《血红蛋白的提取和分离》课件学习课程

1、第一页，编辑于星期日：六点 九分。 血红蛋白含有四条肽链血红蛋白含有四条肽链, ,每条肽链环绕一个每条肽链环绕一个亚铁血亚铁血红素基团，红素基团，此基团可携带此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红蛋白因含有血红素血红素而呈而呈红色。红色。第二页，编辑于星期日：六点 九分。一、基础知识一、基础知识: :学生活动学生活动1:1:1 1 、分离生物大分子的基本思路是什么？、分离生物大分子的基本思路是什么？2 2 、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？3 3 、本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋白哪方面的、本课题我们将利用

2、血红蛋白与杂质蛋白哪方面的差异进行提纯？差异进行提纯？4 4 、为什么不用鸡的血红细胞而用人的血红细胞作为、为什么不用鸡的血红细胞而用人的血红细胞作为实验材料？实验材料？5 5 、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质 ？第三页，编辑于星期日：六点 九分。一、基础知识一、基础知识-蛋白质提取和分离原理蛋白质提取和分离原理 蛋白质提取与分离的依据蛋白质的物理化学性蛋白质提取与分离的依据蛋白质的物理化学性质：质： 形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别。亲和力等千差万别。 提取提取分离分离

3、方法方法凝胶色谱法凝胶色谱法 凝胶电泳法凝胶电泳法 第四页，编辑于星期日：六点 九分。（1 1）原理：）原理：（2 2）材料）材料大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。多孔性的多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。多孔性的多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 ( (一一) )凝胶色谱法凝胶色谱法第五页，编辑于星期日：六点 九分。（3 3）分离过程）分离过程 混合物混合物上上 柱柱洗洗脱脱大分子流动快大分子流动快小分子流动慢小分子流动慢收收 集集大分子大分子收收

4、 集集小分子小分子 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。质分子的差速流动。 第六页，编辑于星期日：六点 九分。( (一一) )凝胶色谱法凝胶色谱法第七页，编辑于星期日：六点 九分。 1 1、什么是凝胶？、什么是凝胶？ 2 2、什么是凝胶色谱法？、什么是凝胶色谱法？学生活动学生活动2:2:3 3、凝胶色谱法的原理是什么？、凝胶色谱法的原理是什么？4 4、请用自己的话总结出凝胶色谱法分离相对分子质量、请用自己的话总结出凝胶色谱法分离相对分子质量不同蛋白质的具体过程。不同蛋白质的具体过程。第八页，编辑于星期日：六点 九分。第九页，编辑

5、于星期日：六点 九分。1 1 、什么是缓冲液？、什么是缓冲液？2 2、 缓冲液的作用是什么？缓冲液的作用是什么？学生活动学生活动3:3:3 3、 缓冲液是如何配制的？你所学过的人体缓冲液是如何配制的？你所学过的人体血液的缓冲物质有哪些？血液的缓冲物质有哪些？4 4、 本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？（二）、缓冲溶液（二）、缓冲溶液第十页，编辑于星期日：六点 九分。由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。如如H H2 2COCO3 3/NaHCO/NaHCO3 3，醋酸，醋酸/ /醋酸钠，醋酸钠，NaHNaH2 2POPO4 4

6、/Na/Na2 2HPOHPO4 4等等缓冲溶液洗脱剂缓冲溶液洗脱剂组成：组成：配制：配制：作用：作用：调节缓冲剂的比例，可配制不同调节缓冲剂的比例，可配制不同pHpH的缓冲液。的缓冲液。抵制外界酸碱对溶液抵制外界酸碱对溶液pHpH的干扰而保持的干扰而保持 pHpH稳定。稳定。（二）、缓冲溶液（二）、缓冲溶液第十一页，编辑于星期日：六点 九分。1 1 、什么是电泳？、什么是电泳？2 2、 影响电泳迁移速度的因素有哪些？影响电泳迁移速度的因素有哪些？学生活动学生活动4:4:4 4、电泳分离各种分子的原理是什么？、电泳分离各种分子的原理是什么？（三）、电泳（三）、电泳3 3、 如何消除电荷对电泳迁

7、移速度的影响？如何消除电荷对电泳迁移速度的影响？5 5 、请描述电泳的过程？、请描述电泳的过程？第十二页，编辑于星期日：六点 九分。2 2凝胶电泳法：凝胶电泳法：（1 1）原理：）原理： 不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 影响蛋白质分子运动速度的因素影响蛋白质分子运动速度的因素( (三三) )电泳电泳1.1.电泳的概念电泳的概念指带电粒子在电场的作用下发生迁移的

