紫外分光光度法测定石蒜鳞茎的总生物碱含量

1、紫外分光光度法测定石蒜鳞茎的总生物碱含量              作者：李亚仲， 单宇， 吴志平， 袁菊红， 夏冰、【摘要】  目的建立一种简单快速的方法来测定石蒜鳞茎总生物碱含量,为石蒜鳞茎质量控制提供依据。方法紫外分光光度法,以加兰他敏为对照品,测定波长为289 nm。结果加兰他敏在20.4102.0 g/ml范围内与吸光度值呈良好的线性关系,计算得回归方程Y=0.008 4X-0.022 7,r=0.999 9(n=5)；加样回收率为99.8%,RSD=1.

2、44%;测定结果在5h内稳定，RSD=0.64%；不同来源石蒜鳞茎的总生物碱含量差异较大，栽培石蒜鳞茎的总生物碱含量可以达到并超过野生石蒜。结论该测定方法稳定、快速、简便,测定结果良好。 【关键词】  石蒜； 总生物碱； 紫外分光光度法Determination of Total Alkaloids in Bulb of Lycoris radiate UV-spectrophotographyAbstract：ObjectiveAn effective method was established in order to determine the total alkaloids

3、from bulb of L. radiate. MethodsThe total alkaloids were extracted from the samples and tested at 289 nm.ResultsThe calibration curve of galanthamine were linear (r=0.999 9), and the recovery rate was perfect (99.8% ). The results of measurement were consistent in 5 hours. The contents of total alka

4、loids were different when the bulbs were from different populations. ConclusionThis method is simple, effective and quick and the contents of total alkaloids were different among different populations.Key words：Lycoris radiata;  Total alkaloids;  UV-spectrophotography   石蒜（Lycori

5、s radiata）为石蒜科（Amaryllidaceae）石蒜属多年生草本植物，主要分布于长江流域及西南各省。据本草纲目等记载，石蒜具有解毒、祛痰、利尿、催吐等功效，主治痈疮恶核、咽喉肿痈、水肿等。石蒜的鳞茎含有石蒜碱（Lycorin）、加兰他敏（Galanthamine）、水仙碱（Tazettine）、石蒜来宁（Lycorenine）、普洛维因（Pluviine）、石蒜胺（Lycoramine）、维他廷（Vitatine）、亥派斯特林（Hippeastrine）等十多种生物碱和重要医药成分。石蒜碱是治疗阿米巴痢疾药吐根代用品的原料，也有一定抗癌作用；加兰他敏、石蒜胺(力可拉敏)在临床上为治

6、疗小儿麻痹后遗症恢复神经功能的要药。1995年版中国药典记载，加兰他敏的氢溴酸盐为原料药和注射液已成功用于小儿麻痹后遗症、重症肌无力、肠麻痹的治疗以及手术后的催醒剂。近年来，国内外将其用于轻中度阿尔茨海默症(AD)的治疗。加兰他敏作为第2代胆碱酯酶抑制剂，因其药效持续时间长，不良反应小，服药方便，而日益受到各国研究人员及临床医师的青睐15 。   目前,国内外对石蒜的研究主要集中在石蒜生物碱的成分分析，引种栽培和临床药效的研究69。何丽一等10，11曾利用分光光度法分别对石蒜碱、氢溴酸加兰他敏进行了测定，而对石蒜鳞茎总生物碱含量的测定方法研究未见报道,石蒜鳞茎总生物碱含量的

7、测定对于研究石蒜生物碱代谢，控制石蒜质量，合理栽培、采收，提高提取率具有重要意义。本文主要目的在于建立一套稳定、快速、简便，测定结果良好的石蒜鳞茎总生物碱含量测定方法,为石蒜鳞茎品质分析提供参考。同时我们利用该方法对不同栽培方式及野生石蒜鳞茎的总生物碱含量进行了测定比较。1  器材   UV-2501PC型分光光度计(日本岛津公司);电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司); 加兰他敏对照品(中国药品生物制品检定所)；所用试剂均为国产分析纯。   取盛花期开花植株的鳞茎,切成片后于5560干燥12h，粉碎后过80目筛备用。石蒜鳞茎来源于4个不同

8、样地。分别来自于南京汤山、南京紫金山的两个野生居群及江苏省中科院植物研究所2个不同栽培样点。2  方法与结果2.1  样品供试液的制备称取石蒜鳞茎粉末（过80目筛）12.000 g,置于平底烧瓶中,加12 ml 10%NaOH溶液，静置15 min, 加50 ml醋酸乙酯（P0.900）,摇匀后放在80水浴中，保持回流。第1次回流2 h,第2次回流1 h，第3次回流1 h。将滤液合并，减压浓缩至干，用甲醇定容至25 ml，将此溶液过滤后，用移液枪精密吸取50 l入10 ml容量瓶，用甲醇定容至10 ml备用。2.2  波长扫描以甲醇为空白对照,将标准对照品溶液、样

