体重监测下硫代乙酰胺诱导豚鼠肝纤维化模型

1、体重监测下硫代乙酰胺诱导豚鼠肝纤维化模型         10-05-10 15:34:00     编辑：studa20                 作者：王小平，赖远辉，许峰峰，甄宇洋【摘要】  目的 根据体重变化监测硫代乙酰胺(TAA)诱导豚鼠肝纤维化过程中个体反应差异,探索硫代乙酰胺诱导豚鼠肝纤维

2、化模型的可行性。方法 健康雄性豚鼠50只，随机分成三组：对照组10只;实验组40只(TAA六周组20只，TAA九周组20只)。实验组予浓度为0.03%TAA+750 mg/L Vit C饮用水诱导并不限量供应。肝组织用HE染色，Masson三色染色、Gomori银染色法。据肝组织内纤维组织增生状况分为5级：(S0，S1，S2，S3，S4);统计各个体肝纤维化程度。结果 体重比较使用TAA第七周：TAA六周组vs. TAA九周组，P>0.05，实验组间差异无统计学意义。各实验组内个体体重变化存在差异。纤维化形成统计：S0：(对照组10例)，S1：TAA六周组4例，S2:TAA六周组14例，

3、TAA九周组5例，S3:TAA六周组1例，TAA九周组9例，S4:TAA九周组2例。结论 本实验表明硫代乙酰胺可以诱导豚鼠肝纤维化模型。体重监测是一种无创、简便、安全、有效的监测手段。 【关键词】  肝纤维化;硫代乙酰胺;豚鼠Abstract Objective To observe guinea pigs hepatic and systemic responses to thioacetamide (TAA) during induction of hepatic fibrosis were monitored by weekly-weight changes,to explor

4、e the feasibility of inducing hepatic fibrosis model in guinea pigs.Methods Fifty healthy male guinea pigs were divided randomly into three groups:control group(n=10); experimental group(n=40):the six-weeks group(n=20) and the nine-weeks group(n=20) received continuous administration of 0.03% (w/v)

5、TAA+ 0.75% Vit-C in the drinking water.Control group (n=10) received the same concentration of 0.75% Vit-C in the drinking water.The body weights were measured weekly once at same time.Sections of liver about 5 m thickness were stained with HE and Masson trichrome and Gomori staining method.Fibrosis

6、 was classified as:S0，S1，S2，S3，S4.Statistics of all individuals in each group in the degree of hepatic fibrosis were done.Results After in-taking TAA,there was non-significant difference between experimental groups weekly,P>0.05.Each individuals body-weight has significant difference in experimen

7、tal groups.S0:control group were 10 cases;S1:TAA six-weeks group 4 cases;S2:TAA six-weeks group 14 cases,TAA nine-weeks group 5 cases;S3:TAA six-weeks group 1 cases,TAA nine-weeks group 9 cases;S4:TAA nine-weeks group 2 cases.Conclusion This experiment showed that thioacetamide can induce hepatic fi

8、brosis model in guinea pigs; Weight monitoring is a non-invasive,simple,safe and effective means of monitoring.Key words hepatic fibrosis;thioacetamide;guinea pigs本实验拟以硫代乙酰胺(TAA)诱导豚鼠肝纤维化，通过体重变化监测结合肝脏病理的改变观察此模型的动态变化，初步分析豚鼠肝纤维化诱导过程中体重变化监测的作用，初步探索建立豚鼠肝纤维化模型的可行性、稳定性，寻找简便、有效、成模过程干扰少的监测手段。1 材料与方法1.1 实验分组与

9、饲养 硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)分析纯(沈阳市试剂五厂，批号595181)。取体重在250300 g(约34周龄)健康雄性豚鼠50只，随机分成两组：对照组10只;实验组40只(其中按TAA持续作用时间分为：TAA六周组20只，TAA九周组20只)。5只/笼，分笼饲养。室温控制在22 左右，12 h明、12 h暗照明。对照组、实验组均予豚鼠基础饲料，不限量供应。对照组不限量供应750 mg/L Vit C1饮用水;实验组予含浓度为0.03%TAA+750 mg/L Vit C饮用水诱导并不限量供应，各组饮用水每天配制更换。对照组、实验组均适应性饲养1周。1.2 肝纤维化模型

10、的制作 1周后实验组始予含浓度为0.03% TAA+750 mg/L Vit C饮用水，不限量供应，配制后饮用水pH值应为6.77.2，保证TAA的化学稳定性。1.3 体重监测 按每周同一天同一时段同一体重计测体重。1.4 取材方法及处理 饲养第七周末、第十周末用同法处理TAA六周组、TAA九周组与对照组，利用乙醚吸入麻醉后，剖腹后完整取出肝脏及胆囊，放血处死。离体肝组织取自肝右外侧叶1.5 cm×1.5 cm×0.3 cm大小固定在10%甲醛固定液中，用于常规HE染色、Masson三色染色、Gomori银染色法。根据肝组织内纤维组织增生状况分为5级。统计各个体肝纤维化程度

11、。两名病理科专科医师参照2000年西安第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案中肝组织病理诊断标准2,根据肝组织内纤维组织增生状况分为5级(S0，S1，S2，S3，S4)。1.5 统计学处理 所得数据用均数±标准差(x±s)表示。用SPSS 11.0统计软件进行多组资料t检验、Fisher精确检验法，P<0.05即认为差异有显著的统计学意义。2 结果2.1 生存情况与体重监测结果2.1.1 生存情况 饲养第七周末、第十周末用同法处理TAA六周组(19例)、TAA九周组(16例)与对照组(10例)，对照组无死亡;TAA六周组死亡率5%(1/20，1只为

12、急性中毒重症肝炎死亡);TAA九周组死亡率20%(4/20，3只为豚鼠互相撕咬致死;1只为急性中毒重症肝炎死亡)。第七周末各组分为2只/笼。2.1.2 体重监测结果2.1.2.1 一般情况 对照组体重按正常变化生理规律体重逐渐上升，体重增加平稳，豚鼠毛发顺畅光泽好、食欲正常、活动正常。实验组：体重明显下降，幅度最大者超过100 g，豚鼠毛发出现蓬松、食欲不振、活动减少，以上症状尤以体重变化大者为甚。第三、四周后体重缓慢回升，以后呈小幅度升降，个别逐渐上升。豚鼠毛发色泽、食欲、活动逐渐好转。2.1.2.2 对照组与实验组组间体重均数比较 第一周：TAA六周组(304.25±22.44)

13、g、TAA九周组(303.50±36.60)g vs.对照组(317.50±39.94)g，P>0.05，各组间体重均数比较差异无统计学意义。第七周：TAA六周组(267.63±19.25)g、TAA九周组(276.56±37.36)g vs.对照组(461.00±23.19)g，P<0.05，对照组与实验各组比较差异有显著的统计学意义;TAA六周组vs. TAA九周组，P>0.05，实验组间差异无统计学意义。各实验组内个体体重变化存在差异。见图1。2.2 肝脏病理改变与纤维化分级2.2.1 大体观察 对照组肝脏质软、红润，实验组肝脏颜色不同程度变深，浅褐色，质地稍韧。2.2.2 各组肝纤维化病理分级结果 S0：对照组10例，S1：TAA六周组4例，S2:TA