细菌感染的检查方法与防治原则ppt课件

1、标本的采集和运送标本的采集和运送防止杂菌污染防止杂菌污染运送留意保管运送留意保管不同期不同标本不同期不同标本用抗菌素以前用抗菌素以前采集病变明显部位采集病变明显部位标本必需新颖标本必需新颖药物敏感实验直接涂片镜检分别培育生化实验血清学实验动物实验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断分子生物学技术其他检测技术形状与构造的检查形状与构造的检查 细菌个体形状与构造的检查细菌个体形状与构造的检查 细菌的菌体形状、陈列、染色性细菌的菌体形状、陈列、染色性染色染色单染：单染：复染：复染：特殊染色：特殊染色：形状与构造的检查形状与构造的检查革兰染色法革兰染色法Gram stain：方法：初染方法：初染 媒染媒染

2、 脱色脱色 复染复染原理：原理： 1、G+菌等电点低于菌等电点低于G-菌，吸收带正电荷的碱性燃料多菌，吸收带正电荷的碱性燃料多 2、G +菌细胞壁肽聚糖层多，菌细胞壁肽聚糖层多，G-菌细胞壁脂质含量高菌细胞壁脂质含量高 3、G+菌含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合成大分子菌含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合成大分子复合物复合物医学意义：医学意义：1、鉴定细菌、鉴定细菌 2、与致病性有关、与致病性有关 3、参考选择抗菌、参考选择抗菌药物药物形状与构造的检查形状与构造的检查抗酸染色抗酸染色acid-fast stain方法：方法：1、石炭酸复红初染：加热、石炭酸复红初染：加热35min，水洗，

3、水洗 2、3%5%盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色30s，水洗，水洗 3、碱性美蓝复染、碱性美蓝复染30s，水洗。，水洗。 4、干后镜检、干后镜检结果：结果： 抗酸杆菌抗酸杆菌 红色红色 非抗酸杆菌非抗酸杆菌 蓝色蓝色原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与石炭酸原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合成结实的复合物，能抵抗脱色。复红结合成结实的复合物，能抵抗脱色。分别与鉴定分别与鉴定分别：分别： 固体平板固体平板 分区划线法分区划线法 单个菌落单个菌落 菌落形状：大小、光滑度、透明、溶血性菌落形状：大小、光滑度、透明、溶血性鉴定：鉴定：形状特征形状特征生化反响生

4、化反响血清学鉴定血清学鉴定动物实验动物实验药物敏感实验药物敏感实验对糖的发酵对蛋白质的发酵枸橼酸盐利用实验尿素酶实验甲基红实验吲哚实验硫化氢实验单糖发酵实验VP实验其他实验抗原的检测抗原的检测优点：优点： 分别、培育细菌困难的情况下；分别、培育细菌困难的情况下； 曾经运用了抗生素、细菌已被抑制曾经运用了抗生素、细菌已被抑制/杀死；杀死； 可检测微量的抗原可检测微量的抗原常用方法：常用方法： 沉淀反响沉淀反响 协同凝结实验协同凝结实验 免疫荧光法免疫荧光法 对流免疫电泳对流免疫电泳 酶免疫法酶免疫法 免疫印迹法免疫印迹法抗体的检测抗体的检测原理：用知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特原

5、理：用知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。断。原那么：原那么： 双份血清；双份血清； 与该地域的抗体效价的正常值比较；与该地域的抗体效价的正常值比较； 恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍倍者者抗体的检测抗体的检测常用方法：常用方法：凝集实验：凝集实验：补体结合实验：补体结合实验：中和实验：中和实验： 肥达实验、外斐实验、显微镜凝集实验等肥达实验、外斐实验、显微镜凝集实验等抗抗“O实验等实验等Q热柯克斯体抗体检测等热柯

