动物细胞工程知识点

1、动物细胞工程12月20日动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植.动物细胞融合、生产单 克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。一、动物细胞培养1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的 培养基中，让这些细胞生长和增殖。2、原理：细胞增殖3、过程材料处理：取动物组织块剪碎，加胰蛋白酶或胶原蛋白酶分散成单个细胞培养港稀释*制成细胞悬液趣原代培养=培养有丝分裂»贴壁生长鯉聖莖鯉»细胞接触抑制重新用觴蛋白酶等处理a分散成单个细胞,传代培养2分瓶培养巴壇不易传下去叱刘代増殖缓窗以至停少部分突变脣得不刊 止，部分核

2、型变化 等同于癌变拡阿"比比注意： 10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。 超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若 超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。 分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。 思考回答：、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养7答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么7答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力， 所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想

3、使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向 诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。、进行动物细胞传代培养时用臍蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分7 用胃蛋白酶行吗7 答：主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2,当P H大于6时就会失去活性，多数动物细胞培养适宜PH为7.27.4,胃蛋白酶在此环境中没 有活性。（胰蛋白酶作用的适宜PH为7.28.4,膀蛋白酶活性较高）、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗7为什么7答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞 有损伤，因此必须控制好消化时间。、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成

4、新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体4、重要概念 细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。产生原因：培养贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖。培养要求：培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒，易于贴附。 细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖， 这种现象称为细胞的接触抑制。 原代培养：动物组织消化后的初次培养 传代培养：原代培养的细胞由于接触抑制不再分裂，需要重新用胰蛋白酶等处理，然 后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这种培养叫传代培养。5、培养条件：无菌无毒环境：无菌一一对培养液和所有培养用具进行无菌处理

5、；在细胞培养液中添 加一定量的抗生素。；无毒定期更换培养液，防止细胞代谢产物积扇对自身造成危害。 营养：成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、 微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分。培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的 培养基）温度和pH值：哺乳动物多以S6.5±O.5-C为宜，多数细胞生存的适宜pH为7一27一4。气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5%CO2的混合气体 的培养箱中进行培养。O2：是细胞代谢所必需的CO2主要作用是维持培养液的pH。6、应用：生产有重要价值的生物

6、制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。基因工 程中受体细胞的培养。用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。科学家培养正常或各种病 变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌 症及其他疾病提供理论依据。植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养动物细胞培养原理细胞全能性细胞增殖培养基性质固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清培养结果植物体细胞株、细胞系培养目的快速繁殖、培育无病毒植株 等获得细胞或细胞产物二、动物细胞核移植技术1. 概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重 组并发育成一个新的胚胎，这

7、个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物 称为克隆动物。2、原理：动物细胞核的全能性3、动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。原因：动物胚胎细胞分化程度低，恢复 其全能性相对容易，动物体细胞分化程度髙，恢复其全能性十分困难。4、体细胞核移植过程：（以克隆高产奶牛为例）卵巢采集 完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，供核动物生活的环境与 克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和供核体动物完全相同。 另外，在个体发育过程中有可能发生基因突变，产生供体动物没有的性状。基于上述三个方 面的原

8、因，克隆动物不会是供体动物100%的复制。卵母细胞体外培养克隆动物卵巢J采集 细胞核移植技术中 细胞融合，体现细胞膜的 受体细胞为减数第 在去核的同时连同第一极 该技术形成重组细 性。 用卵母细胞做受体 达全能性的物质；a营养q 克隆属于无性繁殖 思考回答：、为什么不能直接利用 动物细胞的全能性会 因此，需要借助核移植来 、你认为用上述体自 的复制吗?为什么？克隆动物绝大部分D： DNA来自于受体卵母细脆供体细胞口供体细胞培养心卵母细胞体外培养Mil中期卵母细胞亠I去核“去核卵母细胞3克隆动物5、应用：畜牧业：可以加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育保护濒危物种：可望利用体细胞核移植技术増加濒危动物的存活数量。医药卫生：转基因克隆动物可作为生物反应器,生产珍贵医用蛋白；转基因克隆动物 细胞、组织和器官可作为异种楼植的供体；人的核移植胚胎干细胞经过诱导分化，形成相应 的组织、器官后，可用于组织器官的移植。其他领域：研究克隆动物和克隆细胞可使人类深入了解胚胎发育及衰老过程；用克隆 动物做疾病模