RAW264.7小鼠巨噬细胞protocol

1、RAW 264.7喻珞二 $431.0百 支：郎旭库息术资刈：免费索耽支K费郝I一索取报仇RAW 2 6 4. 7细胞株得相关信息'P/*TCCMEBH襄映瑁QE 女/联手人：由TCCE嘘修河一由话：打口啊a ersr印件：口1口F3坨皿LU"I地址：»s arsier Pointei/j.,suii0上课均赤己i百以实名门.怔电厂看通生购紧障才划，让源相事购更放心.查看评情D55ig n-3tio*ic:2 B4.7npcsirr rswc -lascrtKfiB octch,Low ;2 Shipped介 naenMedium &SbM =rupm鲍Ln

2、 dorum: aiinerarw rtpertesi afiisrvi' n/ius hquseuusmflnac/fc/nrcKtoctiocMDrotiologr;fcAU&fc rtssue; dscte = Ciurcc Lkcejse: rsl ?an rrtrin luomia virus-njjc&c lumcr H Thh; m a era pti m &. Abel»on mirin e leu kem i n 喘 ru s tranafornned811g P't)duds:in acMllionm tq 口 iurfi

3、巾 口 nrnnati wh 哂叱 oticrATCC andfor rvgutatafv pfirmlls may be reguimd n)r tn a iranslQf of P'Brm iia/roTfl s :this ATDC m Me rid I. Bryons pure hasiig ATC C mstcri al 正曲 ir atefy responsible for ohtsi nhig the perm P.Please liik herefcr nformatic ”的中山加十卜 SfKcllc reuuirenerts rot snipmentio vt ur

4、 i ac.4k r. Ei。leg is H nesponje Appirauon: tranfgi;im hoslR就aptre：comp傅mentAndn H-2CJE 即审 sflon:Au；9dliIIRzanrprrnalpThis Une was establfehed from a tumor induced t>/Abelson murine eukemia virus Th«/ aie neq/ig for surface Immunoolobu In g"a (Ie-) andThrl 2 (Thy-1.2)This lire does rot

5、secrete detectable virus pa tcles and is negate n tleXC plaaceformatiDri assav The cel s wil Dinocytoseneuta 'ed and wll phscor4cse late<Comments:beacfc ard zymoean They are capable ofantioody dependent vsis or sheep crvthrocMes and lumor cell :arcels. LPS orPPDtfoatmomfor 2 days gimulatos 帕g

6、 ol ®rythrocyto« butlotwmorcollnrgots. Dota communicxocl in Feo. 200/ b/Dr Janet nirdicate? the expre$ion or infectious ecotropr MjLvciosgi/related it notIdmntca .toih。Mjloney MlLV helper vires cseJ ir the original virus ifXiculurri. *he C9 Is also express potylr用Ic M jI V. unsurprisingly

7、DMPd 口Mr隹 mouse pa=ago hitry ofthp vinn stocks Punhid 18177500ATCC complete jowtli medium: The base medium for this cell line is ATCC-fiormulaled Dulbeccois Modified Eagles Medium. CatelooNo 302002 To make the complete jroMi Hiediuian. add the folio Aira cotnponerts toPropagation:the base tnediu tn:

8、 fetal bovine serum 1o a final con certation of 10%.Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2). 5%Icmpocatiro: 37 0*CPiotocot: subcuit-roc aro prop3roc o/ecfdpingFor a Z5 cm上 ras« remove aii Dutiu mi curure rnedurr (an ust snunt accorcingi/nr orer c jin.re vasseis).Subculturlng:D slcdgo cil

9、1;fromtt p flask Gutrsham xith a cell scraper, asphatP ar d Gdd ppropnalp 才忙uo:$ erth evil suspension into new cultui vesselsSuliaikKratioi) Rrtio： A subcutzatoc rato of 1 3 toi 6 is recommerdedMeclhan Reiiewat Replace or add medium eve tv 2 tc 3 dars.Pfe$erzaticn:Freeze medium: Corrplete qrowth med

