免疫学技术原理PPT学习教案

1、会计学1免疫学技术原理免疫学技术原理 主要内容主要内容抗原抗体反应的原理抗原抗体反应的原理抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点影响抗原抗体反应的因素影响抗原抗体反应的因素免疫学检测技术的类型免疫学检测技术的类型思考题思考题小结小结第1页/共39页（一）抗原抗体反应的原理（一）抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应抗原抗体反应: :指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。应。 抗原表位与抗体高变区间的互补结合抗原表位与抗体高变区间的互补结合 抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合 抗原抗体之间的抗原抗体之间的结合力结

2、合力 亲水胶体亲水胶体转化为转化为疏水胶体疏水胶体 物质基础物质基础: :第2页/共39页体内体内：表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒：表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素或引起免疫病理的损伤素或引起免疫病理的损伤体外体外：凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反：凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应应第3页/共39页（二）（二）抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点特异性特异性 可逆性可逆性比例性比例性 阶段性阶段性第4页/共39页特异性：特异性：抗原与抗抗原与抗体结合反应的专一体结合反应的专一性性抗原抗体反应特异性示意图抗原抗体反应特异性示意图分子基础分子基础: :抗原表位与抗体抗原表位与抗体分子

3、高变区之间空间构型的分子高变区之间空间构型的互补性互补性（1 1）特异性）特异性第5页/共39页两种不同的抗原两种不同的抗原分子具有部分相分子具有部分相同或类似结构的同或类似结构的抗原表位，可与抗原表位，可与彼此相应的抗血彼此相应的抗血清发生反应清发生反应交叉反应交叉反应（cross reactions）抗原抗体交叉反应示意图抗原抗体交叉反应示意图Ag B第6页/共39页(2)(2)可逆性可逆性可逆性：可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 影响因素：影响因素： 抗体对相应抗原的抗

4、体对相应抗原的亲合力亲合力亲合力越高，结亲合力越高，结合越牢固，越不易解离合越牢固，越不易解离 环境因素对复合物的影响环境因素对复合物的影响pHpH、离子强度、离子强度 第7页/共39页前带前带(prezone)(prezone)：抗体过量：抗体过量后带后带(postzone)(postzone)：抗原过量：抗原过量等价带等价带(equivalence zone)(equivalence zone)： 抗原抗体比例合适抗原抗体比例合适 抗原抗体反应比例性示意图抗原抗体反应比例性示意图比例性：比例性：抗原与抗体发生抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量可见反应需遵循一定的量比关系比关系(3)(3)

5、比例性比例性第8页/共39页第一阶段：第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：第二阶段：反应可见阶段，反应慢反应可见阶段，反应慢，出现凝集、出现凝集、 沉淀沉淀和细胞溶解等现象和细胞溶解等现象 (4)(4)阶段性阶段性第9页/共39页A.A.抗原、抗体反应物的自身因素抗原、抗体反应物的自身因素环境因素环境因素（三）（三） 影响抗原抗体反应的因素影响抗原抗体反应的因素抗原抗原: :理化性状、表位种类和数目理化性状、表位种类和数目抗体抗体: :来源、特异性、亲和性、效价来源、特异性、亲和性、效价第10页/共39页第11页/共39页反应类型反应类型实验技术实

6、验技术结果判断结果判断凝集反应凝集反应直接凝集试验直接凝集试验观察凝集现象观察凝集现象间接凝集试验间接凝集试验同上同上抗球蛋白试验抗球蛋白试验同上同上沉淀反应沉淀反应 液相沉淀试验液相沉淀试验观察沉淀，检测浊度观察沉淀，检测浊度免疫电泳技术免疫电泳技术观察扫描沉淀峰、沉淀弧观察扫描沉淀峰、沉淀弧补体参与补体参与的反应的反应补体溶血试验补体溶血试验观察测定溶血现象观察测定溶血现象补体结合试验补体结合试验同上同上( (四）免疫学检测技术的类型四）免疫学检测技术的类型第12页/共39页反应类型反应类型实验技术实验技术结果判断结果判断中和反应中和反应病毒中和试验病毒中和试验检测病毒感染性检测病毒感染性

