活体组织HE制片程序探讨

1、活体组织HE制片程序探讨 作者：赖英荣，钟觉民，罗灿峤，梁英杰，王连唐 【摘要】 目的：为了提高病理HE制片质量，探讨和分析HE制片的各步骤。方法：通过组织的固定、脱水、包埋、切片、染片、封片等一系列的各步骤进行各种实验和比较，提出各步的要点，使每个HE制片的操作者能获得一套标准而稳定的HE制片方法。结果：总结出该程序方法容易操作。结论：制出的HE切片质量完全能满足诊断和科研的要求，制出的HE切片质量好，稳定。 【关键词】 组织；HE制片；程序；方法The HE Section Procedure and Problemsin BlopsyAbstract：Objective To impro

2、ve the quality of HE section and analyze the detaile procedures of HE sectionMethods： Some key points and notes of each step in HE section were raised through experiments and compariso of the detailed procedures of HE section in Cluding tissue，dehydration，embedding， slice， stain， sealing Every manip

3、ulator of HE section would have access to a suit of Standard and steady methods of HE section Results The protocl is handy and easy to manipulate Conclusion HE section according the protocol has high quality and steady，meet the need of pathological diagnosis and Scientific research.Key words：Tissue;

4、HE section;Procedure;MethodsHE制片是病理实验室最基本的方法，是各种制片技术最基础的一环1。它包括组织固定、脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明和封固等程序。HE染色是既基本又是十分重要的工作。HE染色的好坏直接影响病理医生的正确诊断和科研结果观察，而HE染色质量好坏与HE制片的每一步骤关系都十分密切。只要有某一步骤出问题都直接影响下一步工作，最终导致HE染色质量差，下面对组织的HE制片程序及每一环节的注意事项作分析和探讨。1 材料和方法1.1 材料 中山一院手术切除活体组织和活检组织以及科研实验的动物组织。德国平推滑动式和轮转式切片机，英国全

5、封闭脱水机脱水。12 组织固定 无论取人体组织或动物组织，当它离开本体，都必须投入固定刑。组织固定是利用某些化学试剂(如甲醛、乙醇、氯化汞等)的化学特性，使组织与细胞内的蛋白质发生分子间交联或对蛋白质沉淀作用，从而使蛋白质凝聚、沉淀和变性为不溶性。固定剂简单固定剂(甲醛、乙醇、醋酸等)混合固定剂10%中性甲醛液：甲醛100 ml、蒸馏水900 ml、碳酸钙加至饱和取上清液。10%缓冲中性甲醛液100 ml、Na2HPO4 6.5 g、Na2H2PO4.HO24 g、蒸馏水900 ml(AF)乙醇甲醛液。Bouin、Zenker氏液等。表1 各种固定试剂的特性（略）目前各病理室最常用为10%中性

6、甲醛液、10%中性缓冲甲醛液。一般小块组织固定时间为6 h12 h。1.3 组织脱水、透明、浸蜡可分为人工操作和机械操作 人工脱水10%中性甲醛2 h80%酒精1 h95%酒精过夜无水酒精1 h无水酒精1 h无水酒精+丙酮（41）30 min二甲苯30 min二甲苯30 min石蜡65 2 h3 h。注意事项：脂肪组织在脱水过程中虽然经过各级脂溶剂，但由于时间短组织内脂肪不能完全溶解，导致浸蜡不彻底，不能制成优质切片。因此在脱水前应用丙酮脱脂肪30 min60 min；遇到骨髓或钙化组织应进行脱钙处理：如用14%硝酸或蚁酸等；用脱水机脱水时，应经常检查脱水机内的液体是否符合标准，不应过多或过少

7、，定期更换试剂，蜡缸是否处于溶液状态；如果是完全封闭脱水机还应检查清洗是否彻底，装废汽液瓶的液体是否已装满等；组织包埋时，注意把最平的切片向下，襄性组织、皮肤组织要竖埋；开包埋机时注意溶蜡箱是否有蜡等。 14 组织切片 组织经石蜡包理后，先用冰预冷，用切片机切成3 m4 m蜡片。带电脑电动、自动摊片平推滑动式切片机的优点：操作灵活、轻松、快速，可切组织形状不同大小和较硬的组织。缺点不能连续切片。轮转式切片机优点可连续切片，切片均匀。缺点不适切较大、较硬组织。不论用什么切片机切片，都应调好切片角度，角度大时切片易碎、角度小，切片不连续，易皱。贴片：先将切片放入冷水或10%15酒精中，再移到42%

8、45%漂片机展平，比直接将切片放入漂片机中要好。烤片：65 烤箱30 min或用电吹风稍吹干，待蜡微溶再放入65 烤箱15 min即可。1.5 切片脱蜡染色切片脱蜡染色人工操作机械操作(自动染色机)(步骤或程序)TO或二甲苯(5 min10 minTO或二甲苯(5 min10 min)无水酒精(2 min3min)95酒精(2 min3 min)80酒精（2 min3min)自来水洗(1 min2 min)苏木素染色(5 min10 min)自来水洗1 min1盐酸酒精分化(1 s3 s)流水冲洗15 min(促蓝液1 min)0.5伊红水溶液(1 min3 min）自来水洗(3 s5 s)8

9、0酒精(3 s5 s)95酒精(3 s5 s)无水酒精（2 s10 s)石碳酸二甲苯(14)3 min5min二甲苯(TO)2 min3 min二甲苯（TO）2 min3 min二甲苯(TO)2 min3 min中性树胶封片。HE染色最常用苏木素染液，有Harris氏、 Lillie氏这两种,它们各有优缺点， Harris氏苏木素染色块，但易有氧化膜及沉淀，因而需经常过滤， Lillie氏苏木素由于配制时有甘油，染色一段时间在肠黏膜、宫颈含有黏液组织内易有沉淀出现，染色时间稍长。伊红配制：0.25%1%水溶液，为加强染色力，最好在100 ml染液中加浓水醋酸1滴，并加麝香草酚颗粒少许或浓甲醛几

10、滴以防止霉菌生长，需定时过滤。中性树胶应于前1天下班前稀释好，否则会有较多的气泡。每天封完片子后都应用显微镜进行观察，检查每一例玻片组织是否与送检单上所写的送检物相符，有否弄错或者切片有否皱折，或者切片是否完整。在染色方面，检查染片是否完全透明，细胞核和细胞浆对比是否清晰，红蓝分明。2 结果每年30 000多张病理切片和1 000多张科研的HE切片质量都能满足病理诊断和科研观察的要求。制出的HE切片质量好，稳定。3 讨论要做一张优质的HE切片，首先就要从组织的固定开始重视2，通过实验对比，我们认为10%的中性甲醛是最好的常规HE制片的固定液，同时大标本（直径5 cm),最好从组织中间切开固定过夜。脱水机有条件的可以调温在32 35 ，这样可使组织得到充分固定。便于切片和抗原保存。切片可选用平推或轮转式切式切片机，这可根据各操作才需要而定。平推切片机可以切较大、较硬的组织，而轮转切片机可以连续切片，较适合于科研需要。染片用的苏木素染液，我们认为改良LillieMayer氏苏木素较好，因为它容易配制，染色力适中，不易产生沉淀和氧化膜，而Harris氏苏木素配制较难掌握控制，虽然染色力强，但易