6、克斯体抗体检测等第二节 细菌性感染的特异性预防 获得性免疫的产生的方式 自然自动免疫：患病、隐性感染 自动免疫 人工自动免疫：接种疫苗、类毒素等 自然被动免疫：经过胎盘、初乳被动免疫 人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球蛋 白、转移因子 第二节第二节 细菌性感染的特异性预防细菌性感染的特异性预防一、人工自动免疫一、人工自动免疫 概念：人工自动免疫是人为地将疫苗概念：人工自动免疫是人为地将疫苗或类毒素接种于人体，使机体自动产生或类毒素接种于人体，使机体自动产生特异性免疫力的过程。是一种防治微生特异性免疫力的过程。是一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。常用的物感染的措施，主要用于预防。常用的人工自

7、动免疫制剂有以下几种：人工自动免疫制剂有以下几种：第二节 细菌性感染的特异性预防 一疫苗 1 死疫苗： 用理化方法将免疫原性强的细菌杀死制成的。如百日咳、伤寒、霍乱、斑疹伤寒、流行性脑膜炎、钩端螺旋体病等 2 活疫苗： 用减度或无毒的病原体制成,如BCG、鼠 疫和炭疽等的疫苗第二节 细菌性感染的特异性预防 活疫苗与死疫苗的比较 活疫苗 死疫苗 接种次数 1次 2-3次 接种量 小 较大 接种反响 轻 重 免疫效果 较好,维持1-5年 差,维持0.5-1年 毒力上升 有能够 不能够 平安性 有潜在危险性 平安性好 疫苗稳定性 相对不稳定 相对稳定 保管 不易保管 易保管第二节 细菌性感染的特异性

8、预防 3 基因工程疫苗 将编码有效抗原组分的目的基因插入适当载体,构成重组DNA, 再导入宿主细胞, 目的基因随重组DNA复制而复制, 随宿主细胞分裂而扩增, 使目的基因表达大量有效抗原成分, 由此制备的疫苗称为基因工程疫苗 如把HBsAg基因插入酵母细胞中，胜利表达并制备HBsAg疫苗第二节 细菌性感染的特异性预防 4 亚单位疫苗 利用带有细菌维护性免疫原的组分制成的疫苗如肺炎链球菌荚膜多糖疫苗、钩端螺旋体外膜蛋白疫苗等。此种疫苗免疫原性弱，需加佐剂或与类毒素结合成偶联疫苗，以加强免疫原性 5 重组载体疫苗将编码某一蛋白抗原的基因转入减毒的病毒或细菌而制成的疫苗活疫苗的特殊方式：痘苗病毒6

9、核酸疫苗 或称DNA疫苗、基因疫苗 是将能编码引起维护性免疫应对的病原体免疫原基因片段和质粒载体直接注射入宿主体以表达目的免疫原，进而产生特异性体液免疫和细胞免疫的新型疫苗第二节 细菌性感染的特异性预防第二节 细菌性感染的特异性预防 二类毒素toxoid类毒素是外毒素经0.3-0.4%甲醛处置后，失去毒性仍坚持抗原性的生物制品参与适量的磷酸铝或氢氧化铝等制成精制的类毒素在体内吸收缓慢免疫效果好 如白喉类毒素、破伤风类毒素等第二节 细菌性感染的特异性预防第二节 细菌性感染的特异性预防 人工自动免疫和人工被动免疫的比较 区别要点 人工自动免疫 人工被动免疫 免疫物质 抗原 抗体或细胞因子 接种次数

10、 1-3次 1次 免疫出现时间 慢 2-4周 快 立刻 免疫继续时间 长 数月-数年 短 2-3周 主要用途 预防 治疗或紧急预防 三 生物制剂的运用及本卷须知 一接种对象： 根据发病的年龄、职业、流行地域确立接种对象 二接种途径： 死疫苗、类毒素接种量大，常用皮下注射；活疫苗接种量小，常用皮肤划痕、皮内注射、口服及喷雾等；丙种球蛋白、动物血清和抗毒素采用肌肉注射 第二节 细菌性感染的特异性预防 三接种剂量、次数及间隔时间 死疫苗接种剂量大，常分2-3次注射，间隔时间随免疫力建立情况而定，伤寒疫苗产生免疫力快，间隔7-10天，类毒素吸收较慢，间隔3-4周。普通需1-2年后再接种一次 四接种反响