7、毒素中和试验毒素中和试验检测外毒素毒性检测外毒素毒性标记免疫反应标记免疫反应荧光免疫技术荧光免疫技术检测荧光现象检测荧光现象放射免疫技术放射免疫技术检测放射性强度检测放射性强度酶免疫技术酶免疫技术检测酶底物显色检测酶底物显色发光免疫技术发光免疫技术检测发光强度检测发光强度金免疫技术金免疫技术检测金颗粒沉淀检测金颗粒沉淀第13页/共39页按实际用途分为按实际用途分为: :e e免疫组织化学技术免疫组织化学技术(immunohistochemistry techniqu,IHCT)(immunohistochemistry techniqu,IHCT)免疫测定免疫测定(immunoassay)(i

8、mmunoassay)标记免疫技术标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析第14页/共39页按测定反应体系的物理状态分为按测定反应体系的物理状态分为: : 均相免疫测定均相免疫测定(homogenous immunoassay(homogenous immunoassay）非均相免疫测定非均相免疫测定(heterogenous immunoassay)(heterog

9、enous immunoassay) 按检测现象分为按检测现象分为: : 放射免疫技术放射免疫技术 荧光免疫技术荧光免疫技术酶免疫技术酶免疫技术 化学发光免疫技术化学发光免疫技术金免疫技术金免疫技术第15页/共39页第16页/共39页 抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。生的特异性结合反应。 抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比例抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比例性和阶段性。性和阶段性。 第17页/共39页 影响抗原抗体反应的因素包影响抗原抗体反应的因素包括反应物的自身因素和括反应物的自身因素和环境因素。环境因素。免疫学检测技

10、术的基础是免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应抗原抗体反应，免疫学技术，免疫学技术有有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型和标记免疫反应五种类型。 第18页/共39页抗原抗原抗原抗原排排斥斥抗原抗原抗体抗体抗原抗原抗原抗原抗原抗原 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。凝集反应。第二节 凝集反应第19页/共39页 分类直接凝集反应直接凝集反应- 颗粒性抗原直接与抗体结合，在

11、电解质颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。细胞性抗原：细胞性抗原：细菌和红细胞细菌和红细胞第20页/共39页凝集原凝集原(agglutinogen)(agglutinogen)：凝集反应中的抗原。凝集反应中的抗原。凝集素凝集素(agglutinin)(agglutinin)：凝集参与反应的抗体凝集参与反应的抗体第21页/共39页颗粒性抗原颗粒性抗原凝集素凝集素 直接凝集反应直接凝集反应第22页/共39页1、玻片凝集反应玻片凝集反应: : 已知抗原已知抗原+ +未知抗体未知抗体凝集团块凝集团块 混浊混浊? ?2、试管凝集反应：、试管

12、凝集反应： 定量抗原定量抗原+ +系列稀释抗体系列稀释抗体不同程度的凝集反应不同程度的凝集反应YESYES NO NO确定抗体的滴度确定抗体的滴度第23页/共39页 在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。集现象。试管凝集试验试管凝集试验第24页/共39页第25页/共39页鲜血者红细鲜血者红细胞胞受血者血清受血者血清O型型(抗抗A、抗、抗B)A型型(抗抗B)B型型(抗抗A)AB型型(无无)O型型-A型型+-+-B型型+-AB型型+- 注注:“+”表示有凝集反应表示有凝集反应, “-”表示表示

13、无凝集反应无凝集反应第26页/共39页间接凝集反应间接凝集反应(indirect (indirect agglutination)agglutination): : 将可溶性抗原或抗体吸将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象眼可见的凝集现象. .第27页/共39页载体载体可溶性抗原可溶性抗原致敏致敏致敏颗粒致敏颗粒NSNS凝集颗粒凝集颗粒第28页/共39页 载体种类及其处理方法载体种类及其处理方法红细胞：红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛新

14、鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。化后应用。聚苯乙烯胶乳颗粒：聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒团的颗粒第29页/共39页1 1. .正向间接凝集试验正向间接凝集试验2 2. .反向间接凝集试验反向间接凝集试验3 3. .间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验间接凝集反应的类型间接凝集反应的类型第30页/共39页用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测抗体检测抗体正向间接凝集试验正向间接凝集试验第31页/共39页反向间接凝集试验反向间接凝集试验用抗体致敏载体用抗体致敏载体-检测抗原检测抗原第32页/共39页间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测抗原检测抗原第33页/共39页间接血凝试验间接血凝试验第34页/共39页间接乳胶凝集试验间接乳胶凝集试验概念概念金黄色葡萄球菌协同凝集试验金黄色葡萄球菌协同凝集试验第35页/共39页间接凝集反应的应用间接凝集反应的应用抗原的检测抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