中药防治硫酸镍致肝肾损伤的实验研究

1、中药防治硫酸镍致肝肾损伤的实验研究    文献报道，硫酸镍直接损伤肝肾组织，并使天冬氨酸转氨酶(AST)，丙氨酸转氨酶(ALT)等酶活力增加15。本实验观察了扶正解毒汤(FJD)对硫酸镍致肝肾损伤的防治作用，现报告如下。        1材料与方法    1.1材料FJD由红芪、当归、丹参、连翘、莪术等组成。按比例配方，制成水煎剂，过滤，浓缩成含生药4 g/mL的溶液，高温高压消毒灭菌，密封，4以下储存备用。硫酸镍NiSO4为分析纯，西

2、安化学试剂厂，批号：920014。AST，ALT，AKP及BUN试剂盒：均由南京建成生物工程研究所提供，批号：980112。754型紫外分光光度计，上海第三分析仪器厂。Wistar大鼠70只，雌雄各半，体重(180±20)g，由兰州医学院实验动物中心提供。    1.2方法动物称重后随机分为7组，雌雄分笼饲养，自由摄取饲料及饮水。    生理盐水(NS)组：与各防治组平行予以NS腹腔注射及灌胃，并同时处死，作为空白对照。NiSO4组：腹腔注射NiSO42.5 mg·kg-1.d-1，连续7 d，

3、以后隔日注射1次，直至处死；以生理盐水0.5 mL/只灌胃，1次/d，作为实验对照组。治疗大、中、小剂量组(FJZ大、FJZ中、FJZ小)：染毒与NiSO4组相同，染毒第2周起分别以FJD20、10、5 g·kg-1.d-1灌胃治疗，1次/d。预防大、小剂量组(FJY大、FJY小)：分别以FJD 20、10g·kg+-1·d-1灌胃，1次/d。7 d后腹腔注射NiSO4，方法同NiSO4组。各组灌胃第4周末，摘除眼球采血，测定血清AST、ALT、AKP活力及BUN含量。断头处死，迅速摘取肝肾组织，以体积分数为10%的甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜检查

4、。    2结果    2.1NiSO4对大鼠肝肾功能的影响从表1可见，NiSO4组血清AST、ALT、AKP活力及BUN含量比NS组明显升高(P0.001)。    2.2FJD对NiSO4致大鼠肝肾功能损伤的防治作用从表1可见，FJD防治4周后，各组AST、ALT、AKP活力及BUN含量较NiSO4组均明显降低(P0.010.001)，FJZ大、FJY大组与NS组差异已无显著性(P0.05)。    2.3肝脏病理学检查结果NiSO

5、4组间质充血较重，肝窦内皮细胞核浓缩，部分细胞核核膜着色不良，趋向于核溶解消失，部分肝细胞胞浆中出现嗜碱性物质，汇管区炎性细胞浸润。NS及FJY大组未见明显异常改变。FJY小组肝窦内皮细胞轻度肿胀，部分肝细胞胞浆中出现嗜碱性物质。FJD治疗各组较NiSO4组间质充血明显减轻，炎性细胞浸润减少，仍可见肝窦内皮细胞核浓缩，肝细胞胞浆中有嗜碱性物质。说明预防组疗效优于治疗组。    表1扶正解毒汤对NiSO4致大鼠肝肾功异常的防治作用(±s)         &

6、#160;      组别    剂量        (g/kg)    动物数    AST        (kat/L)    ALT       

7、; (kat/L)    AKP        (kat/L)    BUN        (mmoL/L)        NS    (0.5ml/L)    10  

8、  0.644 3±0.071 6    0.584 5±0.082 7    5.094 2±1.143 4    51.82±8.74        NiSO4    0.002 5    10    1.086 0

9、±0.088 9    1.746 4±0.193 9    8.749 2±0.550 4    221.14±24.06        治疗组    20    10    0.693 3±0.110 7  

10、;  0.658 8±0.133 9    6.390 9±0.851 0    57.73±5.80            10    10    0.693 3±0.087 0    0.938 8±0.1

11、15 1    6.466 0±0.839 2    66.52±13.39            5    10    0.910 6±0.087 3    1.261 0±0.148 4    7

12、.828 3±0.767 0    104.06±10.87        预防组    20    10    0.638 9±0.077 9    0.654 8±0.129 7    7.506 4±0.808 4 