11、及预防接种忌讳症 1.普通反响 2.异常反响 3.运用生物制品的忌讳症第二节 细菌性感染的特异性预防第三节 细菌感染的治疗一、抗菌药物的种类一、抗菌药物的种类二、抗菌药物的主要作用机制二、抗菌药物的主要作用机制1. 试述检测病原菌的根本程序和原那么？2. 对曾经分别出的细菌菌落，怎样从微生物学角度去进一步鉴定？3. 试述疫苗研制及其开展的主要阶段？ 思索题应留意以下原那么应留意以下原那么对本身带有杂菌对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便如咽拭子、粪便) 或易受污染的标本，要进展或易受污染的标本，要进展病毒分别培育时，应运用抗生素。病毒分别培育时，应运用抗生素。 因病毒在室温中易失去活性，标本应低温

12、保管并尽快送检。因病毒在室温中易失去活性，标本应低温保管并尽快送检。 血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后23w内各取内各取1份血份血清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化。清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化。动物接种动物接种鸡胚接种鸡胚接种细胞培育细胞培育 动物接种动物接种是最原始的病毒培育方法，是最原始的病毒培育方法，根据病毒种类不同，选择敏打动物及适宜接种部位，根据病毒种类不同，选择敏打动物及适宜接种部位，如嗜如嗜 神经性病毒狂犬病毒可接种于小鼠脑内；神经性病毒狂犬病毒可接种于小鼠脑内；痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。痘病毒可接种于家兔角膜或皮内

13、。 鸡胚接种鸡胚接种 鸡胚对多种病毒敏感。鸡胚对多种病毒敏感。 普通采用孵化普通采用孵化914天的鸡胚，天的鸡胚， 根据病毒种类不同，将病毒标本根据病毒种类不同，将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位，接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有：最常用的鸡胚接种部位有： 羊膜腔羊膜腔 尿囊腔尿囊腔 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜 卵黄囊等卵黄囊等 鸡胚接种鸡胚接种 鸡胚接种鸡胚接种 细胞培育细胞培育 原代细胞：原胚肾细胞原代细胞：原胚肾细胞 二倍体细胞：人胚肺二倍体细胞：人胚肺WI-26株细胞株细胞 传代细胞：癌细胞传代细胞：癌细胞 细胞培育细胞培育 病毒在细胞中增殖的目的：病毒在细胞中增殖的目的： 细胞

14、病变效应细胞病变效应-cytopathic effect, CPE 红细胞吸附景象红细胞吸附景象-hemadsorption，HAd 干扰景象干扰景象-interference 细胞培育细胞培育细胞病变效应细胞病变效应-cytopathic effect, CPEq有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或零落等。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或零落等。q有些病毒如麻疹病毒、有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等等 作用于细胞膜，可使临近的细胞相互作用于细胞

15、膜，可使临近的细胞相互交融，构成多核巨细胞或称交融细胞。交融，构成多核巨细胞或称交融细胞。 q有些病毒有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培育细胞中构成胞浆或核内的包可在培育细胞中构成胞浆或核内的包涵体。涵体。 细胞培育细胞培育细胞病变效应细胞病变效应-cytopathic effect, CPE 细胞培育细胞培育细胞病变效应细胞病变效应-cytopathic effect, CPE 细胞培育细胞培育红细胞吸附景象红细胞吸附景象-hemadsorption,HAdq 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素，具有流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细

16、胞膜上出现了血凝素，具有吸附脊椎动物吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的才干，这一景象称红细胞吸附；红细胞的才干，这一景象称红细胞吸附；q 常用来测定具有常用来测定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖；的粘病毒与副粘病毒的增殖；q 假设有相应的抗血清，那么能中和细胞膜上的假设有相应的抗血清，那么能中和细胞膜上的HA，HAd不再发生，称不再发生，称红细胞吸附抑制实验。红细胞吸附抑制实验。 细胞培育细胞培育干扰景象干扰景象-interferenceq 某些病毒感染细胞时不出现某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化或其他易于测出的变化(如如HAd)，q 但能干扰在其后感染

