约相称于约相称于1小瓶小瓶)啤酒或半两白酒啤酒或半两白酒(20 mL) 酶生物传感器60 醉酒驾车：醉酒驾车：指驾驶员血液中的酒精含量大于或指驾驶员血液中的酒精含量大于或 等于等于80 mg/100 mL的驾驶行为。的驾驶行为。 1400 mL(约相称于约相称于3瓶瓶500 mL)啤酒或一两半啤酒或一两半 白酒白酒(80mL) 酶生物传感器61 C2H5OH +

27、 NAD+CH3CHO + NADH 醇脱氢酶醇脱氢酶 NADH + Fe(CN)64-NAD+ + Fe(CN)63- + H+ + e- 酶生物传感器62 （二）电位型酶电极（二）电位型酶电极 电位型酶电极是将酶促反应所引起的物电位型酶电极是将酶促反应所引起的物 质量的变化转变成电位信号输出，电位信号质量的变化转变成电位信号输出，电位信号 大小与底物浓度的对数值呈线性关系。大小与底物浓度的对数值呈线性关系。 酶生物传感器63 电位型酶电极所用的基础电极是对电位型酶电极所用的基础电极是对 某种离子有选择性某种离子有选择性或对或对气体有选择性气体有选择性的电极的电极 离子选择离子选择 性电极性

28、电极 气敏电极气敏电极 酶生物传感器64 酶生物传感器65 1773年，伊莱尔年，伊莱尔罗埃罗埃 尔（尔（Hilaire Rouelle）发现）发现 尿素。尿素。 1828年，德国化学家年，德国化学家 弗里德里希弗里德里希维勒首次使用维勒首次使用 无机物质氰酸氨（由氯化无机物质氰酸氨（由氯化 铵和氯酸银反应制得）与铵和氯酸银反应制得）与 硫酸铵人工合成了尿素。硫酸铵人工合成了尿素。 弗里德里希弗里德里希维勒维勒 （Friedrich Wohler） 尿素电极尿素电极 酶生物传感器66 尿素的分子模型尿素的分子模型 增高：增高：急性或慢性肾小急性或慢性肾小 球肾炎、肾功能衰竭、球肾炎、肾功能衰竭

29、、 尿路阻塞、尿路肿瘤、尿路阻塞、尿路肿瘤、 高蛋白质饮食等。高蛋白质饮食等。 减低减低：妊娠后期、蛋白：妊娠后期、蛋白 质摄入不足、营养不良质摄入不足、营养不良 等。等。 酶生物传感器6767 尿素在脲酶作用下发生水解反应尿素在脲酶作用下发生水解反应 可用氨气敏电极、二氧化碳电极等作为基可用氨气敏电极、二氧化碳电极等作为基 础电极测定尿素的含量。础电极测定尿素的含量。 22232 (NH ) CO+H O2NH +CO 脲酶 酶生物传感器68 （2）草酸电极草酸电极 草酸（乙二酸）结构式草酸（乙二酸）结构式 维生素维生素C C代谢代谢 甘氨酸代谢甘氨酸代谢 草酰乙酸水解草酰乙酸水解 异柠檬酸

30、降解异柠檬酸降解 食物摄入：菠菜、茶叶食物摄入：菠菜、茶叶 生物体内草酸的来源：生物体内草酸的来源： 酶生物传感器69 草酸草酸 草酸脱羧酶草酸脱羧酶 2CO2 + 甲酸甲酸 酶生物传感器70 （3 3）腺苷电极）腺苷电极 参与心肌能量代谢参与心肌能量代谢 扩张血流量扩张血流量 合成合成ATPATP、腺苷酸的重、腺苷酸的重 要中间体要中间体 酶生物传感器71 腺苷腺苷 腺嘌呤脱氨基酶腺嘌呤脱氨基酶 肌苷肌苷 + NH3 酶生物传感器72 （4 4）苯丙氨酸电极）苯丙氨酸电极 哺乳动物的哺乳动物的 必需氨基酸必需氨基酸 是甜味剂阿是甜味剂阿 斯巴甜的主要原斯巴甜的主要原 料料 酶生物传感器73

31、苯丙氨酸苯丙氨酸 苯丙氨酸苯丙氨酸 胺裂解酶胺裂解酶 反式肉桂酸盐反式肉桂酸盐+ NH3 酶生物传感器74 4.2 酶场效应晶体管传感器酶场效应晶体管传感器(ENFET) ENFET将酶膜复合在将酶膜复合在ISFET的栅极。的栅极。 测量时，酶的催化作用使待测分子反应测量时，酶的催化作用使待测分子反应 生成生成ISFET能够响应的离子。能够响应的离子。 酶生物传感器75 ISFET工作原理工作原理 酶生物传感器76 76 敏感膜与溶液界面产生膜电位，该电位叠加敏感膜与溶液界面产生膜电位，该电位叠加 在栅压上，引起场效应管漏电流的变化。根据能在栅压上，引起场效应管漏电流的变化。根据能 斯特方程，

