实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验

1、 Thalassemia地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一全球有全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）中国南方不同高发地中国南方不同高发地区人群携带率区人群携带率 3 24% 地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见；地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见； 重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担和难以估量的精神负担；和难以估量的精神负担；中国南方人群地贫基因携带率 地区地区携带率携带率(%)(%) 地贫地贫地贫地贫合计合计广西广西17.66.424.0广东广东8.52

2、.511.0海南海南12.72.715.4云南云南9.8 7.317.1贵州贵州4.25.19.3重庆重庆5.22.07.2 地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）：碍性贫血）： 由于由于（突变、缺失（突变、缺失等）引起的等）引起的，导致，导致，同时，同时的一种的一种。由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致或不能合成，导致的的组成成分组成成分改改变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为表现为。 重型重型地贫地

3、贫（HbBarts胎儿水肿综合征胎儿水肿综合征） 4个个基因都缺失了基因都缺失了(-/-) ，在孕后期或出生后即死亡。在孕后期或出生后即死亡。骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等1.广西人群地贫基因携带率很高。2.。3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。4.，但。5.是未来发展的方向。-靶型靶型RBC 红细胞脆性实验红细胞脆性实验Erythrocyte fragility testErythrocyte fragility test地贫患者地贫患者正常人正常人血红蛋白电泳血

4、红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresisHemoglobin electrophoresis chain disappear (0-thal major)chain disappear (HbBarts hydrop fetalis) 12341234 肽链分析肽链分析Peptide chain analyses 单管多重单管多重PCRPCR-ASO诊断诊断(Diagnosis)(Diagnosis) 临床特点实验室检查父母调查阳性临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）（基因分析） MCV 80fl 和和/ 或或MCH 27pg ,则高度怀则高度怀疑为地贫疑为地贫;

5、HbA2 3. 5 % ,则为则为地贫基因携带者地贫基因携带者地中海贫血确诊试验地中海贫血确诊试验 地贫地贫诊断基因芯片诊断基因芯片(Thalachip); 地贫地贫基因诊断条膜基因诊断条膜(反向点杂交反向点杂交)/一管法多一管法多重重PCR ASO寡核苷酸探针点杂交寡核苷酸探针点杂交 DNA测序测序鉴别诊断鉴别诊断(Differential (Differential diagnosis)diagnosis) 缺铁性贫血缺铁性贫血 遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症 传染性肝炎或肝硬化传染性肝炎或肝硬化【检验原理】【检验原理】贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。贫血症者常伴有红细胞

6、渗透脆性的改变。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是可筛查是否贫血，特别是组成：由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）；SG-B母液（终止红细胞溶血液）母液（终止红细胞溶血液）；SG-C母液（红细胞溶血液）组成；成分：SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化钠制成；母液采用氯化钠制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。新鲜抗凝全血新鲜抗凝全血（、EDTA-Na、ACD），置28保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。1、取试管一只，加入，放。2、加入，立刻混匀，继续放在。3、，加入。混匀，。4、将（），于（以纯化水作空白对照）。5、，混匀，（透明红色）后，。6、。7、按下列公式计算出溶血率百分比。溶血率 65为正常溶血率；55为溶血率降低；（注 56-64为溶血率轻度降低）。正常溶血