中药白花前胡的鉴定

1、白花前胡的鉴定摘要：目前，药品质量监督管理检验工作还存在许多不足，对于药材的标准化鉴定流程及其方法还不够规范，在此，通过对白花前胡的基原鉴定，性状鉴别，显微鉴别，理化鉴别，现代质量研究这五个方面进行系统的阐述，给大家展示全面的中药材鉴定流程。此外，按照此流程，并考虑相应实验条件，进行的实践性操作，包括显色反应，薄层色谱，粉末鉴定以获得更具有说服力结果。关键词：白花前胡的基原鉴定，性状鉴别，显微鉴别，理化鉴别，现代质量研究1 基原鉴定 始载于名义别录 。本草纲目李时珍谓：“前胡有数种，惟以苗高二尺，色似斜蒿，叶如野菊而细瘦，嫩时可食，秋月开黪白花，类蛇床子花，其根皮黑肉白，有香气为真。”据图经本

2、草、证类本草、植物名实图考等本草考证，古代多为白花前胡。 伞形科（Umbellilerae）植物白花前胡Peucedanum praerupterum Dunn.的干燥根。白花前胡为多年生草本，高30120cm。根圆锥形，长3-5厘米，有分枝，棕褐色或黄褐色；茎圆柱状，甚粗壮，浅绿色，有纵线纹，基部有多数棕褐色叶鞘纤维。基生叶和茎下部叶纸质，轮廓为三角阔卵形，有时近圆形，长5-9厘米，二或三回出羽状分裂，一回裂片阔形至卵圆形，二回裂片卵形至椭圆形，最后裂片菱状倒卵形，长3-4厘米，宽约3厘米，基部楔尖，不规则羽状分裂，边缘有圆锯齿；叶柄长6-20厘米，基部有阔鞘；茎上部叶二回羽状分裂，裂片较小

3、。花秋季开放，白色，甚小，排成顶生和侧生的复伞形花序，无总苞片；花瓣5，长1.31.5毫米，顶端渐尖而内折，有明显的中肋。双悬果卵形或椭圆形，长4-5毫米，背棱和中棱线状，侧棱有狭翅。花期810月。果期1011月。主产于浙江、江西、四川等省。2 性状鉴别 根近圆柱形、圆锥形或纺锤形，稍扭曲，下部有分枝，长3-15cm，直径1-2cm。根头部常有茎痕及纤维状叶鞘残基；表面灰棕色至黑褐色，有不规则纵沟及纵皱纹，并有横向皮孔；上部有密集的环纹。质较柔软，干者质硬，可折断，折断面不整齐，疏松，于放大镜下可邮众多细小黄棕色油点散在；皮部厚，淡黄白色，形成层环明显，木部淡黄色。气芳香，味微苦、辛。以条粗壮

4、、质柔软、香气浓者为佳。3 显微鉴别 根横切面：木栓层为1020余层木栓细胞所组成。皮层菲薄，为23层切向延长的细胞。韧皮部占根半径的3/5，靠外面的细胞排列疏松，多裂隙，射线弯曲较大；散生多数油室。直径42102，周围分泌细胞510个。形成层环状。木质部导管多呈放射状断续排列，导管群中有时可见纤维、少数油室等。射线明显，由210列细胞组成。薄壁细胞中含大量淀粉粒。4 化学成分 根含香豆精类化合物：外消旋白花前胡素（praeruptorin)A、B,右旋白花前胡素C、D及E，右旋白花前胡素Ib、，北美芹素（pteryxin)，白花前胡香豆精（peucedanocoumarin)、，前胡香豆精A

5、（qianhucoumarin)，补骨脂素（psoralen)，5-甲氧基补骨脂素（5-methoxy psoralen)，8-甲氧基补骨脂素（8-methoxy pso-ralen)，左旋-白花前胡醇（peucedanol)；香豆精糖甙类化合物：紫花前胡甙（nodakenin)，印度温柠甙（marmesinin)，茵芋甙（skimmin)，芸香呋喃香豆醇葡萄糖甙（rutarin)，异芸香呋喃香豆醇葡萄糖甙（isorutarin)，东莨菪甙（scoploin)，白花前胡甙（praeroside)、及，紫花前胡种甙（decuroside)，芨芨芹甙(apterin)及芹菜糖基茵芋甙（apiosy