10、ium suoolernented Aith 5% 卜阂 DM80Slot ago tomporatir o: IiquiC nnrocon vapor ph2sgRelMedPfOiJJCtftRoccrnrrionciM mocium /meutwo addftoni cuppiomorts or scum csoccrioca undorATCC MGCium)ATCC 30-2002 recorrirrpn 1pc turn ATCC 3C-2O2O1'25 RalpnP N/ikoinzI Artibody-dpndFnl killing of Frythrocytn and

11、 turn。gHs by mRcrophsjp-cpIIlines enhancement by PPD aid LP3 J Immunol 119 950-954. 977 PijbMed 8940311207: RaschkeWC. etal Functional macroohage cel lines t ar sfctmed by Abelson leukemia virus. Cell 15 261-267.1978. PubMed: 21219832443: Der linger LC. et al. Recuiation 01 induable nrric oxide 5vrt

12、nasc expression bv rr«crcphaae pufirwrccoptorc and calcium J Biol Chom 271:337-342,19Q6. PcbMod: 8560683 324be: Haribi±ton j 或 wi Actwton 01 c-Jun t4-iGirninai kmse in bacterial 1 poooi/scchnce-?tmutetec macrcphace$ Proc. Natl. Acad ScLUSA 93.2774-2776 1G96 ubtfed 36 011632553 or GA.级idpnt

13、incaton of 仙op| BTPa“. r p indud rxpmspd ATPasp, rm accurnultps in response to inlerferofi gamma. J Bio Chem. 271 20399-20405,1996. PubMod: 8702770For-Profit: $2Nonprofit: $2Add to CartDulbeccbs Modified Eagle's Medium (DMEMMATCC些30-20022) 偷ATCC r Number: 30-2002Quantity: 500 mLStorage: Store m&

14、amp;dium at 2P to S'C 历 the dark when notfn useApplications:DulbecBs Modified Eag/eb Medium ©MEM) modified to contain 4 rrA Lg沁tamine,4500 m*L glucose 夕 械 sacfium pyrw融, -and 1500 中" sodijin bic&rbonate.Formulation: Fo，m川ationProduct Format: 500 mLComments:NOTE: This reduced levei

15、of sodium bicarbonate (N&HCO3, 1.5 g/L) is itend&d fa use in 5% GO2 m air. Acfditfonat sodium bicarbonate may be requtred for use / mcubators containing higher percentages of COZSubculturing ProcedureSubcultures are prepaed by scraping. For a 75 cm? flask, remove all but 10 ml culture medium

16、 (adjust amount accordingly for other culture vessels). Dislodge cells from the flask substrate with a cell scraper; aspirate and add appropriate aliquots of the cell suspension into new culture vessels.Subcultivation Ratio: 1: 3 to 1: 6Medium RenewalReplace or add medium every 2 to 3 days.Complete

17、Growth MediumThe base medium for this cell line is ATCC-fornnulated Dulbeccops Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30-2002. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium; fetal bovine serum to a final concentration of 10%This medium is formulated for use wi

18、th a 5% CO2 in air atmosphere* (Standard DMEM formulalions contain 37 g/L sodium bicarbonate and a 10% CO2 in air atmosphere is ihen recommended).ATCC tested fetal bovine serum is available as ATCCCatalog No. 30*2020 and ATCC Catalog No. 30-2021 (100mlrCryoprotectant MediumComplete growth medium des

19、cribed above supplemented with 5% (v/v) DMSO.ATCC 美国模式培养物集存库 (Am e rican t y p e c ul t ure c o ll e c t ion)得简写 收到冷冻管细胞得处理方式1、 收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管就是否有解冻情形，若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养，或立即冷冻保存(置于-70 C,隔夜后，移到液氮)。2、 收到T25 flask 细胞得处理方式于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T2 5 f 1 ask均加满培养基。2、1、检查fl ask外观，并于显微镜下观察细胞生长状况与有无污染现象，若