17、的另一病毒的增殖。但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。q 如风疹病毒感染如风疹病毒感染Vero细胞时细胞时CPE不明显，但它能干扰后感染的埃不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的可病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。 原列情况需求进展血清学检查：原列情况需求进展血清学检查： 采集标本中分别病毒已很困难；采集标本中分别病毒已很困难； 目前尚未建立分别该病毒的方法和技术；目前尚未建立分别该病毒的方法和技术； 判别临床治疗效果；判别临床治疗效果； 进展流行病学调查；进展流行病学调查； 基层医疗机构无法开展病毒分别实验。基层医疗机构无法开展病毒分别实验。 原理：是用知病毒抗

18、原来检测病人血清中有无相应抗体，故须原理：是用知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体，故须待病人感染后体内产生抗体时才干检出。待病人感染后体内产生抗体时才干检出。 另外，在采取临床标本及病人血清应留意病程，必需采取患者急另外，在采取临床标本及病人血清应留意病程，必需采取患者急性期血清与恢复期血清性期血清与恢复期血清 (双份血清双份血清) 进展血清学实验。进展血清学实验。假设第假设第2次血清抗体滴度比第次血清抗体滴度比第1次高出次高出4倍以上时，才有诊断意义。倍以上时，才有诊断意义。 中和实验中和实验(neutralizing test, NT test) 补体结合实验补体结合实验 (compl

19、ement fixation test,CF test) 血凝抑制实验血凝抑制实验(hemagglutinatia inhibition test, HI test) 凝胶免疫分散实验凝胶免疫分散实验 中和实验中和实验(neutralizing test, NT test) 是病毒在活体内或细胞培育中被特异性抗体中和而失去感染性的一种实验。是病毒在活体内或细胞培育中被特异性抗体中和而失去感染性的一种实验。 中和抗体中和抗体(netralizing antibodies,NTAb)是作用于病毒外表抗原是作用于病毒外表抗原 (衣壳或包膜衣壳或包膜) 的抗体，同种不同型病毒间普通无交叉，特异性高，抗

20、体在体内维持时间长。的抗体，同种不同型病毒间普通无交叉，特异性高，抗体在体内维持时间长。 中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也能够因以前有过隐性感染所致。中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也能够因以前有过隐性感染所致。 中和实验适用于病毒疫苗研讨和人群免疫情况调查，在临床诊断上较少运用。中和实验适用于病毒疫苗研讨和人群免疫情况调查，在临床诊断上较少运用。 补体结合实验补体结合实验 (complement fixation test,CF test) 用知病毒可溶性补体抗原用知病毒可溶性补体抗原(CF)来检测病人血清中相应来检测病人血清中相应(CF)抗体。抗体。 CF抗原是病毒的内部抗原，同种异

21、型间常有交叉，故特异性较抗原是病毒的内部抗原，同种异型间常有交叉，故特异性较中和实验低。中和实验低。 但但CF抗体抗体IgM出现较早，消逝较快，故出现较早，消逝较快，故CF阳性可作为近期阳性可作为近期感染的目的。感染的目的。 血凝抑制实验血凝抑制实验(hemagglutinatia inhibition test, HI test) 具有具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称血凝景象。的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称血凝景象。 这种景象能被相应抗体抑制，称这种景象能被相应抗体抑制，称HI实验。实验。 其原理是相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒外表的其原理是相应抗体与病毒结合后，阻抑

22、了病毒外表的HA与红细胞的结合。与红细胞的结合。 本实验简易、经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助本实验简易、经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。 血凝抑制实验血凝抑制实验(hemagglutinatia inhibition test, HI test) 病毒病毒 +鸡鸡RBC = 凝集血凝实验凝集血凝实验 病毒病毒 +特异性抗体特异性抗体 +鸡鸡RBC=不凝集不凝集 血凝抑制实验血凝抑制实验 形状学检查形状学检查 电镜和免疫电镜电镜和免疫电镜 先将标本与病毒特异性抗体混合，促进病毒颗粒凝集，先将标本与