鹅细小病毒的研究进展

1、鹅细小病毒的研究进展朱沿秋，兽医1班，学号：S20146324（动物医学院，四川农业大学）摘要：小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种急性、亚急性烈性传染病, 是目前危害养鹅业的重要传染病之一。近年来关于鹅细小病毒的研究有了许多新的发展和新的观点, 本文从鹅细小病毒的病原、致病机理、检测方法及防治等方面的研究进行阐述，以期为鹅细小病毒及小鹅瘟的防控提供参考。关键词：小鹅瘟；鹅细小病毒；分子生物学；致病机理小鹅瘟（Gosling Plague，GP）是由鹅细小病毒（goose parvovirus，GPV）所引起的雏鹅的一种急性或亚急性的败血性传染病，是目前危害水禽业健康发展的最严重的传染病之一。195

2、6 年，小鹅瘟病毒首次由中国学者方定一在江苏扬州市发现并分离，是一类无囊膜的DNA 病毒1。1974 年，国际禽病学会( WPSA) 将其命名为Derzsys 氏病2。近年来，1月龄以上鹅群发病的病例有所增加。病鹅、带病鹅群及隐性感染的成鹅是该病的主要传染源。小鹅瘟在我国各地均有流行，病鹅以精神委顿、食欲废绝、严重下痢和渗出性肠炎为主要特征3-4，有时出现神经症状，可经消化道和呼吸道传染，并可经卵垂直传播。该病在许多国家出现报道，给全球养鹅业造成了严重危害5-9。1 病原鹅细小病毒是细小病毒科（Parvoviridate）、细小病毒属（ParvovirusGenus）的成员、无囊膜的单链DNA

3、病毒，病毒粒径约20nm，是目前已知的动物病毒中较小、较简单的病毒之一10，不能凝集禽类、哺乳动物和人类的红细胞。其对外环境的抵抗力较强，56能耐受3小时，pH=3时仍稳定，对一些消毒药有较强抵抗力11。抗原分析表明，国内外所有GPV 分离株属于同一个血清型12。GPV 可在鹅胚、鸭胚及其细胞上适应和培养。GPV 实验室感染雏鹅或雏番鸭后，病毒在体内呈广泛分布，尤其在肝、脾、哈德斯腺、胸腺和法氏囊中病毒含量较高13,14。因此，病鹅的心血、肝脏、脾脏、脑及肠管和肠内容物均可用于病毒分离。病料用生理盐水或PBS 研磨制成15110 悬液，3 000r/min离心10min，每1mL 上清加入青霉

4、素、链霉素各1000IU，37孵育30min，接种1214 日龄鹅胚绒毛尿囊膜（CAM）或尿囊腔，接种后37 天，鹅胚死亡。死亡鹅胚病变表现为：CAM 增厚并有灰白色坏死点，鹅胚全身充血，翅尖、趾、颈部和喙旁有严重的出血点。肝脏充血及边缘出血，心肌、后脑出血，头部、颈部及两肋皮下均有水肿15。2 鹅细小病毒的致病机理目前关于GPV 的致病机理还不是很清楚, 而且研究报道也很少。宿主细胞类别、细胞受体的类型及跨膜侵染机制均未见报道, 近年来其致病机理越来越受到人们的重视, 尤其GPV 在的患病雏鹅体内的定植规律。杨静红16采用PCR 检测人工感染雏鹅后24 h 内在心脏、肝脏、肺脏、肾脏、十二指

5、肠、空肠、脾、法氏囊、胸腺等多个组织, 第3 天在盲肠, 第4 天在粪便和大脑, 第5 天在食道中都检测到了GPV 。而从第6 天开始GPV 在不同组织中逐渐消失, 首先是肝脏, 然后是盲肠和血液, 第21 天时只有空肠中GPV 呈阳性。由此可以看出GPV 具有广泛的嗜组织细胞特性及较强的复制能力;感染GPV 5 d 后病毒侵染机体达到最大值, 并且肠道上皮细胞可能是GPV 最终定植的部位。周春宇等17通过建立间接免疫组织化学法检测了GPV 在雏鹅体内的分布规律:经皮下注射、口服和滴鼻感染8 h 24 d 内能从多种组织器官中检测到GPV 的分布。皮下注射感染后96 h 病毒在机体内各组织的分

6、布最为广泛, 口服、滴鼻组感染后144 h 病毒在机体内各组织的分布最为广泛, 这与GPV 经皮下感染后, 病毒能在雏鹅体内的分布速度较经滴鼻和口服感染组的分布速度要快的报道一致(黄诚等, 2004)。但未能从食道中检出病毒抗原, 由此可以看出间接免疫组织化学方法不如PCR检测方法灵敏。毕建敏等 18用建立的荧光定量PCR (FQ-PCR)检测鹅细小病毒的方法, 检测3日龄雏鹅人工感染GPV SD2005 株后各器官不同时间段的病毒含量,表明在攻毒8 h 后才能从消化系统及肝脏、心脏和血液中检测到病毒DNA ;病毒DNA 含量在48 h 后达到最高峰, 并一直持续到168 h , 各待检脏器中

7、病毒DN A 含量开始降低, 但720 h 后仍能从粪便、肝脏和脾脏中检测到少量的病毒DNA , 为阐明GPV的致病机理及防控提供了重要的试验数据和理论依据。3 鹅细小病毒病的检测方法和防治措施3.1 检测方法在生产中，正确诊断是有效防控该病的关键所在。过去常常以病毒的分离鉴定和剖检的病理变化进行确诊，需要较长时间，操作也较复杂。另外，检测小鹅瘟免疫抗体时，常用鹅胚中和实验或雏鹅保护试验，也需较长时间，而且费用较高19。鉴于此，国内外学者们对小鹅瘟的诊断技术进行了深入的研究，并取得可喜的成果，其诊断方法有琼脂扩散试验20、免疫荧光诊断方法21、免疫酶斑点法22、用抗GPV单抗IgG建立的反向间