20、有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。2、2、将原封之T 25 f 1 ask静置于3 7 c , 5% C02培养箱中，使细胞回温至3 7C,并让运送过程中少数脱落得细胞可再附着生长.2、3、隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，仅留约510ml培养基于flask内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘，则将细胞做传代培养。RAW2 6 4、7 细胞株得C el 1 Cu 1 t ure一、RAW 2 64、7细胞培养得特点1、RA W26 4、7细胞一般为圆形或椭圆形，功能活跃时，可呈多突形。细胞核为圆形或椭圆形，染色较深。贴壁

21、特别牢固。2、RA W264 7具有很强得吞噬能力，当吞噬抗原后，细胞会释放趋化因子,进一步促进细胞 伸出伪足，增强粘附攀爬能力。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促进该细胞呈现梭形、 长梭形，镜下会瞧到具有细长伪足得小细胞被类似上皮得梭形大细胞取代。3、每次传代都很难消化下来.用力过大则对细胞损伤较大，这种细胞传代时接种密度要大 ， 否则容易使巨噬细胞向终末细胞分化，细胞变成长形，并且不能回复，这就是培养这种细胞时最需要注意得问题。4、对于R AW264 7细胞她得声场时喜欢结伴。正常生长状态应该就是一小片一小片得生长，片片之间不连接，等到长到更多更密得时候会连成大片，并且会叠加成层。所以，

22、要很好地控制好细胞得生长速度，不要等到叠加成层得时候再传代。5、RAW 2 6 4、7细胞传代后贴壁时间较短，半小时就能贴很多，刚贴壁就是细胞呈圆形 折光度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于瓶底面。生长一段时间后，部分细胞会变成类似四角形，伸出伪足之类得.这个时候就就是提醒您注意传代了，这部分细胞如再不传代，很容易就老化掉.RAW 2 6 4、7细胞传代1）将培养瓶内旧得培养液弃掉 ,然后用D- Hank s液洗两次，（一定要洗干净，以免影响胰酶得消化作用）Hankt'H«nks'I- H*tJce *D- Karki'DPBSPBS1D*FE£

23、含钙谖含钙镶，不含钙谎不含钙诵不含钙镶不含钙读不含钙潼含酣红不含防红含册工不含睇I不含酎红不含SSI不含酎红旌g/Lg/L述“匕66e33BGDNa2J1F0,10Q. 126。.怀Q. IZ60.12&2.92.9E9NaH2P04 - 2H2O00G0000KCI0.40.4G 40.40.20,2£用磔口4a哪0,050. 06u.oe0.2。.工42.4H5S040.0980.096cQ00口：CaC120.140.14c0a00A葡萄糠1111000酎红0.0100 Cl0000添加玳口 30.350.350.350.35舞fl02）加入0、2 5 %胰酶一EDTA

24、消化,2 5cm培养瓶加0、4ml ,37度消化5mi n ,镜下瞧到细胞变圆，间隙增大.（值得注意得就是该细胞对机械损伤比较敏感 ）3）立即加含1 0 %FC S得培养液终止消化， 用细胞刮刀轻刮，注意，这时候用吸管吹不下来， 但就是刮刀却很容易刮下来，而且对细胞得损伤极小4）离心，弃上清，加新得培养液（10 % F CS，小心吹匀，分装入新得培养瓶三、R AW2 6 4、7细胞冻存及复苏说魏畸划飘电m瘦僦肪枷蠲髓洞）8脚桐就岫it, 10WM9Qi他嵯施也牖掩鼾C加心雪跳人那G H砺导烟禽醐繇斛omms楙棚曲邮微睛1唧额帆槌糊味应蟠必福洲刎既（一）细胞冻存1、配制冻存培养液；（通用得为培养