8、过程指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程. .第十三页，编辑于星期日：六点 九分。影响蛋白质分子运动速度的因素影响蛋白质分子运动速度的因素 决定决定运动方向运动方向形成形成库仑力库仑力形成形成阻力阻力决定决定运动速率运动速率电荷性质电荷性质电荷量电荷量分子形状分子形状分子大小分子大小第十四页，编辑于星期日：六点 九分。 在一定在一定pHpH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的入带负电荷多的SDSSDS，形成，形成“蛋白质蛋白质SDSSDS复合物复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。 （2 2）分离方法：）分

9、离方法：（3 3）分离过程：）分离过程： 琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。( (三三) )电泳电泳第十五页，编辑于星期日：六点 九分。电泳检测结果电泳检测结果第十六页，编辑于星期日：六点 九分。二、实验操作二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋白质的提取和分离一般分为四步：（1 1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；离）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；离心分离等操作收集到的血红蛋白溶液。心分离等操作收集到的血红蛋白溶液。（2 2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。）粗分离：透析除去分子较小的杂质。（3 3）纯化：通过凝胶色谱法将分子

10、量较大的杂质蛋）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。白质除去。（4 4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。第十七页，编辑于星期日：六点 九分。（一）样品处理（一）样品处理1 1、红细胞的洗涤：、红细胞的洗涤： 目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。生理盐水洗涤。2 2、血红蛋白的释放：、血红蛋白的释放： 在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放3 3、分离

11、血红蛋白溶液：、分离血红蛋白溶液： 离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。斗分出红色透明液体。4 4、透析：、透析：装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PHPH为为7.07.0）透析。）透析。第十八页，编辑于星期日：六点 九分。样品处理样品处理粗粗 分分 离离纯纯 化化纯度鉴定纯度鉴定 血液组成血液组成成分成分 1.洗洗 涤涤 红红 细细 胞胞 2.释放释放血红蛋白血红蛋白 3.分离分离血红蛋白血红蛋白 4.透析透析血红蛋白血红蛋白二、实验操作二、实验操作跳转跳转第十九页，编辑于星期日：六点 九分。血液组

12、成成分血液组成成分阅读思考：阅读思考：1.1. 血液由血液由_和和_两部分组成。两部分组成。2.2. 血细胞中血细胞中_细胞数量最多，红细胞的含细胞数量最多，红细胞的含量最高的有机化合物是量最高的有机化合物是_。3.3. 该化合物是由该化合物是由 _和和_构成构成的，其中每个亚基中都含有一个能与的，其中每个亚基中都含有一个能与O2O2和和CO2CO2结合结合的的_基团。基团。血浆血浆血细胞血细胞红细胞红细胞血红蛋白血红蛋白2 2条条-肽链肽链2 2条条-肽链肽链 亚铁血红素亚铁血红素返回返回第二十页，编辑于星期日：六点 九分。1.1.洗洗 涤涤 红红 细细 胞胞阅读思考：洗涤的目的是什么？阅读

13、思考：洗涤的目的是什么？洗涤过程：洗涤过程：血液血液100mL100mL3g3g柠檬酸钠柠檬酸钠低速离心低速离心2 min2 min红细胞红细胞血血 浆浆吸出血浆吸出血浆红细胞红细胞5倍体积生理盐水倍体积生理盐水搅拌搅拌10min重复洗涤重复洗涤3 3次，直至上清液没有黄色次，直至上清液没有黄色第二十一页，编辑于星期日：六点 九分。采集得到鸡血采集得到鸡血第二十二页，编辑于星期日：六点 九分。初次离心后的结果初次离心后的结果第二十三页，编辑于星期日：六点 九分。3 3次洗涤后的结果次洗涤后的结果返回返回第二十四页，编辑于星期日：六点 九分。2.2.释放血红蛋白释放血红蛋白阅读思考：阅读思考：1

14、.1. 释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质？些物质？2.2. 为了加速释放过程，采取了什么措施？为了加速释放过程，采取了什么措施？目的分析：目的分析：蒸馏水的作用是蒸馏水的作用是_。加入甲苯的作用是加入甲苯的作用是_。充分搅拌的目的是充分搅拌的目的是_。使红细胞大量吸水胀裂使红细胞大量吸水胀裂溶解红细胞的细胞膜溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂加速红细胞的破裂第二十五页，编辑于星期日：六点 九分。(2)(2)血红蛋白的释放：血红蛋白的释放： 加蒸馏水到原血液体积，再加加蒸馏水到原血液体积，再加4040体积的甲苯，体积的甲苯，置于磁力搅

