数据完整性指南

1、河北威远动物药业 GMP认证文件河北威远动物药业有限公司GMP管理文件题 目U3000变色龙工作站的操作规程编 码：WD.ZL.GL.第 1 页共 7 页制 定审核复审批准日 期日期日期日期制定部门质量部颁发数量2份生效日期分发单位质量部1、目 的：对U3000所用的变色龙软件进行详细的介绍，确保软件的正确使用，功能的有效运用。2、适用范围：适用于需要应用软件进行质量检验、监督检查和维护的人员。3、责 任 者：3.1 QC负责工作站的正常使用；3.2 QC主管负责检查QC的日常使用；3.3 QA负责QC工作站正确使用的监督和数据的检查；3.4 IT主要负责工作站权限的分配。4、正 文：4.1软

2、件的介绍4.1.1Chromeleon 7(变色龙)：功能非常强大的色谱工作站。4.1.2Windows风格：右键功能，鼠标操作，所有的文件和名称均无字符长度限制。数据库管理：将一批样品作为一个文件，自动统计和比较。4.1.3内置电子表格，数据可以快捷的批量导出成EXCEL、PDF文件。资源管理器树状目录浏览：和传统的手动输入文件名来查找文件不同。4.1.4个性化界面和报告模板：用户可自己定义打印报告格式和计算公式（与EXCEL兼容）。4.1.5支持和控制多厂家的仪器（气相、液相、质谱等）4.2配置Chromeleon74.2.1配置仪器模块的驱动程序自动安装之后，请安装和配置Chromele

3、on中的模块：通过右击Chromeleon托盘图标并选择“启动Chromeleon仪器控制器”。请等待直到仪器控制服务运行空闲。启动Chromeleon仪器配置管理器：点击显示器右下角Chromeleon托盘图标并选择“configure instruments”。如果服务器窗口已打开，您现在可以关闭。请注意，关闭服务器并没有停止仪器控制服务。在服务器窗口中会看到一台小电脑，单击电脑名称旁边的加号，会显示当前的配置，如果您的计算机上有备份的配置文件，则不需要重新配置，直接点击File下拉菜单中的Import,直接导入使用即可。选择分配模块的仪器，或新建仪器。要新建仪器，在Edit菜单下，单击A

4、dd instrument,会出现新建仪器窗口，填写仪器名称，例如U3000。题 目U3000变色龙工作站的操作规程编 码：WD.ZL.GL.第 2 页共 7 页4.2.2配置模块U3000的模块为LPG-3400SD泵、WPS-3000自动进样器、TCC-3x00（RS）柱温箱、VWD-3x00（RS）检测器四部分。4.2.2.1以低压四元分析性泵LPG-3400SD为例。在已经添加的仪器前会有个小闹表，右击小闹表选择Add module,会弹出添加模块到仪器的窗口，在生产商列表中，单击Dionex,在模块列表中单击模块，选择LPG-3400SD泵，仪器的系列号将自动添加进模块地址下的方框中

5、，设备的名称一般为默认值：Pump。建议在压力信号前打对勾，以方便采集压力信号图，流速默认值为：0-10ml/min，排泵头气泡时压力上下限可根据实际需要设定，压力下线设定默认值为0。设置完成后点下一步进行通道的设置，在A/B/C/D通道设置流动相、甲醇或水。下一步触发信号不用动直接下一步再点击完成键，即完成泵的设置。（顺便可以了解变色龙软件还可以控制其它公司的分析类仪器）。自动进样器、柱温箱、检测器同上述添加方法。4.2.2.2保存和备份配置文件在File菜单上，单击保存或另存为仪器配置。为防止软件配置文件及参数被修改且无法还原，可将配置文件备份。在每个配置页面上，请检查设置是否正确，并定义

6、所需的附加设置。需要帮助请按F1。4.3软件的使用完成上述步骤后Chromeleon7工作软件可以正式使用了。双击桌面Chromeleon7图标，进入控制面板，软件会自动根据配置文件的设置生成相应的面板，包括Instruments、Data、eWorks三个板块。Instruments包括8个部分分别为Home、Pump Module 、Sampler 、Column Oven、UV、Audit 、Startup 、Queue 。4.3.1 Home 4.3.1.1点击Home左边会出现U3000的示意图,在Pump、Sampler、Oven、UV处都会显示一个小方块，分别打上对勾后，工作站与

7、仪器连接。右上方可常看基线，点击左上角的“Monitor Baseline”可选择UV、泵压、柱温的显示信号。右下方为仪器的审核记录，记录仪器的每一步操作和改动，包括仪器出现的故障信息。4.3.2 Pump Module4.3.2.1基本的按键连接：软件与泵的连接或断开。流速/压力：设定泵的流速，压力会自动在线监测。淋洗液：设定A/B/C/D各通道的比例，通过比例阀调节。马达：泵和比例阀的开关。题 目U3000变色龙工作站的操作规程编 码：WD.ZL.GL.第 3 页共 7 页4.3.2.2冲洗快速清洗功能键（Purge）每天或每次使用仪器分析样品前，需要清洗泵头或管路中残留的气泡或溶剂。使用

