广州工商培训-菌落总数

1、筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元食食 品品 快快 筛筛 技技 术术 广州达元食品安全技术有限公司广州达元食品安全技术有限公司筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元菌落总数测试片筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元 菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是最常用的微生物检测项目。总数，是最常用的微生物检测项目。 菌落总数测试片含有标准的营养培养基，冷水可菌落总数测试片含有标准的营养培养基，

2、冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（唑（TTC），菌落在测试片上呈红色，这样可缩），菌落在测试片上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。短计数时间和增强计数效果。 适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定，适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定，也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。表面的菌落总数。原理筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元 样品处理：样品处理：取样品取样品25mL（g）放入含有）放入含有225mL灭灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水

3、）的取样罐或菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或或1mol/LHCl溶液调节样品匀液溶液调节样品匀液pH至至6.67.2。用。用1mL灭菌吸管吸取灭菌吸管吸取1:10样品匀液样品匀液1mL，注入含有，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成稀释液的试管内，振摇后成为为1:100的样品匀液，以此类推，做出的样品匀液，以此类推，做出1:1000等等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。操作方法筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元 接种：接种：一

4、般食品选一般食品选23个稀释度进行检测，含菌个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片（接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片（BB202）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。空白阴性对照。操作方法筑食品安

5、全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元 培养：培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过内，堆叠片数不超过12片。一般食品培养片。一般食品培养温度为温度为361，培养，培养1524h；水产品；水产品培养温度为培养温度为301，培养，培养48h。操作方法筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元表面取样方法 加加1mL灭菌磷酸缓冲液（或生理盐水）在灭菌磷酸缓冲液（或生理盐水）在测试片上，至少静置测试片上，至少静置10S，使培养基凝固；，使培养基凝固；提

6、起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。上，置培养箱内培养。筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元结果判读 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（菌落数适中（30300个）的测试片进行计数个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品，乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品中所含的细菌菌落总数。中所含的细菌菌落总数。筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元若只有一个

7、稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升(或克或克)样品中菌落总数结果。样品中菌落总数结果。若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算计算:式中：式中：N样品中菌落数；样品中菌落数；C测试片上测试片上(含适宜范围菌落数的测试片含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；菌落数之和；n1第一个适宜稀释度测试片数；第一个适宜稀释度测试片数；n2第二

8、个适宜稀释度测试片数；第二个适宜稀释度测试片数；d稀释因子稀释因子(第一稀释度第一稀释度)。计数原则筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元计数原则 示例：示例： 上述数据经上述数据经“四舍五入四舍五入”后，表示后，表示25000或或2.5104。筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元计数原则 若所有的稀释度菌落总数均大于若所有的稀释度菌落总数均大于300CFU，则对，则对稀释度最高的测试片进行计数，其他测试片可记稀释度最高的测试片进行计数，其他测试片可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。倍数

9、计算。 若所有的稀释度菌落总数均小于若所有的稀释度菌落总数均小于30CFU，则应按，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。乘以最低稀释倍数计算。 若所有稀释度的平均菌落数均不在若所有稀释度的平均菌落数均不在30CFU300CFU之间，其中一部分小于之间，其中一部分小于30CFU或大于或大于300CFU，则以最接近，则以最接近30CFU或或300CFU的平均菌的平均菌落数乘以稀释倍数计算。落数乘以稀释倍数计算。筑

10、食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元报告方式 菌落总数在菌落总数在100CFU以内时，按以内时，按“四舍五入四舍五入”原原则修约，采用两位有效数字报告。则修约，采用两位有效数字报告。 大于或等于大于或等于100CFU时，第三位数字采用时，第三位数字采用“四舍四舍五入五入”原则修约后，取前两位数字，后面的原则修约后，取前两位数字，后面的0代代替位数，也可用替位数，也可用10的指数形式来表示，按的指数形式来表示，按“四舍四舍五入五入”原则修约后，采用两位有效数字。原则修约后，采用两位有效数字。 若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不

11、可计。计。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 称重取样以称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。为单位报告。筑食品安全长城，保中华民族真元筑食品安全长城，保中华民族真元符合率 菌落总数测试片检测结果与传统平板计数菌落总数测试片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达琼脂平板法符合率可达80以上，山东省以上，山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明，疾病预防控制中心进行的验证试验表明，24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的计数测试片上菌落数为平板菌落数的87。筑食品安全长城，保中华民族真元筑食

12、品安全长城，保中华民族真元试剂配制 缓冲液：称取缓冲液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于的磷酸二氢钾溶于500mL蒸蒸馏水中，用大约馏水中，用大约175mL的的1mol/L氢氧化钠溶液调氢氧化钠溶液调节节pH至至7.2，用蒸馏水稀释至，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰后贮存于冰箱。箱。 稀释液：取贮存液稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，分装于适宜容器中，121高压灭菌高压灭菌15分钟，或者放入消毒碗柜中消毒。分钟，或者放入消毒碗柜中消毒。 生理盐水的配制与灭菌：取生理盐水的配制与灭菌：取8.5g分析纯氯化钠（分析纯氯化钠（NaCl）溶解到）溶解到1000mL蒸馏水或纯