第四章产芽孢的细菌

1、夏夏 春春 教授教授中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院预防兽医学教研室预防兽医学教研室第一节第一节 芽孢杆菌属（芽孢杆菌属（bacillus）炭疽杆菌炭疽杆菌 b. anthracis 一、形态及染色特性一、形态及染色特性 g+ 大杆菌，在人工培大杆菌，在人工培养基中呈养基中呈竹节状长链竹节状长链。在感染组织的涂片中，在感染组织的涂片中，单个或呈短链。无鞭毛。单个或呈短链。无鞭毛。在人和动物体内或含血在人和动物体内或含血清和碳酸氢钠的培养基清和碳酸氢钠的培养基中中可形成荚膜可形成荚膜。l在氧气充足、温度适宜在氧气充足、温度适宜(25-30)的的外界环境中或人工培养基上外界环境中或人工

2、培养基上易形成易形成芽胞。芽胞。芽胞呈椭圆形，位于菌体中芽胞呈椭圆形，位于菌体中央，小于菌体的宽度。央，小于菌体的宽度。l需氧。营养要求不需氧。营养要求不高，普通琼脂平板高，普通琼脂平板上培养上培养24小时，产小时，产生直径生直径2-3mm的的粗粗糙型菌落，灰白色、糙型菌落，灰白色、干燥、无光泽、不干燥、无光泽、不透明、透明、边缘不整齐，边缘不整齐，呈卷发状。呈卷发状。l血液平板上早期无溶血环，培养血液平板上早期无溶血环，培养2424小时后有小时后有轻微溶血。轻微溶血。l在肉汤中生长后在肉汤中生长后 呈絮状卷绕成团呈絮状卷绕成团 的沉淀生长，表的沉淀生长，表 面稍混，无菌膜，面稍混，无菌膜，

3、中层透明。中层透明。l明胶穿刺培养明胶穿刺培养炭疽芽胞杆菌菌落表面的细胞呈曲线排列（炭疽芽胞杆菌菌落表面的细胞呈曲线排列（）金属镀）金属镀膜，膜，1500炭疽芽孢杆菌的芽胞：芽胞细胞质（smp），芽胞类核（sn），芽胞细胞膜（sm），芽胞细胞壁（sw），芽胞皮层（sct），外芽胞膜（osm），和芽胞壳（sc） 超薄切片，81，000芽胞胞质体（scp），芽胞细胞膜(sm)，芽胞细胞壁（sw）外芽胞壁（osw），外芽胞膜（osm），芽胞母细胞质（smp），芽胞母细胞膜（smm）和芽胞母细胞壁（smw） 超薄切片，63000炭疽芽孢杆菌的芽孢：炭疽芽孢杆菌的芽孢：，发芽中的芽孢，芽胞壳（，发芽中的

4、芽孢，芽胞壳（）已崩）已崩解；解；发芽的芽胞，芽胞壳和胞子囊（发芽的芽胞，芽胞壳和胞子囊（）均已崩解；）均已崩解；，芽孢已释放，仅存芽胞囊碎片（芽孢已释放，仅存芽胞囊碎片（）超薄切片，）超薄切片，28 00028 000l“菌菌 影影”l 荚膜具有较强的抗腐败能力，荚膜具有较强的抗腐败能力，当菌体因当菌体因腐败而消失后，仍有残留荚膜，腐败而消失后，仍有残留荚膜，称为称为“菌菌影影”。二、培养特性二、培养特性l需氧。在含青霉素需氧。在含青霉素0.5iu /ml的的培养基培养基中，细胞壁肽聚糖中，细胞壁肽聚糖合成抑制，形成原合成抑制，形成原生质体串，称为生质体串，称为“串珠反应串珠反应”。若若青霉

5、素加至青霉素加至10iu/ml，则完全则完全不能生长或轻微生不能生长或轻微生长。长。三、抵抗力及常用消毒剂三、抵抗力及常用消毒剂l本菌本菌繁殖体繁殖体的抵抗力不强，常用消毒剂均的抵抗力不强，常用消毒剂均能将其杀死，对青霉素等多种抗生素高度能将其杀死，对青霉素等多种抗生素高度敏感，敏感，l芽孢的抵抗力特别强，干燥保存芽孢的抵抗力特别强，干燥保存40年以上年以上的炭疽芽孢仍有活力。的炭疽芽孢仍有活力。炭疽芽孢对碘特别炭疽芽孢对碘特别敏感，过氧乙酸、环氧乙烷、次氯酸钠等敏感，过氧乙酸、环氧乙烷、次氯酸钠等效果较好，可用于皮毛等消毒。效果较好，可用于皮毛等消毒。l土壤：土壤：黑麦、三叶草等黑麦、三叶草

