干细胞储存的相关知识

1、干细胞储存什么是干细胞2干细胞的来源2干细胞的基本特性3为什么提倡脐带干细胞和脐带血干细胞同时保存？4概述脐带和胎盘的应用5自体储存脐带间充质干细胞的重要性？7为什么提倡脐带干细胞和脐带血干细胞同时保存？8人胎盘间充质干细胞的分离9储存间充质干细胞需要做哪些检测？10如何储存脐带间充质干细的？10胎盘干细胞储存11什么是干细胞干细胞(stem cells, SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somatic stem

2、 cell)。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞(totipotent stem cell,TSC)、多能干细胞(pluripotent stem cell)和单能干细胞(unipotent stem cell)。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。干细胞即为起源细胞。简单来讲，它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。干细胞的来源干细

3、胞的来源较为丰富，来自胚胎的干细胞统称为胚胎干细胞，来自成年个体组织(新生儿在内)的干细胞统称成体干细胞。常见的有四种来源：胚胎(主要用于基础研究);胎盘及其附属物;骨髓;成体组织(包含外周血)。目前用于临床干细胞来源主要有三种：自体外周血、自体骨髓、胎盘及其附属物。对比骨髓、外周血来源的干细胞，胎盘中的干细胞含量相当丰富，增殖和分化能力更强。胎盘作为胎儿分娩后的废弃物，采集简便易行，不会引起母亲和新生儿任何不适的感觉或产生任何不良的影响。干细胞的基本特性胚胎干细胞的分化性   胚胎干细胞具有万能分化性(pluripotency)功能，特点是可以细胞分化(Cell

4、ular differentiation)成多种组织的能力，但无法独自发育成一个个体。它可以差转成为外胚层、中胚层及内胚层三种胚层的成员，然后再差转成为人体的220多种细胞种类。万能分化性是胚胎干细胞与在成年人体内可找到的多功能干细胞的主要分别：多功能干细胞只能差转成为某几种特定的细胞种类。在无外界提供差转的刺激之下(即可在实验环境下生长)，胚胎干细胞在经过多重细胞分裂之后，仍然能保有万能分化性。成人干细胞能否保有万能分化性，直到现在仍然有争议。不过，有研究已示范了万能干细胞可以从成纤维细胞集丛产生出来。   成体干细胞的可塑性   

5、越来越多的证据表明，当成体干细胞被移植入受体中，它们表现出很强的可塑性。通常情况下，供体的干细胞在受体中分化为与其组织来源一致的细胞。而在某些情况下干细胞的分化并不遵循这种规律。1999年Goodell等人分离出小鼠的肌肉干细胞，体外培养5天后，与少量的骨髓间质细胞一起移植入接受致死量辐射的小鼠中，结果发现肌肉干细胞会分化为各种血细胞系。这种现象被称为干细胞的横向分化（trans-differentiation）。关于横向分化的调控机制还不清楚。大多数观点认为干细胞的分化与微环境密切相关。可能的机制是，干细胞进入新的微环境后，对分化信号的反应受到周围正在进行分化的细胞的影响，从而对新的微环境中

6、的调节信号做出反应。为什么提倡脐带干细胞和脐带血干细胞同时保存？脐带血造血干细胞和脐带间充质干细胞功能和用途有所不同，前者能分化成各种血细胞， 主要用于治疗血液和免疫系统疾病，而后者本身不造血，但可提供良好的造血细胞生长的微 环境。最近科学研究证明，采用脐带回充质干细胞和脐带血造血干细胞共同移植的方法，能 明显改善和加快造血系统和免疫系统的重建，显著提高血液病治疗效果。间充质干细胞可抑制造血干细胞移植后的免疫排斥( 造血干细胞移植中对生命最大的威胁之一)，提高移植成活率及病人主存质量。目前间充质干细胞在临床上已经被成功的用来防治造血干细胞移植后的免疫排斥反应。概述脐带和胎盘的应用脐带和胎盘的应

7、用历史可追溯到十六世纪，我国著名古医书本草纲目中就有用新生儿脐带、胎盘入药的记载，中国古人素来有保存和应用婴儿脐带和胎盘的传统。生命科学的最新成果表明：脐带组织中含有丰富的间充质干细胞！这种细胞在脐带组织中含量大、质量优、纯净度高，咦成功地用于多种疾病的治疗。1995 年，美国Lazarus 等使用间充质干细胞治疗造血系统恶性疾病 1999 年，美国Horwitz 等用间充质干细胞治疗小儿成骨不全和1型胶原缺乏 2002 年，美国0·N·Koc 等用间充质干细胞治疗粘多糖病 2003 年，意大利Mazzini等用间充质干细胞治疗肌营养不良性侧索硬化症 2003 年，法国Fo

8、uillard 等用间充质干细胞治疗再生障碍性贫血 2005 年，美国Lee 等用间充质干细胞治疗股骨头坏死 2005 年，韩国Oh Young Bang 等用间充质干细胞治疗脑中风 2005 年，俄罗斯州M·F·Rasulov 等用间充质干细胞治疗皮肤烧伤 2005 年，美国Lazarus等用间充质干细胞与造血干细胞共移植治疗血液病取得较好疗效 2006 年，中韩Dianiifang 等将间充质干细胞用于外科整形 2007 年，美国Mohamadneiad 等用间充质千细胞治疗肝硬化 2007 年，美国Neuhuber 等用间充质干细胞治疗脊髓损伤 2007 年，日本Oh