32、膜电位的大小与溶液中的离子活度有斯特方程，膜电位的大小与溶液中的离子活度有 关，即关，即: 酶生物传感器77 （一）葡萄糖（一）葡萄糖-FET 葡萄糖葡萄糖-FET是由对是由对H+ 敏感的敏感的ISFET和固和固 定在其栅极上的葡萄糖氧化酶膜构成的定在其栅极上的葡萄糖氧化酶膜构成的。 612622612722 22C H OH OOC H OH O 葡萄糖氧化酶 酶生物传感器78 酶催化底物反应时，生成葡萄糖酸根、酶催化底物反应时，生成葡萄糖酸根、 H+ 和过氧化氢，导致酶膜附近和过氧化氢，导致酶膜附近pH值变化，值变化， 且且pH的变化量与葡萄糖含量有关。的变化量与葡萄糖含量有关。 溶液中溶

33、液中H+的浓度变化，离子敏感膜与溶的浓度变化，离子敏感膜与溶 液界面的膜电位发生变化，该电位叠加在栅液界面的膜电位发生变化，该电位叠加在栅 源电压上，栅源电压的改变与溶液中源电压上，栅源电压的改变与溶液中pH值的值的 变化量成线性关系。变化量成线性关系。 葡萄糖葡萄糖-FET工作原理：工作原理： 酶生物传感器79 为提高葡萄糖为提高葡萄糖-FET-FET的工作性能和测量精度，可的工作性能和测量精度，可 采用两个采用两个pHpH敏感的场效应管构成差动式结构。敏感的场效应管构成差动式结构。 双栅极酶双栅极酶-FET-FET传感器传感器 酶生物传感器80 一个一个FETFET的栅极固定葡萄糖氧化酶膜

34、，作为的栅极固定葡萄糖氧化酶膜，作为 工作工作FETFET；另一个；另一个FETFET的栅极上没有酶膜，作为的栅极上没有酶膜，作为 参比参比FETFET。将。将2 2个个FETFET接到差动放大器上，干扰因接到差动放大器上，干扰因 素被消除，使输出电压只对葡萄糖响应，因此素被消除，使输出电压只对葡萄糖响应，因此 输出电压的变化能够反应葡萄糖含量的变化。输出电压的变化能够反应葡萄糖含量的变化。 酶生物传感器81 （二）尿素（二）尿素-FET 尿素尿素-FET是由是由H+-ISFET和脲酶膜和脲酶膜 组成，其原理是利用组成，其原理是利用pH-FET检测脲酶检测脲酶 水解尿素时溶液水解尿素时溶液pH

35、发生的变化发生的变化。 酶生物传感器82 2 2223 ()2CO NHH OCONH 脲酶 2 H O 2 H O 3 HCOH 4 22NHOH 酶生物传感器83 尿素传感器也可采用差动结构，尿素传感器也可采用差动结构，使用两使用两 个个FET，一个是固定有尿素酶的，一个是固定有尿素酶的FET ，另一，另一 个则是没有固定尿素酶的个则是没有固定尿素酶的FET，作为参比，作为参比 FET，利用运算放大器组成反馈电路。，利用运算放大器组成反馈电路。 Ag/AgCl电极可使溶液的电位保持一定电极可使溶液的电位保持一定。 酶生物传感器84 酶生物传感器85 测定时由于脲酶催化尿素反应时导致测定时由

36、于脲酶催化尿素反应时导致 溶液中的溶液中的pHpH发生变化，从而导致溶液发生变化，从而导致溶液- -界界 面上的界面电位改变，经差动放大器后，面上的界面电位改变，经差动放大器后， 输出电压与待测溶液的尿素浓度有关。输出电压与待测溶液的尿素浓度有关。 酶生物传感器86 其他应用：其他应用： 青霉素青霉素-FET-FET L- L-谷氨酸谷氨酸-FET-FET传感器传感器 酶生物传感器87 4.3 4.3 酶热敏电阻传感器酶热敏电阻传感器 酶热敏电阻传感器是由固定化酶和热酶热敏电阻传感器是由固定化酶和热 敏电阻组合而成。敏电阻组合而成。 用酶热敏电阻测定待测物的含量是依用酶热敏电阻测定待测物的含量

37、是依 据酶促反应产生热量的多少来进行的。通据酶促反应产生热量的多少来进行的。通 过温度变化推测待测物的含量。过温度变化推测待测物的含量。 酶生物传感器88 酶热敏电阻的基本构成酶热敏电阻的基本构成 密接型 柱式反应器型 酶生物传感器89酶热敏电阻的测温方式酶热敏电阻的测温方式 酶生物传感器90酶热敏电阻的测量系统酶热敏电阻的测量系统 酶生物传感器91 酶载体的特点：酶载体的特点： 机械强度高，耐压性好；机械强度高，耐压性好； 固定化效率高；固定化效率高； 化学及生物学稳定性高。化学及生物学稳定性高。 目前，载体除多孔玻璃以外，还有多糖类凝目前，载体除多孔玻璃以外，还有多糖类凝 胶或尼龙制的毛细

