饲料产品中转基因成分的分析及问题研究

1、    饲料产品中转基因成分的分析及问题研究    王春华摘要：随着农业科技的不断发展，转基因饲料也在渐进性地发展与普及。近年来有关转基因产品的探讨越来越重视，因此我们有必要对饲料产品中转基因成分及问题进行研究分析。关键词：饲料产品：转基因;分析;问题1 当前转基因产品的标志管理现状每个国家对于饲料转基因成分有着不同的规定及管理，其中主要包含自愿标识以及强制性标识两个种类。在1997年，欧盟首先实施了转基因产品的标识制度，之后在50多个国家和地区中先后颁布了标识制度。除了美国、加拿大以及阿根廷等国家以外，很多国家都应用了强制性标识的制度，其阈值范围从欧盟

2、0.9%直到日本的5%。我国于2002年发表了对于转基因生物进行管理的办法，第一批被列入到标志管理的目录有大豆类产品，如种子、油和豆粉等：玉米类产品如玉米粉和油等;还有油菜籽、棉花类产品等。面对众多的转基因产品，行之有效的检测方式以及精准的定量描述是转基因标志制度的基础。因为对其进行测定方式的依据存在不同的基准物质，并且饲料加工会包含很多的转基因作物等，对转基因成分含量进行检测和相应的表示方式会存在一定的差异，即使是相同的数值也很有可能表示不同的含义，因此直接给出相应标志的工作存在一定的困难。2饲料中转基因成分的定性检测方法2.1生物分析法生物分析法为利用转入目的基因进行表达的特殊性状，对转基

3、因产品进行鉴定的一种方法。例如：含有-胡萝卜素的转基因水稻、甜度高但是糖份含量低的玉米。利用这样的形式，可以有效实现对原料进行第一步筛选，但因为很多转基因当中表达出的特殊性，如抗病虫害等在作物生长中的体现，不能用在实验室的检测当中。2.2 dna检测法2.2.1核酸的提取纯化。对核酸进行提取的目的是为后续提供合理的dna分析。dna的质量涵盖对dna分子平均长度、化学纯度以及dna序列、双螺旋完全性的提取等。在对dna进行提取的过程中，要对能够抑制pcr反应蛋白质、纤维素等进行弃除。依照gb/t19495.3-2004可以得出，对不同dna进行提纯的方式.可以应用在不同的样品中。当前，可以提取

4、在饲料当中进行应用的转基因成分的核算，有很多种方式，其中有三氯甲烷法、聚乙烯吡咯烷酮法、硅土法及胍-三氯甲烷法、ctab法。并且对于这几种方式的应用，已经在对饲料样品的检验中取得了成功。在这几种方法中，对于ctab的应用，更多的应用在了对饲料样品的dna提取中，并且成功应用在了提取玉米、菜籽粕以及大豆蛋白的dna中。但是，为了能够更好的保障提取的dna质量，对各个样品进行提取的具体方式，要依照不同作物的成分特征，结合dna的具体提取原理和以往的经验对其进行合理的改进，并将各种方式进行比较和对比，挑选出最佳的提取方法。例如：如果提取的样品含有很高的盐分，可用清水清洗几遍：鱼骨粉等要先将杂质去除，

5、之后在应用ctab法对样品进行制备。2.2.2定性pcr法。该项方式的原理为，利用筛选样品目标的核算序列以及定性分析异性检测，在对照合理以及检测下限合适的状况下，实施定性检测的结果要对样品是否为转基因产品进行明确的判断。此种检测方式包括扩增目标序列、检测及扩增片段特异性的确证。这种检测的方式具有极强的灵敏性，并且简便快速，是对gmf进行检测的最佳方式，但该项方式的应用容易产生假阳性的结果。所以，一般需要通过其它的方式进行验证，如应用pcr的产物与pcr凝胶回收的产物，利用凝胶电池实施检测。借助对限制性内切酶切的具体分析，以及序列和杂交的分析等方式实施确认。在应用实时荧光pcr的方式实施检测的过

6、程中，要对扩增和检测一同进行。使用以及存在的问题有：利用pcr法定性来检测饲料当中的转基因成分是当前应用最广泛的鉴定形式，并且该种方式在对转基因大豆、小麦和玉米的检测研究中获得了非常大的成功。我国分别制定了ny/t675-2003转基因植物及其产品检测大豆定性pcr方法标准，可应用在转基因抗草甘膦大豆以及相关的产品中、转基因抗草丁膦大豆和相关的产品等，涵盖大豆的种子、豆粕和大豆粉等相关制品的转基因成分定性pcr的具体检测：sn/t 1196-2003玉米种转基因成分定性pcr检测方法标准，可应用在对玉米mon810、bt11、event176、t14/t25、cbh351、ga21品系对其转基

7、因成分的相应检测：sn/t 1943-2007小麦中转基因成分pcr和实时荧光pcr定性检测方法标准，可以应用在小麦中转基因成分pcp的定性检测以及实时荧光pcr的定性检测中。对于饲料而言，转基因成分当中的外源基因通常包括三个关键的构成部分：调控、目的和标记基因。在这三个关键的构成部分中，调控基因包含启动子以及终止子等。根据选择用作模版不同的外源基因，pcr定性检测实验可分为不同的两类。如果应用靶序列扩增的基因（包括启动子和外源基因）该实验会具有良好的专一性。如果应用的dna序列在植物当中存在较多的序列，如35s启动子等，则该实验并不具有专一性，该项扩增可以检测不同类的多种转基因饲料，检测的最

8、终结果可能会出现假阴性或者假阳性，所以需要应用其它的方式验证。当前，对于该项检测方式的应用虽然比较广泛，但是还存在一些问题。首先，对于该种方式需要应用的试剂和设备等需要支付高额的费用，检测的方式非常繁杂，会消耗大量的时间和精力，需要很高的操作要求等。其次，该项方式在一定程度上会出现假阳性以及假阴性的结果。所以，对于多个基因成分进行检测时需要对转基因成分进行单独鉴定，其工作量会非常大。3饲料中转基因成分的定量检测方法应用荧光定量pcr法。对于该项检测方式的应用，可对pcr的過程进行实时监测，以便得到定量以及定性的结果，可在闭管的环境下操作，整个检测过程只需要很短的时间，操作非常方便，比较容易进行推广。所以，在实际的检测中，该项检测方式成为了重要的检测技术。该项技术的应用原理为：在定量检测pcr的体系反应中，除了对特异的引物进行应用以外，还提升了与模版dna匹配、两端含有荧光基团标志的探针。pcr酶在经历了一次循环之后，会构成全新的链数，并与释放出来的荧光基团数呈现出彼此对应的关系。当荧光信号的实际强度大于规定的阈值时，便会检测出