8、此键前需要先向上掀开泵头前面板，然后拧松快速清洗阀（反时针3圈半）。然后在软件中按Purge键，泵将以6.0ml/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止，若想手动停止，只要再按冲洗键，将停止清洗。注意：若长时间未使用仪器，或该通道更换的另外的流动相，清洗时间不宜太短，一般以5分钟为宜。否则，有残留气泡或溶剂在真空脱气机内，易造成流速不稳，所分析成分的保留时间不稳定而影响正常的分析。要使用的每个通道A/B/C/D都需要设100%单独快速清洗来排气泡，不要通过分别设定每个通道的比例让多通道同时快速清洗，这样容易损坏比例阀。清洗有缓冲盐的那个通道前后，用（甲醇+水=1+9）清洗管路

9、和泵头。清洗完毕先停泵，再拧紧快速清洗阀。切记：不要在泵未停止清洗前拧紧快速清洗阀。缓冲盐直接与纯的有机相（甲醇、乙腈等）混合堵塞比例阀。4.3.3 Sampler连接：软件与进样器的连接断开命令。4.3.3.1位置三个扇形的区域分别为R、G、B，分别代表红色、绿色、和蓝色区域。每个区可放置一个标准的分析型孔板和一个大号的孔板。以R区为例，使用该孔板时，样品瓶的位置可定义为RA1-RA8、RB1-RB8、RC1-RC8、RD1-RD8、RE1-RE8，共40个样品瓶位置。大进样量用大号孔板（10ml），以R区为例，使用该孔板时样品瓶的位置可定义为R1、R2、R3、R4、R5，共,5个样品瓶位置

10、。注意：放置样品瓶的时候切记不要用手扳动样品盘来回转动，一定要使用工作站来操作，这样很容易造成进样针偏离中心点。4.3.3.2体积分析型的进样器标准注射器为100l，最大进样量不能超过100l。若需要进更大体积，需更换注射器和相应的定量环。4.3.3.3进样手动进样，此时软件不会自动触发采集信号，需人工点击工具栏中“采集开始/停止”图表，无法完全同步。故平时很少使用此键。4.3.3.4停止进样手动停止进样4.3.3.5启动泵带有在线脱气机，则自动进样器清洗液使用一个流动相（以水和有机溶剂混合的不含盐的溶液）作为清洗液，在泵的比例阀前使用一个三通相连，自动进样器使用前建议对清洗液进行超声脱气。虽

11、然泵带有在线脱气，但建议流动相在使用前进行超声脱气。题 目U3000变色龙工作站的操作规程编 码：WD.ZL.GL.第 4 页共 7 页清洗液可以使用水和有机溶剂互溶的不含盐的溶液，禁止使用缓冲盐或与流动相不兼容的溶剂。但梯度分析时建议清洗完后再以分析样品时所用的起始步比例流动相（但不含盐）作为清洗液再冲洗一下。使用起始步流动相作为清洗液，这样不会影响梯度分析尤其是第一针样品的分析。自动进样器的清洗分三个部分，一般在每天或每次使用自动进样器前需先进行如下三个步骤排除自动进样器的气泡（1）满注射器启动此命令，用于排除注射器中残留的气泡。注射器中若有气泡，易造成进样量的不准确，进而影响含量测定。默

12、认清洗体积为注射器的满量程，若一次仍无法完全排除注射器的气泡，可执行多次清洗1 洗缓冲环启动此命令，用于排除定量缓冲环中的气泡。缓冲环有气泡，导致进样体积不准确。2 针外部启动此命令，用于清洗进样器外表面的残留，避免造成交叉污染或影响含量测定。4.3.3.6盘控制移动盘到前面：按此键可将该分区自动转到前外部位。但以该分区为中心朝外。移动瓶到前面：按此键可将该分区自动转到前外部位。但以该瓶为中心朝外4.3.4柱温箱连接：软件与柱温箱的连接。 状态：显示柱温箱的状态。温度控制：温度是否达到。4.3.5UV建议在开泵稳定5分钟以后再开紫外检测器的灯。因为开灯后，检测器就会自动自检和波长校正

13、。仪器若长期未使用，则检测器中可能有残留的气泡存在，这样，紫外光透过率就会降低，检测到的灯的能量也很不稳定，造成漂移和噪音值较大，自检就无法通过。所以，需开泵稳定几分种，赶走流通池中的气泡之后再开检测器较好。 4.3.6Audit 、Startup我们不需要操作。4.3.7Queue在这里我们可以挂一个或多个批处理，仪器会自动运行完一个再接着运行另外一个或多个，最后智能关机。4.3.8 Data点击Data即可查看所有的数据。4.3.8.1处理数据4.3.8.1.1双点击数据中的名称，出现数据处理主页窗口，点击“校准和处理方法”，点击“Detection”，点击“运行cobar向导”

