6种常用抗菌中药对3株常见病原性细菌的抑菌作用检测(一)

1、6种常用抗菌中药对3株常见病原性细菌的抑菌作用检测（一）作者：薛建江 乔海霞 刘进军 季建军 张玉妥 邱景富【摘要】LI的:建立抗菌中药对临床常见病原性细菌抑菌作用的检测方法。方 法:选择6种常用抗菌中药（黄连、苦参、连翘、大黃、生地、知母），分别采 用水提法制备至质量浓度lmg/Lo应用液体稀释法测定上述中药对金黃色葡萄 球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度（MIC） o结果:建立了中药抑 菌作用的检测方法。黄连、大黄与连翘抑制细菌的作用较强，MIC值均 0. 05mg/L,其中黃连对金黃色葡萄球菌的抑菌作用最强（MIC值为 0. 00625mg/L）。结论:应用本方法可以进行中药抑

2、菌作用的检测。抗菌中药对 所试验菌种表现不同的抑菌作用。【关键词】中草药；微生物敬感性试验；抗菌药；细菌ABSTRACT Objective:To establish a method to detect the antibacterial activity of traditional Chinese medicine against pathegenic bacteria .Methods:Six varieties of traditional Chinese medicine（Coptis etc）were selected and extracted with pure water

3、to make concentrated with lmg/L Three different common pathogenic bacteria were used to determine the minimal inhibitory concentration（MIC）in vitro with liquid dilution method to the selected medicineResults:The methods were established to detect the antibacterial activity of traditional Chinese med

4、icine .Three herbs had inhibition effects on the strains of test, among which Coptis Chinesis had the strongest effect and MIC was 0. 00625g/mL to Staphylococcus aureusConclusion:The methods can serve as a reference for the antibacterial activity of traditional Chinese medicine The degree of inhibit

5、ion effect for different traditional Chinese medicine on different bacteria were differentKEY WORDS Chinese Herb, Microbial SensitivityTests, Anti Bacterial Agents, Bacteria中药儿千年来为中国人民的健康做出了重大贡献，在现代预防和控制细菌性感 染疾病中也发挥了积极作用。应用中药进行抗感染治疗具有副作用小，药物来 源广泛，价格低廉等优势（1，2） o在清热解毒抗菌类中药中开发抗菌药物具 有良好的应用前景。长期以来，对于抗菌中药

6、作用机理的较少认识限制了其在 临床中的应用。H前，尚无统一规范的中药抗菌作用评价方法。为此，本研究 拟应用抗生素最小抑菌浓度检测方法，检测6种常用抗菌中药（大黄、苦参、 连翘、黃连、生地、知母）对三种常见病原性细菌（金黄色葡萄球菌、大肠埃 希菌、铜绿假单胞菌）的抑菌作用，建立一种可以规范的中药抗菌作用检测方 法。1材料与方法1.1菌株的选择选择三种不同病原性细菌的标准株：包括金黃色葡萄球菌ATCC29213,铜绿假 单胞菌ATCC27853,大肠埃希菌ATCC29523作为受试菌株，以上菌株全部购自 中国药品生物制品检定所。1.2中药的选择选择常用的清热解毒类中药（大黄、苦参、连翘、黃连、生地

7、、知母）作为本次 研究所用药物。全部药物购自河北北方学院中医门诊部。1.3中药的提取分别将上述中药置于37 °C温箱烘干至易于研磨为止，准确称取50g中药于 250mL蒸憾水中混匀，浸泡lh,用微火加热煮沸30min,收集煎液，用无菌滤 纸过滤，继续加水250mL,同法煎制，30min后收集。将两次煎液收集合并，应 用加热的方法将药液浓缩至最终质量浓度为1 g/mL3o1.4细菌的培养与稀释将选定的实验菌株，接种普通琼脂培养基35°C孵育24h,进行菌落形态观察并 进行生化反应再次鉴定后备用。菌液浓度的配制方法为，挑取菌落用23mL无 菌生理盐水校正至0. 5麦氏比浊单位，

8、使其含菌量为1.5X108CFU/Lo1. 5 MIC的测定按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的液体稀释法测定实验菌株的 MIC值，通过琼脂平板抑菌法观察上述不同抗菌中药的MIC结果。具体应用2 倍稀释法对药物进行稀释，稀释液为Mueller-Hinton液体培养基，每种中草 药的剂量分别为0.100、0.050、0.025、0.0125、0. 00625mg/L,在每个试管中 加入1.5X108CFU/L的细菌10 PL, 35 °C培养24h,分别转种普通平板培养 基，24h后无细菌生长的试管则为MIC。所有试验均在不同日期重复3遍。2结果中药大黃、黄连和连翘对三种受

9、试菌株都具有较强的体外抗菌活性，MIC值 0. 050mg/L,其中黄连对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强，MIC值为0. 025mg/Lo而知母、生地和苦参的抑菌作用相对较弱，MIC值0. 100mg/L, 不同中药对不同细菌表现出不同的抗菌特性。见表1。2008年6月薛建江等：6 种常用抗菌中药对3株常见病原性细菌的抑菌作用检测笫3期2008年6月河北 北方学院学报（医学版）笫3期表1 6种常用抗菌中药对3株受试菌的MIC结 果3讨论抗生素的应用使人类许多严重的细菌感染性疾病得到有效控制。然而，由于抗 生素的不合理使用导致了大量耐药性细菌的出现，降低了现有抗生素的应用效 率，耐药性细菌感染严重

10、地威胁着人类的健康。研究和开发抗菌中药对解决耐 药菌株的产生和抗生素短缺问题具有重要意义，通过研究我们也看到，传统中 药对常见病原细菌具有一定的抑制作用。传统的中药抑菌实验方法存在着一些弊端，主要是培养基的使用不统一，菌液 制备不标准，接种量也很难控制。因此，将抗生素敬感试验方法引入中药抑菌 实验之中，改变了上述不足，可以将培养基、菌液浓度以及接种量进行标准 化。从而有助于该方法的推广使用。在实验中为了避免山于中药煎液的颜色影响对结果的观察，我们在不影响实验 条件与结果的前提下对MIC检测方法进行了改进。采用琼脂平板方法来观察细 菌在中药作用后是否生长。即将不同浓度中药与受试细菌作用后再分别转

11、种普 通平板培养基，通过在培养基上的生长情况来进行最小抑菌浓度的判定。实验 结果表明我们的研究方法可行。本研究结果显示，黄连、大黄与连翘抑菌作用较强。而另外三种药物的体外抑 菌作用则较弱。不同中药对不同细菌表现不同的抑菌作用，我们的研究结果与 有关报道一致（4）。在所检测药物中黃连对金黃色葡萄球菌的抑菌作用最强，LI前，金黃色葡萄球 菌耐药性问题是临床治疗中面临的一大难题。大量研究报道也指出，黄连对耐 屮氧西林的葡萄球菌具有一定的抑菌作用（5, 6）,如果能够进一步对黃连的 抑菌机理进行阐述，将有助于在金葡菌感染中尝试应用中药进行治疗。从而解 决金黃色葡萄球菌的多重耐药问题。在传统中药中进行抗菌药物的发掘，将有助于发挥传统中药在临床抗感染中的 应用，本研究所建立的中药抗菌作用检测方法为中药抗菌作用的进一步研究奠 定了基础。【参考文献】1吴整军.中医药抗感染治疗的探讨J.中华医院感染学杂志,2004, 14（11） :129612972王嵩.中草药抗细菌感染的研究J.北京中医杂志,2002, 21 （4） :249 2513陈奇主编.中药药理研究方法学M