浙江大学生物化学实验甲用正交法测定几种因素对蔗糖酶活性的影响实用教案

1、会计学1浙江大学生物化学实验浙江大学生物化学实验(shyn)甲用正交法甲用正交法测定几种因素对蔗糖酶活性的影响测定几种因素对蔗糖酶活性的影响第一页，共19页。第1页/共19页第二页，共19页。第2页/共19页第三页，共19页。度、pH值这四个因素对蔗糖酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、酶浓度、温度和pH值时酶活力最大。第3页/共19页第四页，共19页。行试验的“点”）。试验因素和选用水平如表1所示。第4页/共19页第五页，共19页。素三个水平的各种搭配都要考虑，共需做34=81次试验，而用正交表只需做9次试验。 因素因素水平水平 s(ml)E(ml)温度（温度（）pH10.50.8503

2、.620.20.5375.630.80.2654.6表表1 因素因素(yn s)、水平表、水平表第5页/共19页第六页，共19页。第6页/共19页第七页，共19页。第7页/共19页第八页，共19页。表表2 表头表头(bio tu)设计设计1233931238231372132613225321243331322212111114321 水平水平 因因素试验号素试验号第8页/共19页第九页，共19页。第9页/共19页第十页，共19页。还原糖还原糖 + 3，5-二硝基水杨酸二硝基水杨酸 糖酸糖酸 + 氨基化合氨基化合物物 OH-红棕色，红棕色，540nm处具特处具特征光吸收，征光吸收，OD540值

3、与值与还原糖含量成正比，可还原糖含量成正比，可据此进行比色测定。据此进行比色测定。（DNS试剂）试剂）蔗糖蔗糖 葡萄糖葡萄糖 + 果果糖糖蔗糖酶蔗糖酶H2OCH2OHOHOOHOHHOCH2OHOHOOHHOCH2OH+第10页/共19页第十一页，共19页。第11页/共19页第十二页，共19页。 实验号实验号试剂（试剂（ml）2491683575%蔗糖蔗糖(ml) 0.50.20.80.50.20.80.50.20.8乙酸乙酸缓冲液缓冲液(ml) pH5.62pH4.62pH3.62pH3.61.7pH5.62.6pH4.61.7pH4.62.3pH3.62.3pH5.61.437预温预温2m

4、in50预温预温2min65预温预温2min蔗糖酶蔗糖酶液液(ml)（合适稀释倍数）（合适稀释倍数）0.50.80.20.80.20.50.20.50.8反应总体积反应总体积 3.0 ml37反应反应10min50反应反应10min65反应反应10min表表3 试验试验(shyn)安排表安排表 1、将各管混匀后、将各管混匀后, 分别在各自温度分别在各自温度(wnd)下（下（ 37、50 /55 、65/75 ）保温）保温10分钟。分钟。 2、向各管中加入、向各管中加入1.0ml 3.5-二硝基水杨酸试剂（终止酶促反应，同时二硝基水杨酸试剂（终止酶促反应，同时为显色剂），沸水中加热为显色剂），沸

5、水中加热5分钟（显色反应），分钟（显色反应）， 3、取出冷却后，再向每管中加入、取出冷却后，再向每管中加入5ml蒸馏水，摇匀，测蒸馏水，摇匀，测A540值。值。第12页/共19页第十三页，共19页。第13页/共19页第十四页，共19页。取出后立即用冷水冷却至室温，再向管中加入5ml蒸馏水，摇匀，测A540值。第14页/共19页第十五页，共19页。各因素的水平改变对试验指标的影响是不同的。第15页/共19页第十六页，共19页。第16页/共19页第十七页，共19页。第17页/共19页第十八页，共19页。表表4 试验结果试验结果(ji gu)分析计分析计算表算表 水平水平 因素因素试验号试验号1s(ml)2E(ml)3温度温度()4pH值值试验结果试验结果A5401 0.51 0.81 501 3.61 0.52 0.52 372 5.61 0.53 0.23 653 4.62 0.21 0.82 373 4.62 0.22 0.53 651 3.62 0.23 0.21 502 5.63 0.81 0.83 652 5.63 0.82 0.51 503 4.63 0.83 0.22 371 3.6(