浅论原花青素对局灶性脑缺血大鼠脑组织SOD、MDA和NF-κB的影响

1、浅论原花青素对局灶性脑缺血大鼠脑组织SOD、MDA和NF-B的影响                   作者：刘畅 张萍 闵连秋 贾玉洁，刘学文【摘要】  目的 探讨原花青素(Procyanidins，PC)对局灶性脑缺血大鼠神经细胞保护作用及其机制。方法 随机将大鼠均分为假手术组、模型组、PC-1组(50 mg/kg)、PC-2组(100 mg/kg)和PC-3组(200 mg/kg )。以线栓法制备持续性局灶性脑缺血模型，

2、24 h后断头取脑制备组织匀浆测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)及用免疫组化SABC法，统计大鼠海马CA1区每高倍镜视野NF-B阳性表达率阳性细胞数/(阳性细胞数+阴性细胞数)×100%。结果 超氧化物歧化酶：PC能明显增强脑组织中超氧化物歧化酶活性，与模型组比较有显着差异 (50.55±5.87) (U/mg prot)、(51.44±7.06) (U/mg prot)、(55.32±6.39) (U/mg prot)、(39.28±5.67) (U/mg p

3、rot)，P0.01。丙二醛含量：PC能明显降低丙二醛含量，与模型组比较有显着差异(11.73±6.87) (nmol/mg)、(11.13±5.49) (nmol/mg)、(21.54±10.50) (nmol/mg)，P0.05，以高剂量组(50 mg/kg)更为显着(9.96±4.08) (nmol/mg)，P0.01；免疫组化显示PC组可以下调NF-B p65蛋白的阳性表达率，与模型组比较有显着性差异（P0.01)。结论 PC可减少脑缺血后自由基的生成，且以高剂量组的保护作用更加明显；PC对局灶缺血性脑损伤保护作用的机制可能与抑制NF-B活性，从

4、而减少细胞凋亡有关。 【关键词】  原花青素 超氧化物歧化酶 丙二醛 核因子Abstract: Objective  To study the neuroprotective effects and mechanism of Procyanidins in focal cerebral ischemia injury in rats. Methods  Sixty rats were randomly and equally divided into the sham-operative group，model group, focal cerebral isch

5、emia group and Procyanidins groups of 50 mg/kg,100 mg/kg and 200 mg/kg. Embolization thread was inserted into all the rats except those in the sham-operative group for the establishment of model of middle cerebral artery occlusion. 2 week and 1 hours before MCAO，the rats in PC-treatment groups were

6、provided corresponding doses of Procyanidins. The activity of superoxide dismutase (SOD) and contents of malondialdehyde (MDA) were measured after 24 hours focal cerebral ischemia. By immunohistochemical SABC method under high power lens, the immunohistochemistry changes of NF-B were observed. Resul

7、ts   The PC groups(50mg/kg，100mg/kg and 200mg/kg)could respectively increase the activity of SOD, which were evidently differential with model group (50.55±5.87) (U/mg prot),(51.44±7.06) (U/mg prot),(55.32±6.39) (U/mg prot) and (39.28±5.67) (U/mg prot), P0.01. The conte

8、nts of MDA in PC groups were observably reduced(11.73±6.87) (nmol/mg),(11.13±5.49) (nmol/mg) and (21.54±10.50) (nmol/mg)，P0.05, especially for the highest dose(9.96±4.08) (nmol/mg), P0.01. Immunohistochemistry of NF-B showed that the positive rates of PC treatment groups are evid

9、ently less than that of model group (P0.01). Conclusions  Procyanidins can reduce the production of free radicals after cerebral ischemia and the protective function of the group with higher dose is more evident. Procyanidins plays a neuroprotective role in the focal cerebral ischemia by decrea