8、接血凝试验23、对流免疫电泳法24、核酸探针技术、单克隆抗体的制备及荧光检测26、基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法25等，其中琼脂扩散试验因其方法简便方便、易操作等优点，更多的适宜于基层推广和应用。双向扩散（Double Diffusion）是将可溶性抗原和抗体分别加到琼脂板相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原和抗体相对应，从而形成抗原抗体复合物，由于此复合物分子量增大并产生聚集，不再继续扩散则在两者比例适当处形成白色沉淀线。3.2 防治措施3.2.1 疫苗防治小鹅瘟应以预防为主。用活疫苗免疫种鹅来进行预防。一般在种鹅产蛋前1 个月左右用鸭胚化弱毒苗1mL 接种母鹅，疫区

9、最好接种2 次。免疫后的种鹅所产蛋孵出的雏鹅能抵抗鹅细小病毒感染，最好在120 d 后再次免疫。也可以对雏鹅进行免疫接种，对无母源抗体保护的雏鹅可在12 日龄用鹅细小病毒活苗皮下注射，免疫后7 d 须隔离饲养，防止感染。母源抗体较高的雏鹅、雏鸭不要用活苗免疫。鹅细小病毒病主要通过孵化场传播，因此孵化场要做好各环节的消毒工作。发生本病后孵化场应立即停止孵化。如果发生该病，应立即隔离未出现症状的雏鹅，每只雏鹅皮下注射高效价抗血清0.51mL 或12 mL 卵黄抗体，同时可适量加入广谱抗菌素。3.2.2 疫苗研究进展目前获得注册并取得生产文号的小鹅瘟疫苗主要有3 种：小鹅瘟活疫苗（SYG26-35

10、株，种鹅用）、小鹅瘟活疫苗（SYG41-50 株，雏鹅用）和小鹅瘟活疫苗（GD 株，种鹅用）。此外，目前还开发了新型的疫苗如：亚单位疫苗、基因工程疫苗等。亚单位疫苗典型的有，Ju 等（2011）利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中分别表达GPV 结构蛋白VP1、VP2 和VP3，它们能够自组装成病毒样颗粒（VLPs），VLPs 无感染性，但具有良好免疫原性，可作为重组亚单位疫苗27。GPV VLPs 加入50%矿物油佐剂免疫4日龄雏鹅能产生高滴度的中和抗体，抗体滴度高于灭活疫苗和活疫苗27。Lee 等（2010）利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中分别表达GPV 结构蛋白VP2，0.3%二乙烯亚胺（B

11、EI）灭活，以氢氧化铝或CpGODNs 为佐剂，免疫9 日龄鸭，首次免疫后14 天进行二次免疫，产生良好抗体应答28。对于基因工程疫苗，朱德康等（2011）比较小鹅瘟病毒（GPV）VP3 基因疫苗（pcDNA-GPV-VP3）和弱毒疫苗免疫鹅的免疫应答，结果表明，pcDNA-GPVVP3免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌和各肠段中表达并能够诱导鹅体产生良好的细胞免疫和体液免疫，基因疫苗免疫鹅血清抗体从第14 天开始升高，第28 天达最大值，第217 天仍然显著高于对照组，基因疫苗诱导鹅体产生免疫应答的能力与弱毒疫苗相当29。3.2.3 加强饲养管理育雏期间的小鹅要注意保持温度、降湿、通风换气，尽

12、量不要让小鹅下水或不下水。最好是小群饲养，以便于管理和控制疫情。使用可以杀灭病毒的消毒药物进行全场消毒，对于鹅可能接触的用具、设备、鹅舍、道路及其它建筑等进行彻底清洗并经常消毒， 对孵化房及一切孵化用具，如竹帘、棉絮、铺草、食槽、水池盆等用后也要彻底消毒；尽可能地杀灭苍蝇、蚊虫。不得从疫区购进种蛋、种苗及种鹅，对入孵的种蛋应严格进行药液冲洗和福尔马林熏蒸消毒，以防止病毒经种蛋传播。孵化场必须定期应用消毒剂进行彻底消毒， 孵坊一旦发现被污染，应立即停止孵化，在进行严密的消毒后方能继续进行孵化。新购进的雏鹅，应隔离饲养20d 以上，在确认无小鹅瘟发生时，才能与其它雏鹅共同饲养。4 展望随着动物病毒

13、研究技术的不断提高, 鹅细小病毒的各项生物学特性逐渐被人们所熟知, 其作为一种病原微生物, 对养鹅业危害将越来越小。在小鹅瘟防治中, 弱毒疫苗、抗血清、卵黄抗体及单克隆抗体的应用对控制GPV 的传播起到了一定作用,但小鹅瘟仍呈零散型、周期性暴发, 对养鹅业的危害依旧很严重。随着GPV 分子生物学、检测技术、致病机理及抗原特性等相关研究的迅速发展, 必将为新型疫苗的研制、传统疫苗的改进及更有效地防控手段提供新技术和新方法。参考文献1 方定一，王永坤，郑玉美,等.小鹅瘟病原体及其特异防治的研究J.中国农业科学，1981.4:1-8.2 Brown K E,Green S W,Young N S.G

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