淡竹叶清热作用药效植物基础研究

1、淡竹叶清热作用药效植物基础研究                            作者：刘明，吴启南， 宋秋烨，邬云霞 【摘要】  目的研究淡竹叶清热作用有效部位及化学成分，为淡竹叶的进一步开发利用和质量标准的制定提供依据。方法采用体外抑菌实验筛选淡竹叶有效抑菌部位，并采用HPLC-MS法分析抑菌部位的化学成分。结

2、果淡竹叶甲醇提取部位具有抑菌作用，根据液质联用图谱及，分析鉴定出淡竹叶甲醇提取部位中6个化学成分，分别为香草酸、香豆酸、牡荆苷、苜蓿素7-D-葡萄糖氧基黄酮、芦竹素或其同分异构体白茅素及苜蓿素。结论淡竹叶甲醇提取部位具有一定的抗菌活性，对各菌种的抑菌效果有较大差异，这一部位可能与淡竹叶清热解毒功效相关。采用HPLC-MS法分析鉴定有效部位化学成分，保留了液相色谱与质谱兼具的微量、快速的优点,结合了前者的高分离效能与后者的准确性及选择性的特点,方法稳定可靠，为淡竹叶的进一步开发利用和质量标准的完善提供科学依据。 【关键词】  中药鉴定 淡竹叶 抑菌实验 液质联用Abstract：Obj

3、ectiveTo investigate the effective part and components of Heat-cleaning in Herb Lophatheri,and to provide scientific accord for further development and establishment of quality specification of Herb Lophatheri.MethodsScreen effective antiblastic part by bacteriostasis experiment in vitro,and analyze

4、 the chemical compositions with HPLC-MS in this part.ResultsThe part extracted with MeOH was effective bacteriostasis,6 components were detected by HPLC-MS atlas and relative articles in it.They were vanillic acid,coumaric acid,vitexin,Tricin7-D-glucosyloxy-flavone,arundoin,and Tricin.ConclusionThe

5、part extracted with MeOH has antibacterial activity,and the activities are different to different bacterium,this part may be correlated with heat-cleaning and detoxicating in herb Lophatheri. HPLC-MS has good quality of both HPLC and MS,it is stable and reliability, and can provide sciencic proif fo

6、r further development and improvement of quality specification of herb Lophatheri.Key words：Authentication of Chinese medicines;  Herb lophatheri;  Bacteriostasis experiment;  HPLC/MS/MS淡竹叶为禾本科植物淡竹叶Lophatherum gracile Brongn. 的干燥茎叶1。始载于本草纲目，1977年以来的历版药典均有收载，具有清热除烦、利尿的功效。用于热病烦渴，小便赤涩、淋痛

7、，口舌生疮。淡竹叶为卫生部公布的药食两用中药之一，近年来多有制成保健凉茶2、淡竹叶酸奶3等。淡竹叶的有效成分物质基础研究一直较为薄弱，现有化学成分的研究显示淡竹叶主含黄酮、三萜类、多糖、酚性成分、氨基酸、有机酸及多种微量元素等46。依据医学理论，结合淡竹叶的中医临床功效，本实验对淡竹叶不同溶剂的提取部位进行了抑菌活性的研究，对淡竹叶清热有效物质基础进行初步筛选，并运用液质联用分析手段对所筛选的部位进行化学成分分析，为淡竹叶的进一步开发利用和质量标准的制定提供科学依据。1   仪器与材料1.1   仪器手提式压力蒸气灭菌器（上海华线医用核子仪器有限公司）；

8、移液枪（北京金花移液器厂）；HPLCMS/MS液质联用仪（Water's公司，型号Quattro Primer，产地：美国）。1.2   菌株大肠杆菌 CMCC(B) 44103；金葡菌CMCC(B)26003；乙链菌CMCC（B）32210；绿脓菌CMCC(B)24430。1.3   药物营养琼脂（国药集团化学试剂有限公司，批号F20040304）；肉汤培养基（国药集团化学试剂有限公司，批号20060310）；血琼脂基础（国药集团化学试剂有限公司，批号20060228）；葡萄糖肉汤（国药集团化学试剂有限公司，批号10010518）；香草酸对照品

9、（中国药品生物制品检定所，批号110776200402）。牡荆苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号11876200501）。淡竹叶采于江苏省宝华山，经南京中医药大学鉴定教研室吴启南教授鉴定为禾本科(Gramineae)植物淡竹叶Lophatherum gracile Brongn.的干燥茎叶。2    方法与结果2.1   不同提取部位抑菌实验淡竹叶置于多功能提取罐，60乙醇回流提取5 h，提取液减压回收溶剂得到淡竹叶总浸膏，总浸膏与硅藻土拌匀，分别加入石油醚、二氯甲烷、甲醇、水逐级超声提取，减压回收溶剂，得石油醚提取部位、二氯甲烷提取部位、

10、甲醇提取部位和水提取部位，作为供试品。1         2.2  甲醇提取部位抑菌实验    结果显示，5 g·ml-1以下均有乙链球菌生长，故淡竹叶甲醇提取部位对乙链的抑菌最小浓度为10 g·L-1。2.3  淡竹叶甲醇提取部位化学成分液质联用分析质谱条件：电离源为ESI+；检测方式为正离子模式；毛细管电压为3.0 kV；锥孔电压为30 V；离子源温度为120；扫描范围为m/z 150600；氮气流量为400 L·h-1。3

11、0; 讨论淡竹叶抑菌实验结果表明，甲醇提取部位对大肠杆菌、金葡菌、绿脓杆菌均有一定的抑菌作用，其中对绿脓杆菌的作用较强，对大肠杆菌的作用较弱；对乙链球菌也有一定的抑菌作用，其最小抑菌浓度为10g·ml-1。淡竹叶具有一定抑菌作用，但抑菌作用不强，根据这一结果，分析淡竹叶的临床清热作用，可能存在其它的作用机制，如增强免疫功能等。本文首次运用HPLC-MS法对淡竹叶中有效抑菌部位（甲醇提取部位）的化学成分进行了深入分析研究，根据质谱图谱，现有淡竹叶化学成分研究的文献，并部分采用标准品对照等方法，初步鉴定出甲醇提取部位中的6个化学成分分别是香草酸、香豆酸、牡荆苷、苜蓿素7-D-葡萄糖氧基黄

12、酮、芦竹素和苜蓿素。现有研究结果表明，香草酸、香豆酸具有抗菌消炎作用，牡荆苷具有抗炎解痉与降压活性，对大肠杆菌有抑制作用。从总离子流色谱图中可以看出，淡竹叶甲醇提取部位中所含的成分十分复杂，由于淡竹叶化学成分的基础研究薄弱，一些量大的化合物如相对保留时间为tR0.95 min，tR4.15 min，tR4.65 min，tR6.81 min等色谱峰还未能鉴定，有待进一步研究。本文研究结果初步确立了淡竹叶中清热解毒成分，主要是有机酸、黄酮和三萜类化合物，为淡竹叶质量标准的完善和提高奠定了实验基础。【参考文献】  1国家药典委员会药典，部S 北京：化学出版社，2005：230.2靳桂敏，廖文通苦瓜、金银花、淡竹叶复合保健饮料的研制J 食品科技，2006，23（2）：37.3马亚宁,