15、拌器上充分搅拌置于磁力搅拌器上充分搅拌1010分钟（加速细胞破裂）分钟（加速细胞破裂）, ,细胞破裂释放出血红蛋白。细胞破裂释放出血红蛋白。第二十六页，编辑于星期日：六点 九分。磁力搅拌器磁力搅拌器返回返回第二十七页，编辑于星期日：六点 九分。3.3.分离血红蛋白分离血红蛋白分离过程分离过程红细胞红细胞混合液混合液高速离心高速离心10min 离心管离心管滤纸滤纸过滤过滤脂类物质脂类物质烧杯烧杯第二十八页，编辑于星期日：六点 九分。(3)(3)分离血红蛋白溶液：分离血红蛋白溶液： 过程：过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min2000r/min的速

16、度离心的速度离心10 min10 min。 试管中溶液层次：试管中溶液层次：第第1 1层（最上层）：甲苯层层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第（无色透明）；第2 2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第（白色薄层固体）；第3 3层（中下层）：血红蛋白的水层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；第溶液层（红色透明液体）；第4 4层（最下层）：杂质层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。沉淀层（暗红色）。 分离：分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。漏斗中静置片刻后，分

17、出下层的红色透明液体。第二十九页，编辑于星期日：六点 九分。甲苯层甲苯层（无色透明无色透明）白色薄层固体白色薄层固体红色透明液体红色透明液体杂质沉淀层杂质沉淀层（暗红色暗红色）试管中溶液层次试管中溶液层次返回返回第三十页，编辑于星期日：六点 九分。4.4.透析血红蛋白透析血红蛋白20mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液1mL1mL第三十一页，编辑于星期日：六点 九分。利用透析袋透析利用透析袋透析第三十二页，编辑于星期日：六点 九分。透析过程透析过程返回返回第三十三页，编辑于星期日：六点 九分。纯化凝胶色谱操作纯化凝胶色谱操作1.1.凝胶色谱柱的凝胶色谱柱的制作制作：2.2.凝胶色谱柱的凝胶色谱柱的

18、装填装填：教材图教材图5 519193.3.样品的样品的加入和洗脱加入和洗脱返回返回第三十四页，编辑于星期日：六点 九分。（二）凝胶色谱操作（二）凝胶色谱操作（1 1）凝胶色谱柱的制作：）凝胶色谱柱的制作： 取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的玻璃管，厘米的玻璃管，两端需用砂两端需用砂纸磨平。纸磨平。底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔挖出凹穴挖出凹穴安装移液管头部安装移液管头部覆盖尼龙网，再用覆盖尼龙网，再用100100目尼龙纱包好，插到玻璃管的目尼龙纱包好，插到玻璃管的一一端端。注意事项：注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，

19、否则难以铺实尼龙网，还超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。顶塞的制作：顶塞的制作：打孔打孔安装玻璃管安装玻璃管。组装：组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体将上述三者按相应位置组装成一个整体。安装其他附属结构。安装其他附属结构。第三十五页，编辑于星期日：六点 九分。第三十六页，编辑于星期日：六点 九分。装配好的凝胶柱装配好的凝胶柱第三十七页，编辑于星期日：六点 九分。返回返回第三十八页，编辑于星期日：六点 九分。材料：交联葡聚糖凝胶材料：交联葡聚糖凝胶G-75G-75；20mmol/L20mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓

20、冲液装填装填: :2.2.凝胶色谱柱的装填：凝胶色谱柱的装填：步骤步骤操作要求操作要求立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡12h12h洗涤平衡洗涤平衡一次性缓慢倒入；轻轻敲打一次性缓慢倒入；轻轻敲打装填悬浮液装填悬浮液凝胶颗粒洗脱液凝胶颗粒洗脱液沸水浴沸水浴 凝胶颗粒蒸馏水凝胶颗粒蒸馏水充分溶胀充分溶胀根据色谱柱体积计算凝胶用量根据色谱柱体积计算凝胶用量色谱柱垂直固定在支架上色谱柱垂直固定在支架上配制悬浮液配制悬浮液计算称量凝胶计算称量凝胶固定色谱柱固定色谱柱第三十九页，编辑于星期日：六点 九分。（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填 凝胶的选择：凝胶的选择：A A、材料：、

21、材料：交联葡聚糖凝胶（交联葡聚糖凝胶（G-75G-75）。）。B B、代表意义、代表意义：“G”G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围范围。7575表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.57.5克。克。 凝胶的前处理：凝胶的前处理：配制凝胶悬浮液：配制凝胶悬浮液：计算并称取一计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。凝胶悬浮液。 凝胶色谱柱的装填方法：凝胶色谱柱的装填方法：A A、固定：、固定：将色谱柱装置固将色谱柱装置固定在支架上。定在

22、支架上。B B、装填：、装填：将凝胶悬浮液一次性的装填入色将凝胶悬浮液一次性的装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。注意：注意：1 1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。 2 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。第四十页，编辑于星期日：六点 九分。 洗涤平衡：洗涤平衡：装填完毕后，装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在立即用缓冲液洗脱瓶，在50cm

