高效液相色谱法测定替米考星含量

1、 高效液相色谱法测定替米考星含量闫春芝 , 赵红彦 , 秦朝英(山东鲁抗医药股份有限公司 , 山东济宁 272100收稿日期 20060315 文献标识码 A 文章编号 10021280(2006 08002602 中图分类号 T Q460. 72摘 要 建立了替米考星含量测定的 HP LC 方法 。采用 C18色谱柱 (5m , 4. 6mm ×250mm , 乙腈 +四氢呋喃 +磷酸二丁胺为流动相 , 流速 1. 0mL /min, 检测波长 280mn, 以 HP LC 外标法测定替米考星含量 。 结果表明 , 实验测得的峰面积与对应的浓度呈良好的线性关系 , 其线性范 围为

2、0. 250. 75mg /mL(r =0. 9999 , 平均回收率为 99. 81%。本法简便 、 准确 、 快速 , 是测定替 米考星含量的良好方法 。 关键词 替米考星 ; 含量 ; 高效液相色谱法 (HP LC 作者简介 :闫春芝 (1967年 , 女 , 本科 , 从事药品检测工作 。 E 2mail:ycz1996126. com 替米考星 (Til m icosin 是一种由泰乐菌素半合 成的大环内酯类畜禽专用抗生素 , 中国兽药典 中未收录该药的检验方法 1。本方法参照 USP 中该品种含量的 HP LC 检验方法 2, 行了改进 , 使色谱峰分离更好 ( 1 材料与方法1.

3、 1仪器 仪 , W aters152521, 配 2487紫外可调波长检测器 , 美国 W aters 公司 ; 超声 波清洗机 Jcx 250G, 山东济宁超声电子仪器厂 ; 抽滤 瓶 (滤膜 0. 45m ; 万分之一分析天平 , 美国 MET 2T LER 公司 。 1. 2 药品 替米考星试药 , 批号 0505007, 顺式异 构体 80. 3%, 反式异构体 19. 7%, 山东鲁抗医药股 份有限公司 105车间生产 。替米考星标准品 , 批号 1667370, 顺式异构体 830u /mg,反式异构体 126u /mg,美国 USP Reference Standards Co

4、mm ittee 。 1. 3 试剂 乙腈为色谱纯 ; 氢氧化钠 、 四氢呋喃 、 磷酸 、 二丁胺为分析纯 ; 纯化水 。 1. 4 溶液 1. 4. 1 磷酸二丁胺缓冲溶液 边搅拌边将 70mL 稀磷酸溶液 (1 10 加入 16. 8mL 二丁胺 (90:10 中 , 冷却 , 用磷酸调节 pH 值至 (2. 5±0. 1 , 用水稀 释至 100mL, 摇匀 。1. 4. 2 稀释液 5. (比重为 1. 71g/mLmL 的氢氧化钠溶±0. 1 , 然 后 用 水 稀 释 至 1。 1. 4. 4 线性工作液 分别吸取 1、 1. 4、 1. 8、 2. 2、 2

5、. 6、 3mL 的储备液至 10mL 容量瓶中 , 用稀释液 稀释至刻度 , 制成浓度分别为 0. 25、 0. 35、 0. 45、 0. 55、 0. 65、 0. 75mg/mL的溶液 , 摇匀 。1. 4. 5 替米考星标准溶液 2 取约 25mg 替米考 星标准品 , 精密称定 , 置于 50mL 量瓶中 , 加入 10mL 乙腈 , 超声溶解 , 用稀释液稀释到刻度 , 制备成 约 0. 5mg/mL的溶液 , 摇匀 。 1. 5 色谱条件 W aters sys mmetry C18色谱柱 (4. 6mm ×250mm , 柱号 WAT054275; 手动进样 ; 流

6、速 1. 0mL /min; 检测波长 280n m; 柱温 30 ; 进样量 20mL 。 流动相 A (美国药典流动相 :将 110mL 乙腈 、 55mL 四氢呋喃 、 28mL 磷酸二丁胺缓冲溶液加 入 700mL 水中 , 用水稀释到 1000mL, 混匀 , 0. 45m 滤膜过滤 。流动相 B (本试验改进流动相 :将 乙腈 105mL 、 四氢呋喃 53mL 、 磷酸二丁胺缓冲溶 液 30mL 加入 700mL 水中 , 用水稀释到 1000mL, 混匀 , 0. 45m 滤膜过滤 。 1. 6 线性验证 测定不同浓度的线性工作液对应 的峰面积 , 以峰面积对浓度作图制成回归曲

7、线 , 求 62 中国兽药杂志 2006, 40(8 :2627/闫春芝 , 等 得回归方程 , 计算相关系数 。 1. 7 回收率及精密度 准确度验证采用添加回收 率法进行试验 。 不同浓度的样品溶液各配制 3份 , 分别加入不同体积的已知浓度的标准品溶液 , 所得 样品溶液的浓度分别为本方法最终测定浓度 (0. 5mg/mL 的 80%、 100%、 120%, 取配制好的样品溶 液及标准品溶液适量注入色谱仪 , 以替米考星顺式 异构体计算添加回收率及 RSD 。 2 结果与结论2. 1 流动相的选择 替米考星供试品 (0. 5067mg/mL 在 A 、 B 两种流动相中的 HP LC

8、色谱图见 图 1 。A -美国药典流动相 ; B -本试验改进流动相图 1 替米考星的 HP LC 色谱图替米考星反式异构体的 HP LC 色谱图应为两个未 完全分开的峰 , 这在 B 图较为明显 , 分别为 13. 037和 13. 323m in, 但 A 图中峰未见分离 。 故本研究选 择流动相 B 进行以下试验 。2. 2 校正曲线及回归方程 取 1. 4. 4项下的线性工作液进行 HP LC 测定 。 在 0. 250. 75mg/mL范围内 , 替米考星溶液浓度 (x 与顺式异构体峰面积 值 (y 呈良好的线性关系 , 线性回归曲线见图 2, 回 归方程为 :y =1. 83

9、15;107x +1. 40×105, 相关系数 为 r =0. 9999。2. 3 回收率及精密度 结果见表 1, 平均回收率为 99. 81%, 平均 RSD 为 0. 0619%。2. 4 结论 本方法在美国药典测定替米考星方法的基础上 , 通过大量的试验找到了合适的流动相的 配比 , 使色谱峰分离良好 , 反式异构体出现了未分 开的两个峰 。 该方法简便 、 快速 , 其准确度和 图 2 替米考星的校正曲线图表 1 替米考星的回收率试验结果编号样品称重 /g标准品添加量 /mg理论总量 /mg峰面积实测总量 /mg回收率 /%平均回收率 /%RSD /%10.0. 03484

10、0. 02341. 93620. 3971922498920. 4158100. 0950. 02341. 93620. 3971921761320. 3995100. 01100. 050. 040070. 02772. 42024. 33201098696624. 315399. 9380. 02772. 42024. 33201096289624. 262099. 7199. 830. 110890. 02772. 42024.33201097654124.292299. 84 注 :“ 理论总量 ” =样品称重 ×样品含量 (80. 3% +标准品添加量 ×标准品含量 (83. 0%