谈血管活性肠肽（VIP）对单碘醋酸钠诱发关节炎的影响

1、谈血管活性肠肽（VIP）对单碘醋酸钠诱发关节炎的影响摘要：关节炎性疾病有一个共同的特征就是白细胞迁移到关节滑膜组织。白细胞和滑膜细胞产生各种炎症介质，引起持久的慢性炎症和组织损伤。关节腔内注射单碘醋酸钠，可以诱发关节炎。研究发现血管活性肠肽（VIP）能抑制多种细胞因子的合成与分泌，但VIP在关节炎症中的作用尚不清楚。 本研究的目的是要观察VIP对单碘醋酸钠引起关节炎模型及诱发疼痛的影响。研究结果表明10-9摩尔VIP注射入膝关节，可以缓解关节痛觉过敏，延长后肢缩爪反射的潜伏期，增加对刺激足底表面机械压力的耐受。关节腔内注射VIP可导致重量重新分布，减轻因疼痛所致的身体重量偏斜。关键词：血管活性

2、肠肽；关节炎模型；痛觉过敏关节炎性疾病包括骨性关节炎和类风湿性关节炎，它们有一个共同的特征就是白细胞迁移到关节滑膜组织。白细胞和滑膜细胞生产各种炎症介质，例如细胞因子和基质降解酶，可引起持久的慢性炎症和组织损伤。血管活性肠肽是由神经纤维和淋巴细胞释放，在微环境中调节先天免疫和适应性免疫。 一些研究表明VIP能显著抑制多种细胞因子的合成与分泌1,抑制T细胞活化和抗原提呈,下调细胞免疫反应24,这对于治疗关节炎症和延缓关节炎的破坏性进程有利。已知，关节内注射代谢抑制剂单碘醋酸钠（MIA），可以诱发关节炎5。本研究的目的是要观察VIP对单碘醋酸钠引起骨关节炎模型及相关的疼痛的影响。 1材料与方法 动

3、物:雄性Wistar大鼠40只，体重100-200克， 随机分组， 每组10只。动物被安放在室温22的鼠笼内，每日进行标准的光照和暗周期，保证饮用水和食物的充足。 药品和试剂:单碘醋酸钠（MIA）和血管活性肠肽（VIP）购买于Sigma公司，药物用新鲜的0.9生理盐水溶解，备用。 关节炎疼痛模型:大鼠用异氟醚作吸入性深麻醉, 伴随氧气供应。MIA（3 mg/50 l）的生理盐水溶液（0.1ml）进行右膝关节腔内注射。大鼠被饲养14天。 实验过程:MIA注射后第14天, 用双足平衡法测痛仪和VonFrey测痛仪对大鼠进行疼痛的敏感性测定。然后，动物被异氟醚麻醉，将VIP（10-9 mol, 0.

4、1ml）注射进右膝关节，左膝作为对照注射同剂量生理盐水（0.1ml）。动物被放回笼内5分钟，其活动不受限制。注射后10，30，60，180分钟，分别进行痛觉敏感性测量。 2疼痛评估 双足平衡法测痛仪（林顿仪表，英国）是由双通道重量平衡器组成。用于测量同侧（关节腔内注射VIP）和对侧（关节腔内注射生理盐水）后肢的重量分布。大鼠放在一个有斜度的有机玻璃室内, 每个后足掌挺立在一个单独的压力板上。每个后肢施加到平衡板的力（以克计算）均超过5秒时间。所读的数据是测量三次的平均值。处理组（同侧）和对照组（对侧）所占重量的百分比的计算分别按下列公式进行计算： 同侧重量/（同侧重量+对侧重量） * 100

5、对侧重量/（同侧重量+对侧重量） * 100 VonFrey测痛仪（PBC37400，美国）用来自动记录大鼠发生缩爪反射的时间（秒）和压力值（克）。大鼠被放置在一个封闭的区域，操作者把力控制器置于动物的爪下，向其趾面伸出一根Von Frey型针（直径0.5毫米），单针逐渐地增加力度，直到大鼠因疼痛而发生缩爪反射，仪器分别记录到处理组和对照组引起缩爪反射的潜伏期和压力值。 所有数据表示为平均值S.E.M.用两因素方差分析和t-检验来检测各组间的差异。所得的p值 0.05，n=10）。在MIA诱导产生的关节炎模型，大鼠MIA注射侧膝关节（右侧）疼痛感加剧，其后肢重量分布偏向于生理盐水注射侧（左侧）