38、管等。胶或尼龙制的毛细管等。 酶生物传感器92 优点：优点： 容量小、响应快、稳定性好、使用方便、容量小、响应快、稳定性好、使用方便、 价格便宜。价格便宜。 酶生物传感器9393 4.4 光纤光学型酶传感器光纤光学型酶传感器 高锟高锟 生于生于1933年，年，2009 年获得诺贝尔物理年获得诺贝尔物理 学奖学奖 “光纤之父光纤之父” 酶生物传感器9494 光纤传感器组成：光纤传感器组成： 光纤光纤 生物敏感膜（探头）生物敏感膜（探头） 光电换能器光电换能器 酶生物传感器95 (c)单束光纤，生物敏感膜与光纤为一体 生物敏感膜生物敏感膜 (a)双束光纤 (b) 单束光纤， 生物敏感膜在端部 光纤

39、生物传感器信号转换器的三种结构光纤生物传感器信号转换器的三种结构 酶生物传感器96 光纤光学生物传感系统光纤光学生物传感系统 酶生物传感器97 1.1.光纤生物传感器的特点光纤生物传感器的特点 n 抗干扰能力强，不受电磁场的干扰；抗干扰能力强，不受电磁场的干扰； n 不用参比电极，可以微型化；不用参比电极，可以微型化； n 实现远距离的遥测；实现远距离的遥测； n 响应速度快，灵敏度高。响应速度快，灵敏度高。 酶生物传感器98 2. 光纤酶传感器的工作原理光纤酶传感器的工作原理 待测物质从样品溶液中扩散到生物敏感待测物质从样品溶液中扩散到生物敏感 膜时，在固定化酶的催化下生成一种待检测膜时，在

40、固定化酶的催化下生成一种待检测 的物质；的物质； 当底物扩散速度与催化产物生成速度达当底物扩散速度与催化产物生成速度达 成平衡时，即可得到一个稳定的光信号，依成平衡时，即可得到一个稳定的光信号，依 据光信号的大小与底物浓度的函数关系，得据光信号的大小与底物浓度的函数关系，得 到底物的浓度，一般情况下光信号大小与底到底物的浓度，一般情况下光信号大小与底 物浓度成正比。物浓度成正比。 酶生物传感器99 3. 光纤酶传感器的分类光纤酶传感器的分类 按照换能器能量转换方式的不同，分为按照换能器能量转换方式的不同，分为 化学发光型、光吸收型、荧光猝灭型、指示化学发光型、光吸收型、荧光猝灭型、指示 剂型和

41、生物发光型。剂型和生物发光型。 酶生物传感器100 （1 1）化学发光型）化学发光型 某些化学反应伴随光子的释放，释放的某些化学反应伴随光子的释放，释放的 光子即化学发光的强度与待测物的浓度呈线光子即化学发光的强度与待测物的浓度呈线 性关系。性关系。 但有些生化反应不能释放光学信号，需但有些生化反应不能释放光学信号，需 要引入中间物，使其转变成能进行光检测的要引入中间物，使其转变成能进行光检测的 信号。信号。 酶生物传感器101 鲁米诺鲁米诺（luminol）（）（3-氨基氨基-邻苯甲酰邻苯甲酰 肼），又称发光氨、光敏灵。在碱性条件下肼），又称发光氨、光敏灵。在碱性条件下 能被许多氧化剂（例如

42、能被许多氧化剂（例如H2O2，ClO-等）氧等）氧 化而发出蓝色的光，是研究最早、最多、应化而发出蓝色的光，是研究最早、最多、应 用最广泛的发光试剂。用最广泛的发光试剂。 酶生物传感器102 谷氨酰胺谷氨酰胺 谷氨酸谷氨酸+NH3 谷氨酸谷氨酸+O2+H2O 酮戊二酸酮戊二酸+H2O2+ NH3 鲁米诺鲁米诺+ H2O2 氨基邻苯二甲酸氨基邻苯二甲酸+N2+h 谷氨酰胺酶谷氨酰胺酶 谷氨酸氧化酶谷氨酸氧化酶 酶生物传感器103 鲁米诺鲁米诺+ H2O2 氨基邻苯二甲酸氨基邻苯二甲酸+N2+h 2 H ORCOOH 胆固醇脂酶 胆固醇游离胆固醇 222 OH O 胆固醇氧化酶 游离胆固醇胆甾烯酮 酶生物传感器104 GOD氧化氧化葡萄糖，生成的过氧化氢启动鲁米诺葡萄糖，生成的过氧化氢启动鲁米诺 电化学发光，并通过光纤传感器检测发光信号。酶促电化学发光，并通过光纤传感器检测发光信号。酶促 反应和发光反应同时发生，因此传感器响应非常快。反应和发光反应同时发生，因此传感器响应非常快。 612622612722 22C H OH OOC H OH O 葡萄糖氧化酶 鲁米诺鲁米诺+ H2O2 氨基邻苯二甲酸氨基邻苯二甲酸+N2+h 酶生物传感器105 （2 2）光吸收型）光吸收型 如果被测物如果被测