细胞培养韩朝伟

1、细胞培养介绍细胞培养的分类细胞培养的基本流程细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。药物研究与开发 新药筛选 疫苗研究与开发基因工程药物研究与开发细胞工程药物研究与开发基础研究 药物作用机理 基因功能 疾病发生机理 生物制药 疫苗生产基因工程药物生产诊断用和药用单克隆抗体生产 细胞工程药物生产无污染：化学污染、微生物污染温度环境：37。偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强气体环境： 95%空气加5%二氧化碳酸度环境：大多数细胞的适宜PH 为7.2-

2、7.4，细胞耐酸性比耐碱性大一些。细胞培养基：合成培养基、天然培养基。生物安全柜细胞培养箱电动移液器手持移液枪细胞培养瓶细胞培养袋倒置显微镜计数板贴壁生长的细胞： 必须贴附于支持物表面才能生长，主要包括各种实体组织来源细胞、上皮细胞。悬浮生长的细胞： 于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，主要包括各种造血系统肿瘤细胞。目前公司产品中，（自然杀伤细胞）、（细胞因子诱导的杀伤细胞）属于悬浮型细胞；（间充质干细胞）属于贴壁生长细胞。细胞细胞获得细胞分离复苏接种扩大培养补液传代转瓶（袋）收获离心浓缩冻存分离细胞：指从组织或者血液中将所需要的细胞分离出来，例如细胞通过分离脐带获得，免疫细胞常常通

3、过离心血液获得。复苏细胞：指将冻存的已分离的细胞解冻而便于继续培养。干细胞和免疫细胞都可冻存。接种：将已分离的所需细胞接种到培养环境中开始培养。通常接种使用培养瓶。补液：根据细胞生长状态加入替换新的培养基以满足细胞的生长需求。增添培养基的同时往往还需要加入额外的因子。传代：主要指贴壁细胞，细胞从原环境重新接种到另外的培养环境中，再进行培养的过程就称为传代或者再培养。转瓶（袋）：原培养器皿的空间不足以满足细胞生长时将细胞转移到更大的培养瓶或培养袋中继续培养。离心：通过离心将细胞集中，将细胞和培养基分离，便于收集细胞或者上清液。浓缩：将离心所得的细胞按照需求重悬，液体环境和浓度都不同于细胞培养时，

4、通常用于制成细胞产品进行人体回输。冻存：将收集的细胞在低温下保存，通常用特定的冻存液冻存在液氮中，可以保存较长时间并且可用于继续培养。包被 提前在培养瓶中加入所需因子包被培养瓶分离 将血液缓慢加入分离液中 离心分离出PBMC细胞接种 将分离得到的PBMC细胞接入包被的培养瓶中扩大 根据细胞生长状态添加培养基或更换培养瓶（袋）收获 通过离心洗去原有培养基，补充生理盐水及白蛋白制成用于回输的终产品以MSC细胞为例所需培养基体积不同，贴壁细胞只在培养瓶底面生长，培养基本身不提供生长空间，使用的体积较培养悬浮细胞少基本上不需要补液操作，悬浮细胞扩增后需要添加培养基以满足生长需求，而贴壁细胞一次接种加入

5、的培养基基本满足细胞长满培养瓶底面的营养需求需要消化才能脱离培养瓶，贴壁细胞附着在培养瓶底面，传代或收获时需要将细胞分离下来，常见通过胰蛋白酶消化来完成贴壁细胞 游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。 贴壁期：培养基中含有促贴壁因子，悬浮细胞在促贴壁因子的作用下附着。 潜伏期：此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为624小时。 对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。 平台期：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂细胞生长曲线悬浮细胞悬浮细胞以单个分散的状态接种，开始增殖后产生细胞克隆团，克隆团由小到大，当克隆团过大时会影响细胞继续增殖，所以需要及时补充培养基和适当吹散细胞团镜下可见大小不一的细胞团 培养液：颜色变化，是否清亮透明 细胞生长概况: 注意细胞的生长增殖变化 细胞形态变化：状态良好的细胞，透明度大、折光性强，可