9、nishi s，OhgushiH 等用间充质干细胞治疗心力衰竭 2007 年，瑞典Ringden·O 等用间充质干细胞治疗出血性膀胱炎、腹膜炎 2007 年，西班牙Gregorio Maranon医院用间充质干细抱成功治疗心绞痛和冠状动脉损伤 2007年，美国Osiris公司报道，间充质干细胞作为挽救性药物治疗儿科晚期GVHD，疗效显著 2007 年，美国食品与药品监督管理局( FDA ) 批准间充质干细胞用于GVHD、溃疡性肠炎的一线治疗间充质干细胞具有向多种类型细胞分化的能力，可以分化为神经、心脏、肝脏、骨、软骨、肌键、脂肪、上皮等 多种细胞。这种多向分化的能力给人类多种疾病的治

10、疗提供了重要的原材料。 作为种子细胞它可应用于修复/ 替代受伤或病变的多种组织器官，可治疗心血管疾病(冠心病、心衰等)，神经系统疾病(脊髓损伤、老年痴呆、帕金森氏症、脑瘫等)，骨组织病(骨质疏松、软骨损伤、肌腱损伤等)，自身免疫性疾病 (系统性红斑狼疮、硬皮病等)，肝硬化、角膜损伤， 烧烫伤，缺血性血管病和肿瘤等多种疾病，从而为目前一些无法有效治愈的重大疾病提供了崭新的治疗方案。随着干细胞科学和医疗技术的发展，间充质干细胞的应用范围将会进一步扩大，届时人的生存质量和寿命也会大幅度提高。自体储存脐带间充质干细胞的重要性？间充质干细胞是继胚胎千细胞、造血干细胞之后的又一科研热点，己成为二十一世纪治

11、疗多系统疾病的“实用型干细胞”。近年来逐步应用于心血管疾病、肝硬化、骨和肌 肉退行性疾病、脑及脊髓神经损伤、老年痴呆、系统性红斑狼疮和硬皮病等疾病的治疗，并可应用于医学美容及人体保健，具有广泛的应用前景。既往间充质千细胞多取自成人骨髓，存在数量少、来源受限、采集过程痛苦等弊端；而一根脐带提取的间充质千细胞的数量相当于成人5000毫升骨髓中的间充质干细胞数量，且质量优、活性高、更纯净，可多次使用，是理想的间充质千细胞来源。 科学研究提示亲缘关系越近于细胞治疗效果越好，储存脐带间充质干细胞不但为新生儿提供了健康的保障，家庭成员亦可应用，同时新生儿可获得一份保额为30余万元的健康医疗保险；如与脐带血

12、干细胞同时保存，新生儿父母还可超值兼得一份价值13 万元的家庭康乐综合险，可谓资源、资金双保险。 为什么提倡脐带干细胞和脐带血干细胞同时保存？脐带血造血干细胞和脐带间充质干细胞功能和用途有所不同，前者能分化成各种血细胞， 主要用于治疗血液和免疫系统疾病，而后者本身不造血，但可提供良好的造血细胞生长的微 环境。最近科学研究证明，采用脐带回充质干细胞和脐带血造血干细胞共同移植的方法，能 明显改善和加快造血系统和免疫系统的重建，显著提高血液病治疗效果。间充质干细胞可抑制造血干细胞移植后的免疫排斥( 造血干细胞移植中对生命最大的威胁之一)，提高移植成活率及病人主存质量。目前间充质干细胞在临床上已经被成

13、功的用来防治造血干细胞移植后的免疫排斥反应。人胎盘间充质干细胞的分离：从4冰箱中取出无菌袋装的胎盘，用75%的酒精擦拭袋子表面，放在超净工作台内的托盘中，取出胎盘，用剪子剪掉脐带。胎盘的处理：1.剥离羊膜。2.剪取羊膜下的组织，靠近脐带周围，约5厚，有韧性，颜色均匀的组织(注意避开血管)。3.把剪下来的组织放入加有0.5ml高浓度抗生素的PBS液中，浸泡10min，倒掉浸泡液。4.用PBS液反复清洗组织，去除血迹，同时剪去组织的血管，筋索等结缔组织，清洗至漂洗液无色为止，倒掉漂洗液，用移液枪吸去多余的液体。5.用剪刀仔细将组织反复剪碎，直至成13左右或更小的的组织块。6.将组织块分装到2个50

14、ml的离心管中，每个离心管中加入5-7.5ml，编号，加PBS液至50ml，上下颠倒混匀，静置，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。用PBS液反复漂洗至上清无色。7.最后一次清洗用HBSS液，便于酶的消化作用。8.用移液枪向每个离心管中加入3ml的胶原酶，消化细胞间的胶原蛋白。9.用移液枪向每个离心管中加入70微升的DNA酶。10.用HBSS定容至30ml，上下颠倒混匀，加上管口塞子，封口。11.37水浴1h,每隔10min摇动离心管，使组织块与酶充分接触。12. 用75%酒精擦拭离心管，拿入超净台内，去封口，加HBSS定容至50ml.13. 依次过100目的细胞筛，200目的细胞筛。14. 用移液器吸取组织液分装到4个离心管中，放入离心机中，1000r/min，离心4min,弃上清。15. 向一个离心管中加入适量的培养液，混匀，转入细胞培养瓶中，编号，37，5%CO2培养箱中培养。16. 向剩下的3个离心管中加入冻存液，混匀后，共6ml,加入6个冻存管中，每个管中1ml.17. 用逐渐降温的方法将细胞冻存起来。储存间充质干细胞需要做哪些检测？ 脐带间充质干细胞样本：梅毒螺旋体、艾滋病病毒(