槐花米中芦丁和懈皮素的制备

1、槐花米中芸香苷和懈皮素的提取姓名：邱斌 学号：10151802241. 实验原理1.1 背景介绍芸香苷是一种广泛存在于植物体内的黄酮类的化合物，在自然界的花、叶、果实等有广泛的存在，在槐米、罗布麻等植物中的含量比较高。槲皮素可以用来作为中药制剂，能够有效的降低毛细血管的通透性，抗病毒、清除氧自由基等功能。具有防止动脉硬化和增强人体毛细血管的重要功能，在临床上常常被用来作为治疗心血管疾病的辅助药物。同时由于它是一种植物提取物，它对于人体没有毒性，因此在食品工业中还被用来作为抗氧化剂和天然黄色素。1。槐花米中芸香苷的含量较高，达12一20，可作为大量提取芸香苷的原料。2 懈皮素作为一种黄酮类的物质

2、，在草本植物和食物中有广泛的分布。同时槲皮素作为一种比较强的植物性抗氧化剂，能够防止动脉硬化等功能，在治疗冠心病等心脑血管疾病中具有重要的作用。同时还能够清除自由基，保护心肌、降血压、降血脂以及抗菌消炎等作用，对于肿瘤细胞等均有良好的抑制效果。2懈皮素可以直接从芸香苷中提取出来。 1.2 提取方法介绍 在槲皮素和芸香苷的提取中已经出现了多种提取方法，而且其方法也越来越先进，对槲皮素的普及具有重要的作用。(热)碱提取酸沉淀法4、热水提冷析出的方法4、超声辐射法5-6、微波辅助提取法拉7-8等。这次实验我们使用醇提取法。醇提取法利用芸香苷在已醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大.以及在热水中溶解度大.

3、在冷水中溶解度小的性质分高。芸香苷用溶剂加熟溶解后，趁熟抽滤，滤液放冷后能析出而达到分高的目的(如不纯可再重夏操作进行分高)。也可采用醇溶水纯法进行精制。1.3芸香苷和懈皮素的理化性质芸香苷为浅黄色针状结晶(水)熔点: 176。c-178。c, a23d+13.87。(乙醇)，a23d-39.43。(吡啶)。1g芦丁溶于7ml甲醇，8000ml水，200ml沸水。在空气中逐渐变深，把芦j加热至185-192。c时，变成棕色胶状体，约在215c时分解;芦丁在冷水中极微溶(1:10000)，在沸水中微溶(1:200)，在沸乙醇中略溶(1:60) 在碱性溶液中易溶，芦丁

4、可溶于甲醇及乙丙醇，在氯仿、乙醚和苯中不溶。懈皮素为黄色粉末（甲醇），其二水合物为黄色针状结晶。在95-97成为无水物，熔点为313-314（分解）。溶于热乙醇（1：23）、冷乙醇（1：300），可溶于甲醇、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，几乎不溶于水。其碱水溶液呈黄色，乙醇溶液味很酷。紫外灯下显现蓝色荧光，加入alcl3乙醇溶液荧光变为黄绿色，盐酸-镁粉反应显红色。槲皮素属黄酮醇类化合物。黄酮类化合物多以苷类形式存在，由于所连接的糖的类型和位置不同，形成多种黄酮苷。组成黄酮苷的糖类多为单糖。黄酮醇水溶性较差，而其苷类则较易溶于水。2. 实验准备2.1 实验试剂 30

5、g槐花米、95%乙醇、75%乙醇、50%乙醇、30-60 oc石油醚、丙酮、2%浓硫酸、饱和石灰水、15% hcl。2.2 实验装置、仪器磁力加热搅拌器、加热装置、100ml锥形瓶、250ml三颈烧瓶、500ml三颈烧瓶、50ml烧瓶、250ml烧瓶、100ml量筒、天平、研体、滤纸、移液管、减压过滤装置、布氏漏斗、抽滤瓶、砂芯漏斗等2.3 装置简图3. 实验详细步骤3.1 芸香苷的制备称重干燥洗涤抽滤石油醚、丙酮、95%乙醇各15ml黄色沉淀放置12h合并浓缩至40ml第二次提取液加热回流1h100ml75%乙醇滤渣第一次提取液加热回流1h100ml75%乙醇30g槐花米 芸香苷粗品：4.0

6、2g3.2 芸香苷精品的制备250ml水黄色晶体放置1h趁热过滤芸香苷粗品抽滤、干燥、称重加热溶解芸香苷精品：1.19g3.3 懈皮素的制备1.0g芸香苷精品称重干燥抽滤放置1-2h趁热过滤加热溶解150ml50%乙醇懈皮素粗品懈皮素粗品洗涤2次抽滤加热回流1h2%浓硫酸150ml懈皮素精品0.19g4. 实验结果分析4.1 现象芸香苷精品呈黄色，懈皮素精品呈绿色。槐花米液体为咖啡色悬浊液，有甘苦的气味，沸腾时不断有小泡冒出。在制备芸香苷时，随着蒸馏时间变长，产物的颜色加深，经过加热过滤，趁热溶解得到黄色晶体。得到芸香苷粗品4.02g，芸香苷精品1.19g，懈皮素精品0.19g。4.2收率及熔