6、lskimmin)；其他：D-甘露醇（D-mannitol)，-谷甾醇（sitosterol)，半乳糖醇（galactitol)，胡萝卜甙（daucosterol)及紫花前胡皂甙（Pd-saponin。5 理化鉴别5.1 实验试剂与设备 试剂：甘油水溶液、水合氯醛试液、乙醚、15%氢氧化钠溶液、甲醇、冰醋酸、乙酰氯、氯化锌、石油醚、乙酸乙酯、 设备：10ml量筒、50ml量筒、胶头滴管、滤纸、50ml小烧杯x2、毛细管、薄层板、索氏提取器、水浴锅、紫外光灯、旋转蒸发仪、层析缸、超声波处理器5.2 粉末鉴定 取本品粉末1g，加乙醚10ml浸渍2h，取乙醚浸出液2滴，分别点于两线小滤纸片上，置紫外

7、光灯（365nm）下观察，显淡天蓝色荧光，然后滴加15%氢氧化钠溶液数滴，2min后荧光消失。将一张滤纸片避光保存，另一张滤纸片曝光，约3h后，置紫外光灯下观察，曝光者天蓝色荧光加强，避光者不显荧光。 取本品粉末5g，加甲醇30ml，加热回流10min，滤过，取滤液2ml，蒸干，残渣加冰醋酸1ml使溶解，再加乙酰氯5滴和氧化锌数粒，置水浴中加热1-2min，深液显红色。（检查甾醇）5.3 薄层色谱 方法 取本品粉末0.5g，加三氯甲烷10ml,超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取白花前胡甲素、白花前胡乙素对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合

8、溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（6090oC）-乙酸乙酯（3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点1。 方法 取本品1 g,加乙醚15 ml,浸泡2 h,过滤,滤液挥干,残渣加醋酸乙酯1 ml使之溶解作供试品溶液。另取前胡对照药材0.5 g,加乙醚10 ml,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各1Ll,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-醋酸乙酯(3/2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,供

9、试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的一个亮蓝色及一个紫色斑点2。(见下图)。6 现代质量标准研究6.1 C02超临界流体萃取HA221一50一60型超临界流体萃取装置,购于江苏南通华安超临界萃取有限公司;日本岛津高效液相色谱仪,购自日本Shimadzu公司.取前胡药材,粉碎,过10一20目筛,称取100g,置于1L萃取釜内进行提取。得到的提取物用乙醇作为吸收剂,定容于50ml量瓶中,混匀,静置24h,用高效液相测定白花前胡甲素含量。确定工艺条件后,重复实验3次,以验证实验结果是否稳定。验证实验:按上述确定的工艺条件,即萃取温度60,萃取压力20MPa,萃取时间3h,重复实验3次,

10、每次取100g药材,通过高效液相测其含量3。6.2 高效液相色谱法6.2.1 材料与方法 仪器与试药 LC-6A高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-6AV可见紫外检测器，C-R3A色谱数据处理机，SIL-6A自动进样器。 色谱条件 色谱柱为Shim-pack CLC-ODS柱（6.0mm×150mm，5m）；流动相为乙腈甲醇水氯仿（40：30：30：1）；检测波长为322nm；流速1.0mL/min；柱温25；纸速 0.3cm/min。 对照品溶液的配制 取白花前胡丙素对照品9.12mg，精密称定，置200mL量瓶中，甲醇溶解至刻度，摇匀，对照品溶液为0.0456mg/mL。 样品制

11、备 将白花前胡药材干燥并粉碎，过80目筛。取药材粉末0.5g，精密称定，置 100mL量瓶中，加甲醇约90mL，在超声波发生器内提取30min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。进样前经0.45m微孔滤膜过滤。6.2.2 结果 样品色谱图分析 通过比较试验，发现采用Shim-pack CLC-ODS柱，以乙腈甲醇水氯仿（4030301）为流动相，可使样品中的白花前胡丙素与其它组分的色谱峰达到基线分离，见图1，而采用甲醇水（7030）；甲醇0.025mL/L磷酸（7030）分离均不理想。本实验在每100mL流动相乙腈甲醇水（403030）中加入1mL氯仿，以提高香豆素化合物的分离度，经多次多批样品测试，