25、基：血清：DMS & 7:2: 1 ,但其中得血清可 进行调整，如上面得仁兄用得4 : 5 : 1 ,比例过高 ）2、取对数生长期得细胞（冻存前一天换液），用胰蛋白酶把单层生长得细胞消化下来，悬浮生长得细胞则直接将细胞移至1 5 ml离心管中；3、 离心 1 0 00rpm, 5 mi n ;4、去除胰蛋白酶及旧得培养液，加入适量配制好得冻存培养液 ，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞得最终密度为5 X 106/mlixi07/ml；5、将细胞分装入冻存管中，每管11、5 m 1（不超过冻存管容量得 80%）;6、在冻存管上标明细胞得名称，冻存时间及操作者；7、 冻存：标

26、准得冻存程序为降温速率一1-2 C/ mi n；当温度达-25 C以下时，可增至-5C10C/ min;到一10 0 C时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞得冻存管放入20C冰箱2h ,然后放入-7 0C冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内.（具体操作为4° C 2 Omin,20 ° C30mi n, 7 0c过夜，转入液氮中）（二）细胞复苏1、从液氮容器中取出冻存管，直接浸入3 7c温水中，并不时摇动令其尽快融化。（1m i n以内溶解完毕，不能将口进入水面下）2、从3 7c水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；3、

27、离心， 1 0 0 0rpm,5 m i n;4、 弃去上清液，加入含1 0 %小牛血清培养液重悬细胞 ，计数，调整细胞密度，接种培养瓶,3 7 c培养箱静置培养；（复苏时细胞密度稍大，可提高复苏效率）5、 次日更换一次培养液，继续培养.（可更换一半培养液，避免跨度太大，影响细胞状态）（三）接种总结下各种孔板组胞接种量仅供参考细胞培养瓶（板）接种量生长面枳容量组胞数（大约）9说板4-5X10 435mm培养皿1X10648孔板1.3X 10 560mm培养皿2.6X10 624孔板2.5X10 5100mm培养皿7X10612孔板5X 105150mm培养皿1.8X1076孔板1.2X 10

28、6细胞瓶面积容量工作体枳细胞数目12.5cm225ml2ml5X10525cm250ml5ml1X106355n275mllOnil2X10 675 cm2250ml15ml4X 10 6150cm2700ml40ml1.1X107补充：不同孔板所加培养液的液而都不宜太深，一般在23mm范围，结合不同 孔的底面积就可算出件培养孔的适宜加液量（参考下表）。若加液量过多会影响 气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染1具体所加细胞密度依实 验的目的不同灵活掌握，传代细胞接种密度及接种量参考Siuface Area (匚 1113a5 .01103 cnP*6.01:103 cntotal

29、volume ot mechuni96- well*0.32p1600p180024-well2.001.00*10%130X10%0.54(0.7>12-welk4.012.00X10%2.40 X 10%6-well1X10%5.56 X 1042-3(2, ?>OOnini28必1.41X101.70X 10 号3-5(5卜T2?p25.00/L25XW1.50 X 10 办4-5(5)T75p75.00/3.75 X1M4,50 X 10412-15(15 pTl175 g575X10L05X10%35-40(40 州培养器皿底面积（媪”加培养液量（立）口可

30、获细胞量口&e孔培养板40.32丸产1出孔培养板2/105父1由L二孔培养板一4 6*E.3/6孔培养板口9. 6甲工5口2 5X*4孔培养板口薪5.W7X10%3. tan培养皿甲配3. W2 QX1OV6cH诘养皿一2产5.E5 2X1 69cd 皿 a4期10- or12.2X1(TpL。/培养皿5510.13.7X125 cm塑料培春瓶2*5.M5K10175国塑料培养瓶75iHsop2X1%25 cm玻璃培春瓶JL*Lg3X1OV100b玻璃培养瓶Q37.10. 0EfiX10s.'25。5玻璃培养瓶口,15. 0U2X1皿2600s旋转培养瓶+7clM10。“25

