冬虫夏草保健酒对小鼠巨噬细胞吞噬功能和迟发型变态反应影响的研究

1、冬虫夏草保健酒对小鼠巨噬细胞吞噬功能和迟发型变态反应影响的研究【摘要】 目的：研究冬虫夏草保健酒对小鼠免疫功能的影响。方法：测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和迟发型变态反应所致的耳部重量的改变。结果：冬虫夏草保健酒能增强巨噬细胞吞噬功能，致敏后小鼠的左右耳重量差异显著高于对照组。结论：冬虫夏草保健酒能增强小鼠特异性细胞免疫功能和非特异性细胞免疫功能。 【关键词】 冬虫夏草保健酒；小鼠；巨噬细胞吞噬功能；迟发型变态反应 Abstract Objective:To study the Effect of Cordyceps sinensis conservancy wine on the immune

2、 function of mice. Methods: Ponderal difference was examined in the left and right ear of the mice caused by the phagocytosis of peritoneal macrophage and delayed allergy. Results: Cordyceps sinensis conservancy wine could improve the phagocytosis of macrophage ,and the ponderal diference between mi

3、ce,s left and right ear is greater than that in the control group.Conclusion: Cordyceps sinensis conservancy wine can enhance specific cellular immunity and the non-specific immunity. Key words Cordyceps sinensis conservancy wine; Mice; Phagocytosis of peritoneal macrophage; Delayed allergy冬虫夏草保健酒以冬

4、虫夏草为主要原料，以红枣、枸杞等为辅料酿制而成，含有蛋白质、氨基酸、多糖、核苷酸、无机元素、超氧化物歧化酶（SOD）等多种成分。近年来虽然关于冬虫夏草对机体免疫功能影响的研究很多，但关于冬虫夏草与红枣、枸杞的联合作用并未见报道，本文研究这些成分对小鼠免疫功能的共同影响。1 材料与方法1.1 材料 （1）冬虫夏草保健酒:由包头医学院营养食品研究所与包头某酒厂共同研制；（2）实验动物：昆明种小鼠，雄性，40只，体重1822g，由内蒙古大学动物中心提供；（3）姬-瑞氏混合液：按参考文献1的方法配制；（4）鸡红细胞混悬液：采鸡全血，用生理盐水配制成5%（V/V）的混悬液；（5）二硝基氟苯（DNFB）：

5、由天津新兴隆化工厂提供。称取DNFB 7g，丙酮100mL，配成7%的DNFB丙酮溶液；再称取DNFB 1g，丙酮100mL，配成1%的DNFB丙酮溶液。1.2 方法1.2.1 实验动物分组和饲喂 将小鼠按体重随机分为4组，每组10只，即低剂量组、中剂量组、高剂量组和对照组。低、中、高3个剂量组分别是成人推荐量（每人每天60mL）的5倍（5L/g）、10倍（10L/g）和20倍（20L/g）。各组小鼠均喂饲相同的基础饲料（由内蒙古大学动物中心提供），实验前将保健酒经真空浓缩20倍，则低、中、高三个剂量组分别变为5倍（0.25L/g）、10倍（0.5L/g）和20倍（1L/g），再用蒸馏水将浓缩

6、20倍的酒分别稀释40倍、20倍、10倍，即为低、中、高3个剂量组，3个剂量组动物每日分别经口灌胃给予稀释后的浓缩冬虫夏草保健酒10L/g，阴性对照组动物每日经口灌胃给予蒸馏水10L/g。1.2.2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定 实验动物饲养30天后，每只小鼠腹腔注射5%鸡红细胞混悬液0.5mL，18小时后处死动物，仰位固定，腹壁消毒后剪开皮肤，注射2.5mL Hank，s液冲洗腹腔。由腹膜中央剪一小孔，用吸管吸取腹腔冲洗液，滴于载玻片上，37温孵30分钟，用生理盐水冲去未贴壁的细胞，凉干后用甲醇固定5分钟，再用姬-瑞混合液染色1015分钟，用蒸馏水冲去染色液，干燥后在油镜下计数200个巨噬

7、细胞吞噬鸡红细胞数，并计算吞噬百分率和吞噬指数。即：吞噬百分率=（吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞数）×100%吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/200个巨噬细胞数1.2.3 DNFB所致小鼠迟发型变态反应 实验动物饲养30天后，于第1、第5天每只小鼠后肢皮内注射7%DNFB丙酮溶液0.02mL进行致敏，于第1次致敏的第8天，用1%DNFB丙酮溶液0.02mL涂布于右耳进行攻击，左耳涂布生理盐水作为对照。次日处死动物，用直径8mm的打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称重并计算左右耳重量的差值进行单因素方差分析。2 结果2.1 冬虫夏草保健酒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影

