艾迪注射液对食管癌凋亡影响的组织芯片研究

1、艾迪注射液对食管癌凋亡影响的组织芯片研究         09-08-10 15:18:00     作者：王剑蓉， 赖仁胜    编辑：studa20【摘要】  目的 研究艾迪注射液对食管癌凋亡的影响。方法 收集食管鳞状细胞癌病人46例，对照组23例，艾迪组23例，艾迪组术前给予艾迪注射液80ml/d，静脉滴入，连用7天，对照组不用，两组术前其他处理相同。术后完成常规病理检查后，应用组织芯片技术，采用免疫组化法检测Bcl-2

2、、Bax；原位末端核苷酸标记(TUNEL)法检测癌细胞凋亡状况。结果 两组在性别、年龄、部位、癌肿大小、分化、浸润深度、淋巴转移方面差异均无显著性，具有可比性。 Bcl-2在艾迪组的表达阳性率（39.1%）比对照组（78.3%）显著降低，具有统计学差异（P0.05），Bax在艾迪组的表达阳性率（56.5%）比对照组（17.4%）显著增高，具有统计学差异（P0.05）。艾迪组的Bax/ Bcl-2比值(1.22±0.72）比对照组（0.47±0.65）增高，差异有非常显著性（P0.01）。TUNEL法检测：艾迪组癌细胞凋亡阳性率（69.6%）比对照组（8.7%）明显增高，两组

3、间差异有非常显著性（P0.01）。结论 艾迪注射液可以通过下调Bcl-2蛋白的阳性表达，增大Bax/ Bcl-2的比值、诱导癌细胞凋亡，从而发挥对食管癌的术前干预作用。应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，具有快速、经济、准确的特点。 【关键词】  艾迪注射液; 食管鳞状细胞癌; 组织芯片; 凋亡    Study on the influence of apoptosis in Aidi injection on patients with esophageal squamous cell carcinoma(ESCC) by tissue

4、microarray    WANG Jian-rong,LAI Ren-sheng.Basic Medical College of Nanjing University of TCM,Affiliated Hospital of Nanjing University of TCM , Nanjing 210029,China    【Abstract】  Objective  To study the influence of apoptosis in Aidi injection on patients wi

5、th ESCC. Methods  46 ESCC patients were divided into Aidi group and control group, each of which included 23 subjects. Patients of Aidi group were given 80ml/d  intravenous injection of Aidi for 7 days before surgery, while patients of control group were not given any Aidi injection. Other

6、 related therapeutic medicines were as same in both groups. After completing ordinary  staining detection, tissue microarray (TMA) was prepared and performed using immunohistochemistry (IHC) and terminal deoxynucleotidyl  transferase-mediated dUTP biotin end labeling  of fragmented DN

7、A(TUNEL) method.  Bcl-2 and Bax were observed by immunohistochemistry staining. Results  There was no significant statistical difference between the two groups in sex, age, tumor sites, tumor size, differentiated degree, infiltration degree or lymph node metastasis. The positive rate of Bc

8、l-2 in Aidi group（39.1%）was significantly lower than those in control group（78.3%）,（P0.05）,while the rate of Bax in Aidi group（56.5%）was significantly higher than that in control one（17.4%）,（P0.05）. The ratio of Bax/ Bcl-2 in Aidi group (1.22±0.72) was significantly higher than that in control

9、group(0.47±0.65),（P0.01）. In addition, the positive rate of apoptosis in the experimental group(69.6%) was significantly higher than that in the control group(8.7%)（P0.01）by TUNEL method. Conclusion  Aidi injection could downregulate the expression of Bcl-2 and increase the ratio of Bax/ B

10、cl-2 to improve the apoptosis of ESCC, therefore it can interfere with ESCC prior to surgical operation. It is feasible to use tissue microarray technique, which is a rapid, economic and accurate method to screen clinical tissue specimens on a large scale.    【Key words】  Aidi in

11、jection; esophageal squamous cell carcinoma; tissue microarray;apoptosis    食管癌是一种常见的发病率较高的癌症，预后较差，选用任何单一方法治疗,如手术、放疗或化疗等,其疗效均不尽如人意。 综合治疗则能取长补短,最大限度地发挥各种疗法的优势。    中医药在食管癌的各个阶段均可应用，并有明显的疗效。术前应用中药可为手术切除肿瘤作准备，能改善患者心、肝、肾等脏器的功能；能控制癌症的发展，增加手术切除率,减少手术并发症等。中医药与手术的配合可有效增强免疫功能,提高患

12、者的生存质量及远期生存率。    艾迪注射液是一种新型多靶点抗肿瘤药，属于目前临床常用的中药复方精制剂，临床已经证实艾迪注射液对食管癌等多种肿瘤有明显的疗效，但同大多数中药一样，其作用的分子机制尚不完全明了。我们用组织芯片的方法，分析了多项凋亡相关指标，探讨艾迪注射液对食管癌术前干扰的分子机制。    1  资料与方法    1.1  研究对象  本实验研究设计为回顾性研究，共观察江苏省中医院胸外科2003年8月2005年12月收治的食管鳞状细胞癌手术病人46例，其中实验组2

13、3例，对照组23例。 所有病例术前均经电子内镜及组织病理学检查证实为食管鳞状细胞癌，无远处转移，术前未经放化疗或免疫治疗。    1.2  临床试验用药及处理方法   艾迪注射液：生产厂家贵州益佰制药有限责任公司；批准文号：国药准字Z52020236。艾迪组术前给予5%葡萄糖注射液500ml艾迪注射液80ml静滴，QD×7d;对照组不用艾迪注射液，其他处理方法相同，均行食管癌根治，胸腹二野淋巴结清扫术。    1.3  主要试剂  Bcl-2、Bax  由北京中杉金

14、桥生物技术有限公司提供；即用型快速免疫组化MaxVisionTM试剂盒，福州迈新生物公司提供；原位末端核苷酸标记(TUNEL)检测细胞凋亡试剂盒：由德国罗氏公司提供。    1.4  实验方法    1.4.1  标本收集  收集2003年8月2005年12月，南京中医药大学附属医院病理科归档食管鳞状细胞癌蜡块，回顾性分析其病历资料，符合艾迪组要求的23例，对照组23例。    1.4.2  常规病理学检查  观察肿瘤的部位、大小、浸润深度、大体类型，淋巴

15、结转移情况，常规HE染色。    1.4.3  组织芯片的制作  （1）HE染色切片定位，镜检观察组织，标定切片靶点位置，对照标定相应蜡块区域。（2）玻片洗净，APES包被后备用。（3）选择正常组织作为A1区位指示组织，本项目为正常食管鳞状上皮组织。（4）浇注4.0cm×2.0cm宽体区受体蜡块。 8×6=48孔矩形打孔每孔0.2mm。（5）供体蜡块147号按上述顺序编号，每只石蜡块均有A1-F7各位点编号（见图1）。(6)供体蜡块固定于打孔仪下方用带内芯的不锈钢2mm内径空针，在已选定的区域，钻孔取芯柱2mm深度，立即转移到受体石蜡对应孔中，以内芯退出芯柱组织，如此反复47次完成受体蜡块的制作，37加温受体蜡块，挤平受体块组织芯柱，冻存受体蜡块。(7)切片前以薄膜贴住受体蜡块，6mm切片以后反面向下漂入温水，APES玻片准确捞片（方向固定）立即用紫外灯照射15s，揭掉薄膜，在80下烤片2h，保存玻片备用