14、，弹出支行cobar向导窗口，拖动图标选择需积分区域，点击“下一步”，跳过基线噪声范围，点击“下一步”；设置cobar平滑宽度，点“下一步”，进入最小峰面积窗口，点击可忽略的杂质峰，设置适当的最小峰面积，点击“下一步”，点击完成，保存更改。题 目U3000变色龙工作站的操作规程编 码：WD.ZL.GL.第 5 页共 7 页4.3.8.2扣除空白峰: 点击“校准和处理方法”,点击“Chromatogram Subtraction”,点击“browse”就会弹出窗口，可选择要扣除的某针空白，点击确定后自动扣除。4.3.8.3选择积分方式：在“校准和处理方法”界面，单击图谱，点击“Processin

15、g”点击“Smart peaks”,然后用鼠标在图上选择图谱的积分范围，会自动弹出“show dragged rectangle”窗口，选择积分方式包括original、Drop porpendicular、valley to valley、Exponentially、Skimmed riders、Tangential at both ends rider skimming.4.4U3000高效液相色谱仪的操作4.4.1准备工作流动相的准备：按规定制备后，先在溶剂过滤瓶进行过滤，然后进行超声脱气处理至瓶中无气泡产生。（使用0.22um滤膜抽滤后备用，分清滤膜的有机相和水相。） 样品的

16、制备：按标准规定，用流动相配置相同浓度的样品备用。将配好的甲醇水溶液及流动相等溶剂分别按规定装入ABCD瓶中4.4.2开机4.4.2.1接通电源，依次打开主机（不分先后顺序），计算机。4.4.2.2双击桌面的“chromeleon7”图标，启动仪器控制器，使工作站和仪器处于连接状态。打开泵,先设置泵流速为小流速再缓慢提升流速至规定的流速，如没有规定则为1.0ml/min.点击紫外灯命令，打开紫外灯（图标为红色，框内打对号），紫外灯需等待约3分钟才能点亮4.4.3脱气4.4.3.1现将冲洗阀逆时针旋松3圈半。4.4.3.2将需要冲洗的通道设置为100%后按回车键4.4.3.3点击该界面冲洗，弹出

17、一个忽略警告窗口后，再次确认冲洗阀是否松开，ABCD管路中是否有气泡，然后点击忽略警告执行，大约30s后机器出现“咔咔”响声，开始5分钟的倒计时冲洗.4.4.3.4冲洗结束后，更换冲洗通道，重复4.4.3.3的操作（切记修改参数后，按回车键！）。4.4.3.5结束后，切记旋紧冲洗阀4.4.4设置波长按规定要求设置波长，并按回车键。4.4.5温度设置按实验要求设置柱温箱温度，并按回车键。题 目U3000变色龙工作站的操作规程编 码：WD.ZL.GL.第 6 页共 7 页4.4.6创建仪器方法点击“创建”，选择仪器方法，进入系统常规设置窗口，设定运行时间，点击“下一步”，即进入Pump常规设置窗口

18、，设置溶剂名称A、B、C、D，压力限值，设置下限为0，上限为300bar，再点击“下一步”，即进入流速梯度窗口，先删除平衡阶段，设置流速B、C的比例，点击“下一步”，即进入Sample（WPS-3000）常规设置窗口，设置吸取速度一般为2.0ul/S，吸取延迟一般设置为3S，取样高度一般为2mm，样品冲洗一般设置为before，（如果进样量为大于10ul，可以选both，进样量为0.1ul必须选before），点击“下一步”；跳过进样模式，进入columnover（TCC-3000）常规设置界面，设置检测温度，上下限波动范围为±5；点击“下一步”，进入UV（VWD-3x00）通道，设

19、置检测波长，点击“下一步”，跳过UV（VWD-3x00）时间表，点击“下一步”，点击完成，再点击“保存更改”，弹出保存仪器方法窗口，双击“仪器数据”，再双击“仪器方法”，输入“对象名称”，点击“保存。4.4.7创建处理方法点击“创建”，选择处理方法，点击二定量，输入名称，点击“完成”，结束此操作，关闭该窗口。4.4.8 创建报告模板点击“创建”，选择报告，弹出创建报告模板，选择“常规”中第一个模板，点击“下一步”，输入报告模板名称，点击“完成”。4.4.9放置样品将处理好的样品依次放入样品盘中，并记录其位置及名称。4.4.10创建序列点击“创建”，选择序列，弹出“新建序列向导”窗口，点击“U-3000”，点击“下一步”，输入“进样名称，样品数，进样次数进样开始位置，进样量”的信息，点击“下一步”，进入方法和报告窗口，点击“浏览”选择仪器方法，点击“浏览”，选择处理方法，点击“浏览”选择报告模式，点击“下一步”，点击“完成”，弹出“保存序列窗口”，双击样品序列，输入对象名称，点击“保存”。4.4.11监视基线点击“仪器”，点击“监视基线”，大约30min后，基线平稳，准备进样4.4.12数据处理序列运行结束后按照设定的处理方法进行