微生物分离与纯化技术ppt课件

1、微生物分别与纯化技术微生物分别与纯化技术环境学院朱红力环境学院朱红力 环境微生物课程实验环境微生物课程实验一、实验目的一、实验目的 掌握从土壤中分别培育微生物的方法，从而获掌握从土壤中分别培育微生物的方法，从而获得假设干种微生物纯培育技艺。得假设干种微生物纯培育技艺。二、实验器材及设备二、实验器材及设备1、无菌培育皿直径、无菌培育皿直径90毫毫米、无菌吸管米、无菌吸管1毫升、盛有毫升、盛有90毫升无菌水的锥形瓶、盛毫升无菌水的锥形瓶、盛有有9毫升无菌水的试管毫升无菌水的试管5支。支。 2、培育基已灭菌的、土、培育基已灭菌的、土壤颗粒。壤颗粒。3、接种环、酒精灯、接种环、酒精灯、恒温箱培育箱、恒

2、温箱培育箱、超净任务台等。超净任务台等。三、微生物分别纯化的操作方法三、微生物分别纯化的操作方法1、取样、取样 取土样取土样10g2、稀释土壤悬浊液、稀释土壤悬浊液引见两种方法：稀释混合平板法和平板划线法引见两种方法：稀释混合平板法和平板划线法一稀释混合平板分别法以分别真菌为例一稀释混合平板分别法以分别真菌为例稀释土壤悬浊液操作留意：稀释土壤悬浊液操作留意：依次编号：按依次编号：按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及及10-6锥形瓶中的玻璃珠将颗粒状样品打散锥形瓶中的玻璃珠将颗粒状样品打散无菌操作：超净任务台、酒精灯、无菌吸无菌操作：超净任务台、酒精灯、无菌吸管管移液管移液后多余

3、的液体处置移液管移液后多余的液体处置试管中悬浊液须持移液管吹洗三次搅匀试管中悬浊液须持移液管吹洗三次搅匀3、平板的制造、平板的制造每组预备两套无菌培育皿，在皿底注明稀释液浓度每组预备两套无菌培育皿，在皿底注明稀释液浓度10-4、10-5、10-6 中中任选两种浓度、菌名如黑曲霉、班级、组别。任选两种浓度、菌名如黑曲霉、班级、组别。融化锥形瓶中的培育基，放在融化锥形瓶中的培育基，放在45-50 恒温水浴锅中备用恒温水浴锅中备用制备混合液平板：无菌操作下，翻开培育皿在无菌培育皿一边加两滴链霉制备混合液平板：无菌操作下，翻开培育皿在无菌培育皿一边加两滴链霉素液，另一边加素液，另一边加mL土壤稀释液留

4、意不要让两液相混，倒入土壤稀释液留意不要让两液相混，倒入45-50融融化的真菌培育基约化的真菌培育基约1/4-1/3培育皿高度。培育皿平放在桌上顺时针、逆时针悄培育皿高度。培育皿平放在桌上顺时针、逆时针悄然转动，混匀皿中物质。培育基冷凝后即成平板。然转动，混匀皿中物质。培育基冷凝后即成平板。 恒温培育恒温培育:平板倒置于平板倒置于28-30恒温箱中恒温箱中,培育培育5-6天后天后察看真菌菌落形状。察看真菌菌落形状。 转接纯化转接纯化:挑取单个菌落挑取单个菌落,接种接种到新颖平板上到新颖平板上,培育察看培育察看,直至直至纯化。纯化。平板制造的操作留意：平板制造的操作留意：融化培育基时不要溢出烧瓶

5、或糊底融化培育基时不要溢出烧瓶或糊底无菌操作下，翻开培育皿的操作无菌操作下，翻开培育皿的操作一根一根mL移液管屡次移液先移低浓度悬浊液，再移高浓度悬浊液。移液管屡次移液先移低浓度悬浊液，再移高浓度悬浊液。移液管可以用稀释悬浊液的那根在无菌操作下接着做，也可另取一根无菌的。移液管可以用稀释悬浊液的那根在无菌操作下接着做，也可另取一根无菌的。为什么培育皿要倒置培育为什么培育皿要倒置培育二平板划线分别法以分别细菌为例二平板划线分别法以分别细菌为例 每组预备两套无菌培育皿每组预备两套无菌培育皿,在皿底菌名、班级、组别。在皿底菌名、班级、组别。融化培育基，在融化培育基，在45-50 恒温水浴锅中备用恒温

6、水浴锅中备用制备平板：无菌操作下，翻开培育皿，倒入制备平板：无菌操作下，翻开培育皿，倒入45-50融化的融化的细菌培育基约细菌培育基约1/4-1/3培育皿高度。培育皿平放在桌上，培育培育皿高度。培育皿平放在桌上，培育基冷凝后即成平板。基冷凝后即成平板。 平板划线平板划线:无菌操作下无菌操作下,用接种环挑取一环用接种环挑取一环10-1土壤悬浊液土壤悬浊液,在平板上悄然划线切勿划破培育基划线的方式可取以在平板上悄然划线切勿划破培育基划线的方式可取以以下图以下图 恒温培育恒温培育:平板倒置于平板倒置于28-30恒温箱中恒温箱中,培育培育-天后察天后察看细菌菌落形状。看细菌菌落形状。转接纯化转接纯化:挑取单个菌落挑取单个菌落,接种到新颖平板上接种到新颖平板上,培育察看培育察看,直至直至纯化纯化平板划线的操作留意：平板划线的操作留意： 接种换环的运用接种换环的运用 分区域划线，划完第一个区域，烧掉接种环上的剩余物，分区域划线，划完第一个区域，烧掉接种环上