7、点芸香苷收率为（1.19g/4.02g）*100%=29.60%懈皮素收率为（0.19g/1.19g）*100%=15.96% 芸香苷的熔点为176.8-184.04.3红外谱图芸香苷的红外谱图如下懈皮素的红外谱图如下4.3.1对提取芸香苷精品所得产品的红外光谱进行分析，在波长1645nm-1349nm之间有四个峰，在800nm-680nm之间有吸收峰，符合芳香化合物特征;在3453nm处有尖锐吸收，符合酚类化合物特征;在1645nm有强吸收，说明含有c=0键，1300m-1000nm之间.有5个吸收峰说明含有5个不同的c-0键。整体分析，符合黄酮类化合物结构特点。4.3.2对提取槲皮素精品所

8、得产品的红外光谱进行分析，在波长1624nm-1384nm.之间有四个峰，在800nm-680nm之间有吸收峰，符合芳香化合物特征;在3462nm左右有尖锐吸收，符合酚类化合物特征;在1624nm有强吸收，说明含有c=0键。整体分析符合黄酮类化合物特点。4.3.3芸香苷和槲皮素都是黄酮类的化合物，具有黄酮类化合物的吸收峰。但是两者在化学结.构上存在比较大的不同，芸香苷是在槲皮素c3位上的芸香糖和羟基相连所形成的黄酮苷。由于糖基的出现使红外光谱图中形成了特征峰的峰位、峰形以及不同的强度，由于羟基个数的不同，在红外光谱图中可以看到峰强弱的差异。芸香苷在3453nm处的羟基伸缩振动吸收峰宽比较强，说

9、明了其结构中的羟基数量较多。在1645nm处芸香苷的振动吸收峰和槲皮素相比向低波数移动了21个单位，槲皮素在1509nm处苯环骨架的振动吸收峰强度比芸香苷分子要大。通过以上差别可以辨别出芸香苷和槲皮素。5.实验总结及思考5.1注意事项5.1.1 在提取前应将槐花米粉碎，使芦丁易于被热水溶出。粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢5.1.2 加入饱和石灰水既可以使芸香苷溶于碱溶液中，达到提取芸香苷的目的，又可以除去槐花米中的大量多糖黏液质。5.1.3 浓盐酸具有刺激性。应在通风处使用;无水乙醇为易燃品，应注意防火安全。5.1.4 芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定;暴露在空气中能缓缓氧化变为暗

10、褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼砂因能与芸香苷邻二酚羟基结合，起保护邻二酚羟基不被氧化破坏的作用，实验证明，提取时加入硼砂，产品质量要好些。5.1.5 为避免在提取过程中黄酮苷类化合物发生分解，故用沸水事先破坏其酶的活性，故从槐米中提取芦丁时开始不能加冷水慢慢煮沸，而要直接加沸水提取。5.2产率高低的原因ph值过低会使芸香昔与酸形成锑盐而增加水溶性，降低收率。放置时间如延长至10h以上，可增加收率。不能长时间煮沸，芸香苷会分解，降低收率。从槐米中提取芦丁时开始不能加冷水慢慢煮沸，而要直接加沸水提取。否则芸香苷会分解，收率降低5.3思考题5.3.1 试比较醇提取法与碱提取法的异同点。说明这

11、两种提取法是依据芸香苷的什么性质?答：醇提取法利用芸香苷溶于热乙醇的性质，碱提取法利用芸香苷分子中的酚羟基的酸性用碱液煮沸提取槐花米，将溶于碱液的芸香苷酸析。5.3.2 本实验在制备槲皮素时，是用什么方法促使糖苷键断裂的?还可用其他什么方法?本实验采用稀硫酸水解芸香苷的方法使糖苷键断裂得到槲皮素。由于芸香苷中存在a糖苷键,即水解后可形成酚羟基,因此也可采用碱水解的方法,可以利用氢氧化钠水解芸香苷再还原得到槲皮素。5.3.3 如何证明芦丁分子中只含有葡萄糖和鼠李糖?答:运用纸层析法与葡萄糖鼠李糖的标准品比较，根据层析根据结果判断5.3.4 根据芦丁t的性质,还可采用何种方法进行提取?试设计自槐花

12、米中提取芦丁的另一种方法，并说明方法原理。答:芦丁还可采用水提法进行提取，利用了芦丁可溶于热水，不溶于冷水的性质。5.3.5 芸香苷的水解产物是什么?答:芸香苷的水解产物是槲皮素和芦丁糖5.3.6 如何鉴定芸香苷？取芦丁适量，加乙醇使溶解，分成三份供下述试验用:盐酸镁粉试验:取样品液适量，加2滴浓hcl、再酌加少许镁粉，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色。a-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量，加等体积的10%a-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色。6.参考文献及教材1 甄真.槐米中芸香苷及槲皮素的提取分离与检识j.现代养b,2014,(7):242-242.2 宗

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