穿心莲内酯对大鼠心肌肥厚及抗氧化作用的影响

1、穿心莲内酯对大鼠心肌肥厚及抗氧化作用的影响                   作者：钟富有， 李良东， 黄志华， 熊丽娇，曾靖  【摘要】   目的 观察穿心莲内酯对异丙肾上腺素（ISO）所致大鼠心肌肥厚的保护作用并探讨其对抗氧化作用的影响。方法采用ISO 1 mg?kg-1?d-1，背部皮下注射，连续10 d，建立大鼠心肌肥厚模型。造模第2天开始给大鼠皮下注射不同浓度的穿心莲内酯、溶剂或NS，

2、连续14 d。取心脏称重后 计算 全心重量指数及左心室重量参数；取血，分离血清，测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的活性及丙二醛（MDA）的含量。结果大鼠心肌肥厚模型组心脏重量参数及左心室重量指数明显提高，血清LDH、CK活性及MDA 含量升高，SOD活性降低；与模型组相比，穿心莲内酯 治疗 组左心室重量指数及心脏重量参数下降，血清SOD活性显著升高、MDA 含量降低、LDH及CK活性降低。结论穿心莲内酯对ISO所致大鼠心肌肥厚具有保护作用，其作用机制与提高大鼠的抗氧化能力有关。 【关键词】   穿心莲内酯； 心肌肥厚； 抗氧化作用； 大鼠

3、60;         穿心莲内酯(Andrographolide，AP)为爵床科植物穿心莲的有效成分之一，具有抗菌消炎，止咳平喘等作用，临床上用于治疗多种感染性疾病。有研究表明AP具有免疫调节、抗病毒、抗肿瘤、抗糖尿病、降血压、抑制血小板聚集及抗血栓形成、对心肌及脑缺血再灌注损伤保护等作用110。本实验旨在通过ISO皮下给药制作大鼠心肌肥厚模型，观察AP对心肌肥厚的保护作用，并探讨其对大鼠抗氧化能力的影响。 1  材料与仪器 1.1  药品和试剂穿心莲内酯（由沈阳药科大学提供），实验时用DMS

4、O溶解成高浓度后，再用生理盐水稀释成所需浓度；盐酸异丙肾上腺素注射针剂（上海禾丰制药有限公司，批号：H31021344），超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）及丙二醛（MDA）测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2  仪器722N可见光分光光度计（上海精密 科学 仪器有限公司）；赛多利斯BS224S型 电子 天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，7600-020+ISE全自动生化分析仪(日本日立)。1.3  动物SD大鼠，雄性，体质量200250 g，购自江西中医学院动物合格证号：SCXK（赣）2006-0001。 2  方法 2

5、.1  分组及给药雄性SD大鼠30只，随机分成5组，分别为正常对照组、心肌肥厚模型组、溶剂对照组、AP低剂量（0.1 mmol?kg-1）及高剂量组（0.3 mmol?kg-1）。正常对照组给予皮下注射生理盐水，其余各组背部皮下注射ISO 1mg?kg-1?d-1，连续10 d，制作心肌肥厚模型。于造模后第2天开始各组分别皮下注射等体积的NS（模型组）、DMSO（溶剂对照组）、AP 0.1 mmol?kg-1（AP低剂量组）及0.3 mmol?kg-1（AP高剂量组），1次/d，连续14 d。2.2  心脏重量指数和左心室重量参数的测定末次给药后禁食12 h，称重后麻醉断头

6、取血，取出心脏，去除结缔组织，用生理盐水洗净，滤纸吸干后称全心重量，剪除心房和右心室，称左心室重量，计算心脏重量指数和左心室重量参数。心脏重量参数=全心重(mg)体质量(g)； 左心室重量指数(LHWWBW)=左心室重(mg)体质量(g)。2.3  血清LDH、CK、SOD活性及MDA含量测定大鼠断头取血，于4，2 000 r/min，离心10 min，分离血清，严格按试剂盒说明，测定血清LDH、CK、SOD活性及MDA含量。2.4  统计学分析实验数据采用Graphpad prism 4.0软件进行单因素方差分析,结果以柱状图表示，P0.05认为有统计学意义。 3