9、品供试液和空白对照液在200700波长范围内进行扫描。结果显示前两者在(289±2) nm处有最大吸收值,且吸收峰相同，而空白对照液在289 nm处几乎没有吸收,故本实验选择289nm为测定波长。见图1。2.3  稳定性实验室温下取40.8 g/ml的对照品溶液,分别在1,2,3,4,5 h后,于289 nm处测定吸光度。结果5 h内稳定，RSD=0.64%。         2.4  标准曲线 精密称取加兰他敏对照品0.025 5 g，置于25 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,

10、摇匀,得到1 020 g/ml对照品溶液。精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml入10 ml容量瓶，补甲醇至刻度。以甲醇为空白于289 nm下测定吸光度值。以取样量为横坐标,吸光度值为纵坐标,计算得回归方程Y=0.008 4X-0.022 7,r=0.999 9(n=5),加兰他敏在20.4102 g/ml浓度范围内与吸光度值呈良好的线性关系。结果见图2。2.5  精密度实验取5份标准对照液0.5 ml,照2.4测定方法制备标准品供试液和空白对照液,在289 nm波长处测定吸光度值,RSD为0.51%,表明精密度较好。1.样品  2.对照&#

11、160; 3.甲醇图1  波长扫描图（略）图2  加兰他敏标准曲线（略）2.6  加样回收率实验用100 l移液枪取已知总生物碱含量的石蒜鳞茎样品液一式5份各50 l,置于10 ml容量瓶中,分别加入浓度为1 020 g/ml的对照品溶液0.3 ml。在每个容量瓶中分别补甲醇至刻度，摇匀后依法测定,计算其回收率，平均加样回收率为99.8%，RSD=1.44%。2.7  样品总生物碱的测定取不同来源样品,按2.1的方法制备样品供试液和空白对照液,在289 nm波长处分别测定吸光度并计算总生物碱相对含量。从表1可以看出,不同来源石蒜鳞茎的总生物碱含量不同。中

12、山植物园梅林栽培居群石蒜鳞茎总生物碱的含量最高；南京紫金山野生居群总生物碱含量最低。表1  不同居群石蒜鳞茎的总生物碱含量（略）3  讨论   紫外分光光度法是根据生物碱分子结构的不同，在紫外区某一波长处有最大吸收，其吸收度与生物碱的含量成正比的原理进行定量测定的。该法已成功运用于多种中草药总生物碱含量的测定1214。   石蒜生物碱大多溶于水、乙醇、醋酸乙酯、氯仿等。用水提取药粉易糊化；用酸性水溶液提取法提取，在后面的萃取过程中易造成加兰他敏及其他水溶性石蒜生物碱的流失。因此，本研究采用亲脂性有机溶剂提取法，提取液回收溶剂后即得总生

13、物碱，尽量减少了生物碱的流失。   从总生物碱的测定结果来看，不同的生长环境对石蒜鳞茎的总生物碱含量有较大的影响。野生居群石蒜鳞茎总生物碱含量差异较大，这可能是由于环境条件的差异导致植物能量及物质代谢的变化，进而影响生物碱代谢的变化；人工栽培居群石蒜鳞茎的总生物碱含量可以达到并超过野生居群。该结果可为石蒜鳞茎的品质分析及进一步研究合理的栽培条件提供一定的参考依据。【参考文献】  1 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草M.上海:上海科学技术出版社,1999,8:207.2 贾献慧,周铜水,郑 颖,等.石蒜科植物生物碱成分药理学研究J.中医药学刊,2001,19

14、(6):573.3 阮龙喜.石蒜科植物生物碱的一些研究进展J.药学通报,1988,23(8):453.4 洪 霞,张振馨，王鲁宁，等 加兰他敏治疗轻中度阿尔茨海默病的随机双盲对照研究J.中华神经科杂志2006,39(6): 379.5 国家药典委员会. 中国药典，部S.北京:化学工业出版社,2005:446.6 吴芳丽,李爱珍，王慧芳，等. RP-HPLC测定石蒜中加兰他敏含量J. 中国中药杂志,2005,30(7):523.7 张 露,曹福亮. 石蒜属植物栽培技术研究进展J. 江西农业大学学报 2001,23(3):375.8 马广恩. 加兰他敏治疗老年痴呆的研究概况J.药学进展,1998,22(3):1531.9 方 玲,郝素娥,叶铭龙. 紫外分光光度法测定氢澳酸加兰他敏片的含量及含量均匀度J. 上海医药, 1998,19(9):35.10 何丽一,陈阑英.石蒜碱的纸层分离和分光光度测定J.药学学报,1963