6、， 用双足平衡法测痛仪测量, 注入MIA诱发膝关节炎侧和生理盐水侧， 其重量分布百分比在第10分钟, 30分钟, 60分钟时测定值分别为40.61.6比59.41.6，39.21.6比60.816，40.21.4比59.81.4。结果表明：大鼠因一侧的膝关节疼痛（同侧），将其全身重量转移至另一侧（对侧）， 其重量分布有显著性差异（p0.05, n=10）。VIP最大的效应发生在注射后30分钟, 其效应维持直到3小时。 3.2用VonFrey测痛仪测量VIP对膝关节炎模型痛觉过敏的影响：VIP缓解了MIA诱导的膝关节炎机械性痛觉过敏，延长后肢缩爪反射的潜伏期，增加对刺激足底表面机械压力的耐受。

7、右膝关节内注射MIA（0.1ml）后引起注射侧后肢痛觉过敏。引起缩爪反射的潜伏期，在10分钟，30分钟，60分钟时测量值分别为11.11.1秒比19.91.1秒（MIA侧与生理盐水侧之比）， 11.31.2秒比19.4 1.0秒，11.20.9秒比20.01.4秒。其耐受单针刺激的压力值在10分钟、30分钟、60分钟时，分别为27.62.8克比47.11.1克(MIA侧与生理盐水侧之比)、28.02.9克比45.91.4克、27.92.2克比45.61.6克。引起缩爪反射的潜伏期和对足底平面的单针刺激压力值在MIA注射膝关节侧和生理盐水注射膝关节侧之间有着显著的差异(P0.05）。给予单针机械

8、刺激，在VIP注射后10分钟、30分钟、60分钟时, 分别测量其压力的变化为39.92.9比46.71.6克（VIP侧与生理盐水侧之比），39.72.1克比43.62.0克，35.42.2克比41.72.7克，无显著性差异（p0.05, n=10）。VIP显著减少了MIA引起的痛觉过敏，VIP发生的效应在注射后10至60分钟时间内。 4讨论 我们的研究结果表明，关节腔内注射VIP有利于降低关节炎疼痛的敏感性，改善MIA诱发的关节炎所致体重分布的变化，但VIP的影响是短暂的。 有两种情况可增加关节疼痛的敏感性，一是组织损伤，二是炎症介质释放。在关节内，MIA诱导的持久炎症引起组织损伤，允许更多的

9、炎症介质渗入到关节腔内，关节腔内的炎症介质增多，增加了关节传入冲动的敏感性6。VIP能抑制多种细胞因子，如IL-2、IL-4、IL-6、INF-等7的合成与分泌。避免大量的炎症介质释放和剧烈的炎症反应，抑制T细胞的免疫功能，消除关节肿胀，减轻关节炎性疼痛。 参考文献 1Xin Z, Jiang X, Wang HY, et al. Effect of vasoactive intestinal peptide (VIP) on cytokine production and expression of VIP receptors in thymocyte subsets. Regul Pept

10、. 1997;72(1):41-54 2Prasse A, Zissel G, Ltzen N, et al. Inhaled Vasoactive Intestinal Peptide Exerts Immuno-regulatory Effects in Sarcoidosis. Am J Respir Crit Care Med. 2010 May 4 3Delgado M, Ganea D. Anti-inflammatory neuropeptides: a new class of endogenous immunoregulatory agents. Brain Behav Im

11、mun. 2008;22(8):1146-51 4David Pozo,Mario Delgado, The many faces of VIP in neuroimmunology: a cytokine rather a neuropeptide? FASEB J. 2004; 18, 1325-1334 5Oestergaard S, Chouinard L, Doyle N, et al. The utility of measuring C-terminal telopeptides of collagen type II (CTX-II) in serum and synovial fluid samples for estimation of articular cartilage status in experimental models of destructive joint diseases. Osteoarthritis Cartilage. 2006;14(7):670-9 6Schaible HG, Grubb BD. Afferent and spinal mechanism