31、g2.四、RAW264、7细胞形态不好时得处理方法1、倒掉旧得培养基，加入3ml新得培养基（有无血清得都可）洗涤一次 ，用滴管吸走，然后再加入3 ml得培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍 ，然后吸走。这时侯再开始正式得消化、吹打。 ？2、把吹打下来得细胞悬液加入到新得培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。1。分 钟观察一次，2 0分钟,30分钟观察一次.选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁得情况下 ，重 新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中得培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。 然后加入完全培养基培养.后续观察细胞生长情况以及形态。

32、我称之为“二传”。3、如果一次效果还不理想，可重复多次.直到找到细胞完美形态。其中要注意 ，结合细 胞喜欢得生长情况。喜欢多一点数量长得好得细胞就等贴壁细胞比较多点得时候再传。反之亦然。不明之处：培养之前，一切与细胞接触得玻璃器皿与器具都要进行过去热源处理。（2 0 0-250 C 烘烤 46h）?RAW 2 64、7 细胞株 Cel 1 Culture 得材料（一）仪器1、净化工作台2、离心机3、恒温水浴箱4、 冰箱（4C、 20C、70 C）5、倒置相差显微镜6、 培养箱7、液氮冰箱（二）玻璃器皿1、吸管（弯头、直头）2、培养瓶3、 玻璃瓶（2 5 0 ml、100ml ）4、废液缸（三）

33、塑料器皿1、吸头2、 枪头3、胶塞4、 移液管（10 ml）5、 15ml离心管6、 冻存管（12ml） （四）其她物品1、微量加样枪2、红血球计数板3、记号笔4、医用橡皮膏5、 移液枪（五）试剂1、 D Hank s 液2、 胎牛血清3、培养液4、 双抗（青霉素、链霉素） 5、 胰蛋白酶（0、2 5%）6、7、4 %NaHCO37、 D MSO（分析纯）或无色新鲜甘油附1、胎牛血清品牌整理第一类，最高级别，就是专门用于干细胞得特级胎牛血清1、Hy c 1 o ne得特级胎牛血清目前，性能最好得血清，还就是要说说H ycl one得特级胎牛血清，货号就是S H30070、03,它就是H yc

34、1 o n e得招牌菜？Hyclone特级胎牛血清（D e fine d FB S ）,货号SH30 0 7 0，就是世界上唯一经过40纳米过滤得顶级胎牛血清， 极佳得促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量<10EITm 1 ,血红蛋白含量<1 0mg/dlo此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系得培养。2、Gibc。得特级胎牛血清？稍次一点得就是G 1 bco公司在美国原装生产得特 级胎牛血清，这款血清，货号就是1 6000 -04 4 ,就是10 0nm过滤3次，内 毒素与血红蛋白含量都可以与 Hycl o ne得S H 30070、03相媲美.也可以用于培 养大部分

35、得干细胞系。同样就是美国来源，所以渠道特殊。3、T CB 得特级胎牛血清?TC B （Tissue Culture Bi o lo gic a ls）公司作为 一家生物行业类得著名供应商，成立于1978年，大部分血清得采集与加工都在加 利福尼亚。每一批得原材料都经过严格筛选，所有得产品都在FDA认证得cGMP车间进行！ 4?、 B 1 oi n d特优级胎牛血清？血源来自北美与澳大利亚 Bi o I nd公司得生产完全符合GM P得要求，并通过ISO 9 0 00: 200 1与ISO13485: 2 003质量认证。以安全，稳定，高效为原则得BioI n d公司，所有得产品 质量均完全符合国

36、际标准。Bi ological Indu s tries主营细胞培养类产品，B1 o Ind工厂加工得胎牛血清均符合 USDA标准及欧洲标准血清。根据美国农业部标准，原始血清均采自未发生疯牛病（BSE）与口蹄疫（FMD）疫情得国家。B i ological In d ustri e s三步滤菌处理法，最后得过滤步骤为连续通过三个100纳米得滤膜。血清生产得洁净级别为1 0 0级。所有分装工作台都通过高效微粒 空气过滤器过滤， 并保持正压分装环境要对总微粒、 悬浮微粒数与压力进行监控。分装之后,终产品迅速-20 度冻存，并隔离,直到所有得质量控制检测完成。第二类，优等胎牛血清1、H y clon