8、响 巨噬细胞的吞噬功能是反映机体非特异性免疫功能的常用指标之一，它反映机体非特异性吞噬多种抗原和抗感染的能力。结果表明，冬虫夏草保健酒各剂量组吞噬百分率和吞噬指数与对照组相比，差异有统计学意义，且有随饮用冬虫夏草保健酒剂量的增加而增高的趋势，见表1。表1 小鼠腹腔吞噬细胞鸡红细胞实验的吞噬百分率和吞噬指数比较（略）*与对照组比较P0.05,*与对照组比较P0.012.2 冬虫夏草保健酒对小鼠迟发型变态反应的影响 该项实验是对特异性细胞免疫功能的测定。结果表明，冬虫夏草保健酒各剂量组小鼠右耳经1%DNFB丙酮溶液攻击后明显肿胀，重量高于左耳，其中、高剂量组左右耳重量的差值明显高于对照组,且差异有

9、统计学意义（见表2）。表2 二硝基氟苯诱导小鼠DTH耳重量比较（略）*与对照组比较,进行单因素方差分析P0.05,*与对照组比较P0.013 讨论 本研究通过用3个剂量冬虫夏草保健酒对小鼠免疫作用的影响进行了初步实验。结果表明，冬虫夏草保健酒能促进小鼠巨噬细胞吞噬功能、使致敏后小鼠的左右耳重量差显著高于对照组。 冬虫夏草保健酒调节免疫功能的作用与冬虫夏草保健酒中成分有关。冬虫夏草含蛋白质为20.06%26.40%,含天门冬、苏、丝、谷、脯、甘、缬、蛋、异亮、亮、酪、苯丙、赖、组、精、胱、半胱、色氨酸等18种氨基酸2。虫草在临床上的补益、辅助治疗消化系统及神经系统疾病、抑制病菌及增强免疫功能等作

10、用,似乎与其富含上述氨基酸有必然的联系3。虫草所含的多糖均为半乳甘露聚糖，大量药理实验表明，虫草多糖类物质具有多种作用，如抗肿瘤、增强单核巨噬细胞的吞噬能力、提高小鼠血清中IgG的含量、对体外淋巴细胞转化有促进作用和抗辐射作用等4。目前已从冬虫夏草中分离出腺嘌呤、腺苷、胸腺嘧啶、尿嘧啶、尿苷、脱氧腺苷和虫草素等核苷类成分，其中腺苷和虫草素是虫草的主要活性成分5。虫草还含有6种环二肽类化合物，其中L-苷氨酰基-L脯氨酰基环二肽具有抗癌和增强免疫的生理活性6。大枣是临床常用的、疗效确切的补气生血之品，兴奋机体免疫功能是中药补气作用的重要指标和体现。对大枣研究表明，大枣多糖对机体非特异性免疫、细胞免

11、疫和体液免疫均有显著兴奋作用，可提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。郎杏采等从酸枣仁及果肉中提取粗多糖,发现其具有增强小鼠免疫功能和抗放射损伤的药理作用；张庆等7证明大枣中性多糖对未活化的小鼠脾细胞有促进增殖作用。枸杞既是我国传统的名贵中药材也是民间常见的食品配料，它具有多方面的药理作用和生物活性功能。现代医学临床研究认为，从枸杞中提取的枸杞多糖是枸杞生物学作用的主要有效成份之一，它已成为保健食品的一种重要功能性添加剂8。枸杞多糖具有明显地提高吞噬细胞的吞噬功能,提高T淋巴细胞的增殖能力,增加血清IgG含量,增强补体活性等作用9。 我们实验结果认为饮用冬虫夏草保健酒能起到增强免疫功能的作用，

12、但针对不同人群是否存在最适饮用剂量的问题，还有待于进一步研究。因为生物生理代谢的基本规律是在神经和内分泌的调控下，只有在最合适的范围内摄取所需营养才可达到促进机体生长发育、增进健康的最佳效果。【参考文献】 1 刘洪元，高昆，张丽萍，等.舍养马匹马奶的营养成分分析J.营养学报,2003,25(2):183.2 陈万群,陈古荣.冬虫夏草代用品研究进展J.中草药,1994,25(5):269-271.3 纪莎,施小兵,易骏.冬虫夏草化学成分研究概况J.福建中医学院学，1999,9(2):46-47.4 周建树，池景良，李鑫.冬虫夏草的化学成分及药理功能研究进展J.人参研究，2005，（1）：18-20.5 张兴辉，石力天，胡晋红.冬虫夏草化学成分和药理作用研究进展J.中药材，2000，23（11）:722-724.6 苗明三.大枣多糖对免疫抑制小鼠白细胞介素2及其受体水平的影响J.中医康复研究,2004,8(30):