6、等四、抗原结构四、抗原结构 荚膜多肽抗原荚膜多肽抗原 具有抗吞噬作用，与毒力有关。具有抗吞噬作用，与毒力有关。 菌体多糖抗原菌体多糖抗原 能与特异性抗体发生反应形成能与特异性抗体发生反应形成环状沉淀，称为环状沉淀，称为ascoli 试验。此抗原的特异性试验。此抗原的特异性不高，能与其它芽胞杆菌，甚至不高，能与其它芽胞杆菌，甚至14型肺炎球菌型肺炎球菌多糖抗原发生交叉反应。多糖抗原发生交叉反应。 炭疽毒素炭疽毒素 由由保护性抗原（保护性抗原（pa）、致死因子）、致死因子（lf）和水肿因子（）和水肿因子（ef）三种蛋白质形成的复三种蛋白质形成的复合物。合物。 实验动物实验动物五、致病性五、致病性l

7、本菌可引致各种家畜、野兽和人类的炭疽，本菌可引致各种家畜、野兽和人类的炭疽，牛、牛、绵羊、鹿等易感性最强，绵羊、鹿等易感性最强，马、驼、猪、山羊等马、驼、猪、山羊等次之，犬、猫、食肉兽等则有相当大的抵抗力，次之，犬、猫、食肉兽等则有相当大的抵抗力，禽类一般不感染。禽类一般不感染。l人类对炭疽杆菌的易感性介于食草动物与猪之人类对炭疽杆菌的易感性介于食草动物与猪之间间.1，致病物质：荚膜、炭疽毒素，致病物质：荚膜、炭疽毒素2 2，所致疾病：，所致疾病： 败血症，肠炭疽，肺炭疽，咽喉感染，败血症，肠炭疽，肺炭疽，咽喉感染， 皮肤炭疽。皮肤炭疽。l传播途径：传播途径：l接触接触皮肤炭疽，皮肤炭疽，l食

8、用食用肠炭疽，肠炭疽，l吸入吸入肺炭疽肺炭疽皮肤炭疽六、微生物学检查六、微生物学检查1，标本，标本 炭疽病畜尸体严禁剖检炭疽病畜尸体严禁剖检. 防止芽胞形成。防止芽胞形成。2，直接涂片检查，直接涂片检查 取渗出液、血液直接涂片或取新鲜组织作印取渗出液、血液直接涂片或取新鲜组织作印片，干燥固定后革兰氏染色，若见片，干燥固定后革兰氏染色，若见有荚膜的典有荚膜的典型的竹节状革兰氏阳性大杆菌，型的竹节状革兰氏阳性大杆菌，结合临床症状结合临床症状可以作出初步诊断。可以作出初步诊断。3，涂片，涂片- 特异性荧光抗体染色法特异性荧光抗体染色法4，分离培养与鉴定，分离培养与鉴定 接种于血琼脂平板和碳酸氢钠平板

9、，培养接种于血琼脂平板和碳酸氢钠平板，培养后观察菌落形态，并作青霉素串珠试验、动物后观察菌落形态，并作青霉素串珠试验、动物试验等鉴定。试验等鉴定。5，血清学检查，血清学检查七、防七、防 治治l病畜处理：焚烧病畜处理：焚烧l免疫预防免疫预防l抗炭疽血清抗炭疽血清l治疗以青霉素为首选，四环素、氯霉素等治疗以青霉素为首选，四环素、氯霉素等有效。有效。第二节第二节 梭菌属（梭菌属（clostridium）l大多数为严格厌氧。大多数为严格厌氧。lg+，能形成芽胞，芽胞直径比菌体粗大。，能形成芽胞，芽胞直径比菌体粗大。l除产气荚膜梭菌外，均无荚膜。除产气荚膜梭菌外，均无荚膜。l能产生多种外毒素和侵袭性酶，

10、致病性强。能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。l本节以本节以魏氏梭菌魏氏梭菌为主进行介绍。为主进行介绍。 l 产气荚膜杆菌产气荚膜杆菌 本菌旧名魏氏梭菌。本菌旧名魏氏梭菌。 在自然界分节极广，可见于土壤、污水、在自然界分节极广，可见于土壤、污水、饲料、食物、粪便以及人畜肠道等中，在饲料、食物、粪便以及人畜肠道等中，在一定条件下，也可一定条件下，也可引起多种严重疾病。引起多种严重疾病。 一、生物学特性一、生物学特性l形态与染色形态与染色l菌体直杆状，两端菌体直杆状，两端钝圆，钝圆，0.6-2.4um l.3-19.0um，单在，单在，革兰氏阳性。革兰氏阳性。芽孢芽孢大圆大圆，位于菌体中，位于菌