10、sing the positive expression of NF-B and apoptosis.   Key words:Procyanidins；SOD；MDA；NF-B原花青素(Procyanidins，PC)是植物中广泛存在的一种多酚化合物1。我们在以前的研究中观察到PC对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用，但其具体作用机制还未完全明确2。本实验利用大鼠大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO） 模型，通过观察PC对急性脑缺血大鼠的脑组织SOD、MDA及凋亡相关基因蛋白NF-B p65的表达等的影响，旨在对PC的脑

11、保护作用机制做进一步探讨。   1  材料与方法1.1  材料1.2  方法2  结果         表1  不同剂量PC对MCAO大鼠脑组织中SOD活性及 MDA含量的影响（略）注:与假手术组比较，P0.01；与模型组比较，*P0.05,*P0.01；NS：0.9%生理盐水表2  不同剂量PC对MCAO大鼠海马CA1区NF-B蛋白表达的影响（略）注：与模型组比较，*P0.05，*P0.01；与PC-1组比较，P0.05；NS：0.9

12、%生理盐水   3  讨论3.2  PC对MCAO后凋亡相关基因NF-B的影响   NF-B属于Rel蛋白家族，是一种广泛存在于中枢神经系统中，能将信息从胞浆传至胞核引起相应基因表达的重要转录因子5。NF-kB通常是指p50/p65蛋白组成的二聚体，静息状态下与抑制蛋白I-B结合成无活性的形式存在于胞质中，激活状态下，I-B被磷酸化、降解，从而使Rel蛋白的核定位信号及p65亚基暴露，导致NF-B快速移至核内，与特异的启动子结合，调控许多靶基因的转录6。   脑缺血损伤时，NF-kB被氧自由基、细胞因子、钙超载等因

13、素刺激而活化，多数学者认为，NF-B可以通过调控多种凋亡相关基因的表达引起神经细胞的损伤7-12。本实验显示：假手术组大鼠海马区有基础水平的NF-Bp65表达，但主要位于胞浆内，考虑为非活性表达。模型组阳性表达率则显着增加，与Baeuerle 等的研究一致13。提示PC可能通过其抗氧化、抗炎作用而抑制NF-B的活化，进而抑制缺血后神经细胞的凋亡，而发挥其保护作用。PC低、中、高剂量组NF-B p65蛋白表达有升高趋势，且PC高剂量组明显低于低剂量组(P0.05)，提示剂量依赖性。（此文图1见附页7）（略）【参考文献】  1 国植，徐莉.原花青素:具有广阔发展前景的植物药J.国外医学:

14、植物药分册, 1996，11（5）：196-204.2 贾玉洁,闵连秋,季占胜,等.原花青素对大鼠局灶性脑缺血的保护作用J.中国脑血管病杂志,2005,2(12):558-560.3 Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in ratsJ.Stroke，1989，20(1):84-91.4 滕大才,徐铁军,张凤真.NR2B反义寡核苷酸对大鼠海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响J.徐州医学院学报,2006,26(1):17-19.5

15、 Sun Z, Andersson R.NF-kappaB activation and inhibition: a reviewJ. Stroke, 2002,18(2):99-106.6 Albert S, Baldwin JR. The NF-kB and I-kB proteins:new discovery and insightsJ. Annu Rev Immunol,1996,14:649-681.7 Barkett M, Gilmore TD. Control of apoptosis by Rel/NF-kappaB transcription factorsJ.Oncoge

16、ne,1999,49:6910-6924.8 Stephenson D, Yin T, Smalstig EB, et al. Transcription factor nuclear factor-kappa B is activated in neurons after focal cerebral ischemiaJ. J Cereb Blood Flow Metab，2000 Mar,20 (3)：592-603.9 Qin Z, Chenm R, Wan Y, et al. Neuclear factor B nuclear translocation upregulates c-myc and p53 expression during NMDA receptor-mediated apoptosis in rat striatumJ.Neurosci,1999,19:4023-4033.10 Domanska-Janik K, Bronisz-Kowalczyk A, Zajac H, et al. Interrel