23、50cm高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的的磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（pHpH为为7.07.0）充分洗涤平衡充分洗涤平衡1212小时小时。 注意：注意：1 1、洗脱液面不要、洗脱液面不要低于凝胶表面，否则可能有低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物的流动与最终生物大分子物质的分离效果。质的分离效果。2 2、不能发生、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象象。返回返回第四十一页，编辑于星期日：六点 九分。3.3.样品加入与洗脱样品加入与洗脱 调节缓冲液面：调

24、节缓冲液面：打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。与凝胶面平齐，关闭出口。 滴加透析样品：滴加透析样品：吸管吸吸管吸1ml1ml样品加到色谱柱的顶端，滴加样品样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。 样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。 洗脱：洗脱：小心加入小心加入pH=7.0 pH

25、=7.0 的的20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液到适当高的磷酸缓冲液到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。 收集：收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每出液，每5ml5ml收集一试管，连续收集收集一试管，连续收集。（在分离过程中，如果红色。（在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功） 注意：注意：正确的加样操作：正确的加样操作：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴、贴壁加样。壁

26、加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。第四十二页，编辑于星期日：六点 九分。3.3.样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱第四十三页，编辑于星期日：六点 九分。3.3.样品加入与洗脱样品加入与洗脱注意：注意：正确的加样操作是：正确的加样操作是：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。、贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。第四十四页，编辑于星期日：六点 九分。收集得到的纯化后的血红蛋白收集得到的纯化后的血红蛋白第四十五页，编辑于星期日：六点 九分。注意事项注意事项1. 1. 红细胞的洗涤：红细胞的洗涤：

27、洗涤次数不能过少；低速、短时离心。洗涤次数不能过少；低速、短时离心。2. 2. 凝胶的预处理：凝胶的预处理： 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡3. 3. 色谱柱的装填：色谱柱的装填： 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。不能断流。4. 4. 色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。为什么？为什么？返回返回第四十六页，编辑于星期日：六点 九分。观察你处理的血液样品离心后观察你处理的血液样品离心后是否分层是否分层（见教科书（见教科书图图5-185-18），），如

28、果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。三、实验结果分析与评价三、实验结果分析与评价1 1、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？后的样品发生了哪些变化吗？第四十七页，编辑于星期日：六点 九分。 2 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡

29、产生？你的色谱柱、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？装填得成功吗？你是如何判断的？ 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖20002000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能

30、良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。泡，消除不了时要重新装柱。 第四十八页，编辑于星期日：六点 九分。 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。关。 3 3、你能观察到蛋

31、白质的分离过程中，红色区带、你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？断分离效果？第四十九页，编辑于星期日：六点 九分。知识总结知识总结血血红红蛋蛋白白的的提提取取和和分分离离蛋白质分子的差异性蛋白质分子的差异性凝胶色谱法凝胶色谱法原原 理理分离过程分离过程凝胶电泳法凝胶电泳法缓冲溶液缓冲溶液组组 成成作作 用用蛋白质的蛋白质的提取分离提取分离样品处理样品处理粗粗 分分 离离纯纯 化化纯度鉴定纯度鉴定第五十页，编辑于星期日：六点 九分。教学反馈教学反馈 1 1凝胶色谱法是根据（凝胶色谱法是根据（ ）

32、分离蛋白质的有效方法。）分离蛋白质的有效方法。 A A分子的大小分子的大小 B B相对分子质量的大小相对分子质量的大小 C C带电荷的多少带电荷的多少 D D溶解度溶解度2 2缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（来维持（ ）基本不变。）基本不变。 A A温度温度 B pH B pH C C渗透压渗透压 D D氧气浓度氧气浓度BB第五十一页，编辑于星期日：六点 九分。3 3电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（电荷（ ）的电极移动。）的电极移动。 A A相同相同 B B相反相反 C C

33、相对相对 D D相向相向4. 4. 哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（ ）与）与氧气的运输有关。氧气的运输有关。 A A血红蛋白血红蛋白 B B肌红蛋白肌红蛋白 C C肌动蛋白肌动蛋白 D D肌球蛋白肌球蛋白BA第五十二页，编辑于星期日：六点 九分。5 5血液由血浆和各种血细胞组成，其中（血液由血浆和各种血细胞组成，其中（ ）的含）的含量最多。量最多。 A A白细胞白细胞 B B血小板血小板 C C红细胞红细胞 D D淋巴细胞淋巴细胞6 6为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（凝血剂（ ）。）。 A. NaCl B.A. NaCl B.甲苯甲苯 C. C.蒸馏水蒸馏水 D.D.柠檬酸钠柠檬酸钠CD第五十三页，编辑于星期日：六点 九分。7 7将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为看到试管中的溶液分为4 4层，其中第层，其中第3 3层是（层是（ ） A