高效液相色谱仪组成及检测器种类（经典实用）

1、高效液相色谱仪组成及检测器种类 第三节第三节 高效液相色谱仪高效液相色谱仪 高效液相色谱仪由高效液相色谱仪由 高压输液系统、进高压输液系统、进 样系统、分离系统、检测系统、记录系统样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成等五大部分组成。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 高效液相色谱仪组成及检测器种类 HPLC仪器结构示意图仪器结构示意图 贮液器 输液泵 梯度装置 进样装置分离柱 控温装置 检测器 高效液相色谱仪组成及检测器种类 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经 过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出 口流出。当注入欲

2、分离的样品时，流经进口流出。当注入欲分离的样品时，流经进 样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱 柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器， 记录仪将检测器送出的信号记录下来，由记录仪将检测器送出的信号记录下来，由 此得到液相色谱图。此得到液相色谱图。 工作过程：工作过程： 高效液相色谱仪组成及检测器种类 一、高压输液系统一、高压输液系统 高压输液系统由高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、溶剂贮存器、高压泵、 梯度洗脱装置和压力表梯度洗脱装置和压力表 等组成。等组成。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 1.1.溶剂贮存器溶剂贮存

3、器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟 塑料制成，容量为塑料制成，容量为1到到2 L，用来贮存足够，用来贮存足够 数量、符合要求的流动相。数量、符合要求的流动相。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 2.2.高压输液泵高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件 之一，其功能是之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高将溶剂贮存器中的流动相以高 压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱 柱中完成分离过程。柱中完成分离过程。 对泵的要求：输出压力高、流量范围大、流 量恒定、无脉动，流量精

4、度和重复性为0.5% 左右。此外，还应耐腐蚀，密封性好。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 高压输液泵，按其性质可分为高压输液泵，按其性质可分为恒压泵和恒压泵和 恒流泵恒流泵两大类。两大类。 恒流泵是能给出恒定流量的泵，其流 量与流动相粘度和柱渗透无关。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 高效液相色谱仪组成及检测器种类 恒压泵恒压泵是保持输出压力恒定，而流量随外是保持输出压力恒定，而流量随外 界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生 变化，恒压泵就能提供恒定的流量。变化，恒压泵就能提供恒定的流量。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 3. 3. 梯度洗脱装置梯度洗脱装置

5、 梯度洗脱梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两就是在分离过程中使两种或两 种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改 变它们之间的比例，从而使流动相的强度、变它们之间的比例，从而使流动相的强度、 极性、极性、pHpH值或离子强度相应地变化，达到值或离子强度相应地变化，达到 提高分离效果，缩短分析时间的目的。提高分离效果，缩短分析时间的目的。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 仅用弱溶剂 仅用强溶剂 梯度洗提 高效液相色谱仪组成及检测器种类 梯度洗脱装置分类梯度洗脱装置分类 一类是一类是外梯度装置外梯度装置（又称低压梯度），（又称低压梯度）， 流动相在常温常压下混合，用

6、高压泵压至柱流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱 系统，仅需一台泵即可。系统，仅需一台泵即可。 一类是一类是内梯度装置内梯度装置（又称高压梯度），（又称高压梯度）， 将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设 置的程序，注入梯度混合室混置的程序，注入梯度混合室混合，再输至柱合，再输至柱 系统。系统。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 二、进样系统二、进样系统 进样系统包括进样口、注射器和进样阀进样系统包括进样口、注射器和进样阀 等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱 柱上进行分离。柱上进行分离。 高效液相色谱仪组成及检测器

7、种类 通常使用耐高压的六通阀进样装置,其结构如图所示： 高效液相色谱仪组成及检测器种类 三、分离系统三、分离系统 色谱柱是液相色谱的色谱柱是液相色谱的心脏部件心脏部件，它包，它包 括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、 不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的 其他金属。其他金属。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 柱管材料：柱管材料：耐腐蚀耐压耐腐蚀耐压 内径：内径：2.0、3.0、4.1、4.6mm 长度：长度：5、10、15、25cm等等 固定相：固定相：颗粒细、圆、均一、刚性强颗粒细、圆、均一、刚性强 高效液相色谱仪组