13、;   52.94±12.91            10    10    0.696 0±0.042 3    0.870 2±0.115 4    7.596 3±1.126 8    63.13

14、7;14.43    与NiSO4组比较，P0.01，*P0.0012.4肾脏病理学检查结果NiSO4组肾间质严重淤血，肾小管上皮细胞颗粒变性，部分水肿坏死，脱落于管腔内，部分近曲小管上皮细胞内充满嗜碱性均质状物，集合管内有散在的蛋白管型。预防组仅见肾小管上皮细胞轻度颗粒变性。治疗组轻度肾间质淤血，肾小管轻度颗粒变性，病变程度依小、中、大剂量依次减轻。    3讨论    本实验结果表明，NiSO4可损伤大鼠肝肾功能，并引起肝肾组织的病理性改变。镍致肝肾损伤的机制为：(1)N

15、i+2+导致细胞内钙稳态失调，引起肝肾细胞损伤1，2。钙稳态的维持主要依赖于钙调节系统，包括CaM,Na+-K+-ATP酶和Ca+2+-ATP酶，以及钙库的调节作用6，7。Cheung及Chao等认为，Ni+2+能替代Ca+2+与CaM相互作用，高浓度的Ni+2+可抑制CaM及其依赖酶活力，导致细胞内钙超载，引起细胞损伤或死亡。实验证实2，NiSO4可抑制Na+-K+-ATP酶和Ca+2+-ATP酶活力，导致钙调节系统功能障碍。(2)肝肾组织中微量元素的分布失调。我们的实验证实，NiSO4染毒后，肝肾中的Ni+2+含量明显升高，而Zn+2+、Mg+2+、Fe+2+、Mn+2+等含量明显下降。高

16、浓度的Ni+2+可直接损伤肝肾组织3。Zn2+、Mg2+、Mn2+等是多种酶的重要组成成分和致活因子8，9，其缺乏可影响相关酶的活力而致组织损伤。(3)Ni2+导致细胞脂质过氧化作用增强，引起细胞损伤3。镍能直接通过Haber|Weiss反应催化羟基自由基的生成，后者可攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，形成脂质过氧化物及新的自由基，从而引起一系列的细胞损伤。同时，镍还能引起细胞抗氧化系统功能降低，加重镍对细胞的损伤作用。    本实验结果揭示，FJD能有效防治NiSO4对肝肾的损伤作用，使AST、ALT、AKP及BUN等肝肾功能指标明显改

17、善，肝肾病理改变减轻。我们认为FJD防治NiSO4致肝肾损伤的机制如下：(1)调节肝肾组织中微量元素的含量。FJD中富含Zn2、Mg2+、Fe2+、Mn2+，而Ni2+含量甚微。FJD防治后，肝肾组织中的Ni2+含量下降，减轻了镍的直接毒性作用；其他元素基本恢复正常，从而使与其相关酶的活力恢复。(2)FJD能缓解Ni2+对钙稳态的影响。我们的实验已证实，FJD能使肝线粒体Ca2+-ATP酶，肝匀浆中CaM及肾小管细胞膜Na+-K-ATP酶及Ca2+-ATP酶的活力得到恢复，从而使钙调节系统的功能恢复。(3)FJD可减弱Ni2+导致的脂质过氧化增强作用，提高机体清除自由基及抗氧化的能力。我们的实

18、验已证实，FJD能使NiSO4导致上升的血清MDA含量恢复正常，使SOD活性及GSH含量升高。说明FJD具有对抗Ni2+导致的脂质过氧化作用，增强机体清除自由基及抗氧化的能力，从而减轻自由基对细胞膜的攻击及氧化损伤作用。    参考文献    1文允镒，张志明，胡蓓，等.钙与钙调素.北京：化学工业出版社，1989.106-108.    2朱玉真，李锋.硫酸镍对钠泵钙泵活性的影响.中国公共卫生学报.1996，15：347-348.    3朱玉真，李锋.镍致大鼠肝损伤与脂质过氧化关系的研究.中国公共卫生学报，1997，16：112-114.    4程婉珍.镍的生物学作用及毒性(综述).石家庄医学专科学校学报，1989，3：32-35.    5顾祖维，王NFDA3兰.劳动卫生学进展.北京：人民卫生出版社，1987，32-33.