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文档简介

a. 用上述培养的白色菌落的菌液抽提质粒，用ECOR I 单酶切或用其它合适的酶 切，琼脂糖凝胶电泳检查片段大小，确定是否含有目的片段。 b. 挑取白色菌落直接进行PCR检测（可参见分子克隆第3版本或者咨询我们） c. 用T7和SP6启动子引物或其它合适的引物测序来确定是否含有目的克隆。 v 附录： pGEMX-T Easy 载体图谱： -5- pGEMX-T Easy 载体启动子和多克隆位点序列： -6- 如何计算连接反应中需要的 PCR 产物的量? 一般PCR产物与载体的摩尔比优化至2:110:1（推荐3:1）就可以得到良好结果，可 采用以下公式： 加入载体的量（ng）插入片段大小（kb）载体大小（kb）插入片段和载 体的摩尔比=插入片段的量（ng） 例如：插入片段和载体连接的摩尔比例为5:1，如连 接反应中加入载体30ng，插入片段大小为500bp ，这时应加入插入片段的量为30ng载 体0.5kb插入片段3.023kb载体5/1=25ng。 完 -7-

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