12、系统具有较好的选择性和稳定性。理论板数按白花前胡丙素色谱峰计算为30000/m4。 6.3气相色谱/质谱日本岛津GC-17A /QP-5000气相色谱/质谱联用仪。CBP1-M 25弹性石英毛细管柱(25 ×0. 25mm×0. 25m);程序升温:初温240,保持1min,升温速率5/m in,终温280,保持10 m in;载气He,分流比601;进样口温度300,EI电离方式,离子源温度200;电离能量70 eV;扫描质量范围35450 u;进样量2l。6.3.1气相色谱日本岛津GC-14B气相色谱仪。色谱柱:CBP1-M 25弹性石英毛细管柱(25 m×0

13、. 25 mm×0. 25m);程序升温:初温240,保持1 m in,升温速率5/m in,终温280,保持10m in,分流比601;检测器:FID,温度300;进样口温度300;进样量1l。仪器参数:载气N2,柱前压: 1. 4 kg /cm2,尾吹50m l/m in;燃烧气H20. 65 kg /cm2,助燃气H2 0. 50kg /cm2; range 1。6.3.2GC/MS定性分析在上述GC /MS条件下,取样品做GC /MS检测,并结合白花前胡丙素、丁素和紫花前胡苷元对照品的色谱图和质谱图,确认样品中的白花前胡丙素、丁素和紫花前胡苷元总离子流色谱峰,对相应的色谱峰进

14、行质谱检测,得质谱图,MS5。6.4 其他现代研究 张村6等以白花前胡甲素为对照品,采用TLC和HPLC分别进行定性鉴别及含量测定,白花前胡甲素在01176 9601884 80Lg线性关系良好(r=01999 9),回收率为9917%,RSD为0140%。说明TLC鉴别方法专属性强;含量测定方法精密度高,重复性好,简便快速,可用于白花前胡的质量控制。 周国莉7等从紫花前胡中检测出一种特殊成分冰片基氯，是唯一的氯代物成分，含量在 1%以上，曾对 3 个不同产地的紫花前胡样品进行检测均能检出， 而白花前胡样品中均未检出， 所以冰片基氯成分可作为区分白花前胡与紫花前胡挥发油的特征性成分。张村8等采

15、用硅胶和ODS柱色谱法分离、纯化，根据质谱、核磁共振等波谱技术和理化性质鉴定化合物结构,从河南产白花前胡中分离得到了6个香豆素类成分，结果：分离鉴定了6个香豆素类化合物，分别为：白花前胡甲素（±）praeruptorin A（Pd-a）；伞形花内酯（umbelliferone）；前胡醇（-）-peucedanol；6-甲氧基当归素（sphondin）；氧化前胡素（oxypeucedanin）；水化氧化前胡素（oxypeucedanin hydrate）。其中化合物4-6均为首次从白花前胡中分离得到。而后，张村9等又用乙醇提取,经大孔树脂、硅胶和反相硅胶ODS柱色谱分离化合物,利用质谱

16、、核磁共振等现代波谱技术鉴定结构,分离鉴定了8个化合物,分别为(-)scle-rodin,棕榈酸(palmitic acid),白花前胡E素(+)-praeruptorin E,佛手柑内酯(bergapten),欧前胡素(impera-torin),2,6-二甲基喹啉(2,6-dimethyl quinoline),二十四烷酸(tetracosanoic acid),胡萝卜苷(daucosterol)。参考文献：1 国家药典委员会.中华人民共和国药典.第一册.北京:化学工业出版社,2010.248.2 宋吉莲,邢晔忠.介绍一种前胡薄层色谱鉴别方法.时珍国医国药,2000,11(2):143.3 刘爱东,侯 微,陈雪松,等.CO2超临界流体萃取前胡药材中白花前胡甲素.中西医结 合学报,2008,6(12）：1287.4 潘文灏,陈祥晖.高效液相色谱法测定白花前胡中白花前胡丙素的含量.辽宁中医药大 学学报,2008,10(6):193.5 刘布鸣,徐 勤.用GC/MS、GC分析中药前胡中白花前胡丙