7、0; 结果 3.1  AP对心肌肥厚大鼠心脏重量指数和左心室重量参数的影响心肌肥厚模型组及溶剂对照组心脏重量指数及左心室重量参数较正常对照组明显增大(P<0.001)。AP低剂量组与心肌肥厚模型组比较心脏重量指数及左心室重量参数显著下降(P<0.01)（见表1）。提示AP有保护大鼠心肌肥厚的作用。表1  AP对心肌肥厚大鼠心脏重量指数及左心室重量参数的影响(略)3.2  AP对心肌肥厚大鼠血清LDH及CK活性的影响如表2所示，与正常对照组比较，心肌肥厚模型组及溶剂对照组血清LDH（P<0.05）及CK（P<0.05）活性均升高；给予高剂量及

8、低剂量AP后，血清LDH（P<0.05）及CK（P<0.001，P<0.05）均降低，但未发现有剂量依赖效应。表2  AP对心肌肥厚大鼠血清LDH及CK活性的影响(略)3.3  AP对心肌肥厚大鼠血清MDA含量及SOD活性的影响与正常对照组比较，心肌肥厚模型组血清MDA含量明显升高(P<0.01)，SOD活性明显降低(P<0.05)。给予高剂量及低剂量AP治疗后，血清MDA明显下降（P<0.05）、SOD活性显著升高（P<0.05）但无剂量依赖性（见表3）。表3  AP对心肌肥厚大鼠血清MDA含量及SOD活性的影响(略)

9、4  讨论     心肌肥厚特别是左室肥厚是导致中风、心肌梗塞、心律失常、猝死、心绞痛、心力衰竭和肾衰竭的主要危险因素。    本实验研究了AP对ISO所致大鼠心肌肥厚的保护作用，结果表明AP能有效减轻ISO所致大鼠心肌肥厚。异丙肾上腺素为肾上腺素受体激动药，对受体有很强的激动作用，可加快心率、加速传导，心肌耗氧量明显增加，环磷酸腺苷(cAMP)生成和糖原合成增加，从而促进心肌细胞总蛋白和非收缩蛋白合成，心肌细胞肥大。另外，循环和心脏局部儿茶酚胺含量增加，可引起脂质代谢异常及引起体内氧自由基（OFR）生成增加11。OFR可进

10、攻生物膜的类脂分子，引起类脂分子中多不饱和脂肪酸的脂质过氧化，从而损伤生物膜，产生大量的脂质自由基。OFR可致线粒体结构破坏和功能障碍，抑制ATP合成体系中的酶，使ATP合成减少，心肌能量缺乏，导致心肌肥厚的发生 发展 11，12。MDA为脂质过氧化的中间产物，实验中观察到，模型组血清MDA含量升高，经AP 治疗 后，血清MDA含量降低，提示AP具有抗脂质过氧化作用，从而对心肌细胞起保护作用；血清中LDH及CK活性降低，也显示心肌酶漏出减少，细胞膜的损伤减轻。    SOD是体内清除OFR的重要酶之一，本实验结果显示，大鼠心肌肥厚时SOD活性降低，而AP治疗后，S

11、OD活性明显升高。因此，AP可能通过提高SOD活性，增强心肌组织的抗氧化能力，降低脂质过氧化损伤，减弱心肌细胞的损伤与重构的病理过程，从而起着抗心肌肥厚作用。 【 参考 文献 】   1Iruretagoyena MI, Tobar JA, González PA, et a1. Andrographolide interferes with T cell activation and reduces experimental autoimmune encephalomyelitis in the mouse J.Pharmocol Exp Ther, 2005,312(1

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13、 activity and structure-activity relationships for Andrographolide analoguesJ.Bioorg Med Chem Lett，2006, 15(10): 27l05孙振华，陈志琳，徐立春，等.“莲必治”并用生物、化学疗法抑制体内肿瘤生长的实验研究J.浙江中西医结合杂志，2001，11(2)：886Rajagopal S, Kumar RA, Deevi DS, et a1Andrographolide，a potential cancer therapeutic agent isolated from Andrograph

14、is paniculataJ.J Exp Ther Oncol，2003，3(3)：1477Kligler B, Ulbricht C, Basch E , et a1Andrographis paniculata for the treatment of upper respiratory infection: a systematic review by the natural standard research collaborationJ.Explore (NY). 2006, 2(1): 258Jada SR, Matthews C, Saad MS, et a1Benzyliden

15、e derivatives of andrographolide inhibit growth of breast and colon cancer cells in vitro by inducing G(1) arrest and apoptosisJ.J Pharmacol, 2008, 155(5):641.9Yang L, Wu D, Luo K, et a1Andrographolide enhances 5-fluorouracil-induced apoptosis via caspase-8-dependent mitochondrial pathway involving p53 participation in he