11、体中央或近端，使菌体央或近端，使菌体膨胀，但在一般条膨胀，但在一般条件下罕见形成芽孢。件下罕见形成芽孢。多数菌株可形成多数菌株可形成荚荚膜。膜。l二、培养特性二、培养特性l生长迅速，代谢活跃，45生长最好l血琼脂平板：双层溶血环双层溶血环 内环完全溶血-毒素 外环不完全溶血- 毒素l蛋黄琼脂平板：nagler反应l牛奶培养基： “汹涌发酵汹涌发酵” （stormy fermentation）三、致病性三、致病性 l致病物质致病物质 （10种外毒素。种外毒素。 a-e型）型）l毒素毒素l以以a型产生量最大型产生量最大l引起血管通透性增加伴大量溶血、组织坏死、肝引起血管通透性增加伴大量溶血、组织坏

12、死、肝脏、心功能受损脏、心功能受损l在气性坏疽的形成中起主要作用在气性坏疽的形成中起主要作用l、毒素毒素l引起坏死损伤和血管通透性增加引起坏死损伤和血管通透性增加l肠毒素肠毒素魏氏梭菌主要和次要毒素及其分型魏氏梭菌主要和次要毒素及其分型l所致疾病所致疾病l气性坏疽气性坏疽l主要由主要由a a型产气荚膜梭菌型产气荚膜梭菌引起引起l致病条件与破伤风梭菌相同致病条件与破伤风梭菌相同l潜伏期短，发展迅速，病情险恶，死亡率高，潜伏期短，发展迅速，病情险恶，死亡率高，以组织坏死，气肿和全身中毒为特征以组织坏死，气肿和全身中毒为特征 组织坏死、血管内皮损伤，通透性上升组织坏死、血管内皮损伤，通透性上升 出血

13、、水肿、局部坏死出血、水肿、局部坏死 分解糖产气，压迫软组织、血管分解糖产气，压迫软组织、血管 加重组织坏死（捻发音）加重组织坏死（捻发音） 分解组织，病变迅速扩散，分解组织，病变迅速扩散， 引起全身中毒症状引起全身中毒症状气性坏疽l食物中毒食物中毒l食入被大量细菌污染的食物（多为肉类）食入被大量细菌污染的食物（多为肉类）l临床表现：腹痛、腹胀、水样腹泻；可自愈临床表现：腹痛、腹胀、水样腹泻；可自愈四、微生物学检查四、微生物学检查l直接涂片镜检直接涂片镜检l深部创口取材涂片深部创口取材涂片l革兰阳性大杆菌革兰阳性大杆菌l白细胞少且不典型白细胞少且不典型l伴有其它杂菌伴有其它杂菌l早期诊断能避免

14、病人最终截肢或死亡早期诊断能避免病人最终截肢或死亡 l五、分离培养及动物实验五、分离培养及动物实验l接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应鉴定鉴定l动物实验动物实验l如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大于于105病菌病菌/克食品或克食品或106病菌病菌/克粪便可确立诊克粪便可确立诊断断 六、防治原则六、防治原则l预防预防l及时处理伤口，破坏和消除厌氧微环境及时处理伤口，破坏和消除厌氧微环境l预防性的使用抗生素预防性的使用抗生素l治疗治疗l局部感染的处理局部感染的处理l抗生素抗生素l抗毒素抗毒素l高压氧舱法高压氧舱法

15、二、破伤风梭菌二、破伤风梭菌l 破伤风破伤风 系破伤风梭菌经创伤感染，在感系破伤风梭菌经创伤感染，在感染部位发育繁殖，产生毒素而引起疾病染部位发育繁殖，产生毒素而引起疾病（毒血症）。（毒血症）。l 此病症状极其特征，通常不需微生物学此病症状极其特征，通常不需微生物学诊断。诊断。 毒素毒素 产生两种毒素。一种为产生两种毒素。一种为破伤风痉挛破伤风痉挛毒素毒素，毒力非常强，为蛋白外毒素，可引，毒力非常强，为蛋白外毒素，可引起起神经兴奋性的异常增高和骨骼肌痉挛神经兴奋性的异常增高和骨骼肌痉挛。另一种为另一种为破伤风溶血素破伤风溶血素，不耐热，对氧敏，不耐热，对氧敏感，与致病性无关。破伤风梭菌毒素具有感，与致病性无关。破伤风梭菌毒素具有良好抗原性，用它制成类毒素。良好抗原性，用它制成类毒素。三、肉毒梭菌三、肉毒梭菌l本菌广泛分布于土壤，动物肠道，饲料以及食本菌广泛分布于土壤，动物肠道，饲料以及食品中。不能在活的机体内生长繁殖。品中。不能在活的机体内生长繁殖。当有适宜当有适宜营养和厌氧环境时，营养和厌氧环境时，即可生长繁殖并即可生长繁殖并产生肉毒产生肉毒毒素毒素。人畜食人含此毒素的食品、饲料或其他。人畜食人含此毒素的食品、饲料或其他物品，即可中毒而发生肉毒中毒症。物品，即可中毒而发生肉毒中毒症。l免疫防治免疫防治 在常发地区，可用明矾沉淀类毒素在常发地区，可用明矾沉淀类毒素预防