8、成及检测器种类 高效液相色谱仪组成及检测器种类 一般在分离前备有一个前置柱，前置一般在分离前备有一个前置柱，前置 柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使 淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相 饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中 固定相，保证分离技的性能不受影响固定相，保证分离技的性能不受影响。 柱子装填得好坏对柱效影响很大。柱子装填得好坏对柱效影响很大。 对于细粒度的填料（对于细粒度的填料（20m）一般采用）一般采用 匀浆填充法装柱匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然，先将填料调成匀浆，

9、然 后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗 脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。 柱温一般为室温或接近室温。柱温一般为室温或接近室温。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 四、检测系统四、检测系统 检测器是液相色谱仪的关键部件之一。检测器是液相色谱仪的关键部件之一。 对检测器的要求是：对检测器的要求是：灵敏度高，重复性好、灵敏度高，重复性好、 线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的 变化不敏感等变化不敏感等。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 在液相色谱中，有两种类型的检测器：在液相色谱中，有

10、两种类型的检测器： 一类是一类是溶质性检测器溶质性检测器，它仅对被分，它仅对被分 离组分的物理或物理化学特性有响应。属离组分的物理或物理化学特性有响应。属 于此类检测器的有紫外、荧光、电化学检于此类检测器的有紫外、荧光、电化学检 测器等；测器等； 一类是一类是总体检测器总体检测器，它对试样和洗，它对试样和洗 脱液总的物理和化学性质响应。属于此类脱液总的物理和化学性质响应。属于此类 检测器有示差折光检测器等。检测器有示差折光检测器等。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 紫外光度检测器紫外光度检测器 高效液相色谱仪组成及检测器种类 作用原理作用原理 依据被分析试样组分对待定波长紫外依据被分析试样组分

11、对待定波长紫外 光的选择吸收性，组分浓度与吸光率的关光的选择吸收性，组分浓度与吸光率的关 系遵守比尔定律。系遵守比尔定律。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 工作过程工作过程 透镜将光源射来的光束变成平行光，透镜将光源射来的光束变成平行光， 经过遮光板变成一对细小的平行光束，分经过遮光板变成一对细小的平行光束，分 别通过测量池与参比池，然后用紫外滤片别通过测量池与参比池，然后用紫外滤片 滤掉非单色光，通过双紫外光敏电阻，根滤掉非单色光，通过双紫外光敏电阻，根 据输出信号差进行检测。据输出信号差进行检测。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 特点特点 灵敏度高，检测浓度可达到灵敏度高，检测浓度可达到1

12、0-9g/ml； 结构简单，对温度和流速不敏感；结构简单，对温度和流速不敏感； 溶剂的选用受限制。溶剂的选用受限制。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 荧光检测器荧光检测器 物质受紫外光激发后，能辐射出比紫外物质受紫外光激发后，能辐射出比紫外 光波长较长的荧光，可用荧光检测器检测，光波长较长的荧光，可用荧光检测器检测， 而某些不发射荧光的物质也可通过化学衍生而某些不发射荧光的物质也可通过化学衍生 转变成能发射荧光德物质而得到检测。转变成能发射荧光德物质而得到检测。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 优点：是一种选择性强、灵敏度高，比紫优点：是一种选择性强、灵敏度高，比紫 外检测器高外检测器高2 3

13、个数量级，可达个数量级，可达pg量级或量级或 更低，可用于梯度淋洗。更低，可用于梯度淋洗。 缺点：样品适用范围有限，定量分析的线缺点：样品适用范围有限，定量分析的线 性范围较窄性范围较窄(104-105)。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 示差折光检测器示差折光检测器 借连续测定流通池中溶液折射率德方法来测定借连续测定流通池中溶液折射率德方法来测定 试样浓度的检测器。分为偏转式和反射式两种类型。试样浓度的检测器。分为偏转式和反射式两种类型。 是一种通用型检测器，灵敏度可达是一种通用型检测器，灵敏度可达10-7 g cm-3。 缺点是对温度变化敏感，不能用于梯度淋洗。缺点是对温度变化敏感，不能用于梯度淋洗。 高效液相色谱仪组成及检测器种类 电导检测器电导检测器 是离子色谱法应用