37、e得加拿大优等胎牛血清？性价比最高得就是Hyclone加拿大优等胎 牛血清（Char a cterizendFBS） S H30 3 96、0 3 血清采自加拿大，由 hycl one 公司总部得员工采集加工，采集方法, 加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致,市场价格低于美国原产得。经过3 次 100nm 过滤，内毒素含量025EU/ml,血红蛋白含量025 m g/dl2、Hy c lo n e得南美优级胎牛血清 认体与加拿大得优等血清就是一样得，级别 也非常相似，货号就是sv30O87、02,该胎牛血清来源于南美洲，以封闭得心脏穿 刺方式采集，产品经3次100nm 过滤，经严格

38、检测确保无支原体，细菌病毒检测 依据美国药典（USP）与美国联邦法规第九篇（9CFR）,内毒素含量10 EU/ ml,血红蛋白含量02 0 mg/dl,完全符合美国 HyClonc&rcg；优等胎牛血清 得检测标准.3?、G 1 bco得澳大利亚胎牛血清？情况与Hyc 1 one得澳大利亚 胎牛血清差不多，市场价也就是3 200元/5 0 0m 1左右。这一级别得血清,也能用于干细胞培养，可就是，不象特级胎牛血清那么优秀。因为， 此胎牛血清属于澳大利亚生产得,不在疫区,可以正常报关进口,目前没有受到任何影响，所以 ,就目前而言，算就是最好得胎牛血清了 ,有不少客户都此血清来培养干细胞,

39、效果还就是比较不错。4?、 TCB 得优级胎牛血清情况与Hyc 1 one得澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也就是2 300元/500ml左 右。这一级别得血清,也能用于干细胞培养,可就是,不象特级胎牛血清那么优秀。第三类，一般级别得进口胎牛血清1?、Hyclone得南美胎牛血清？目前，市场上用 得最多得Hyclone血清就是南美胎牛血清（FBS） SV3O 087，此血清采自南美， 在国内（兰州）过滤并测试检验，经三次100 纳米过滤，根据中国商标法得规定标贴中文标签，内毒素含量 10EU/ml,血红蛋白含量2 0mg/d。？此血清广泛 用于各种肿瘤细胞得培养，还没有资料记载能够用于干细胞,也

40、听说有少数人用于干细胞培养得，不过，因为本身血红素比较高，所以，最好不要用于干细胞，？2、Gibco得南美胎牛血清？这款血清，就是G ibco针对Hy c 1 o n e南美胎牛血清 做得，价格比较贵，好像就是1780元/ 5 00m。3、Ge mini得胎牛血清4、TCB得胎牛血清5、P A A得胎牛血清6?、J R H澳洲胎牛血清第四类，国产得各种系列胎牛血清？国产得胎牛血清，国内没有严格意义得胎牛血 清,胎牛血清本身就是需要穿刺取血得，而国内都就是剖腹产出胎牛,8小时左右取 血，然后，进行过滤分装.所以，国产得胎牛血清不就是严格意义得胎牛血清。？价格便宜但就是遇到得问题非常多。附2、 H

41、 y c lone液体培养基普通液体培养基列表1苗述货号包装储存温度BM E培养基(Basal M e di u m Eagle)EBSS *，含L一谷氨酰胺。 S H 3 0157、0 1500 ml2 -8 COSH3 0 157、021000ml2-8CDM E M 培养基(D u 1 becco ' s M o di f ied Eag 1 e' s Medi m )高糖，含4、0 mM L一谷氨酰胺，不含丙酮酸钠。 SH300 2 2、01B50 0 ml2- 8 S H 30 0 22、F S6 x 5 00 ml2 8CSH 3 0022、02B100 0 ml2

42、 -8 SH300 2 2、L S6 x 10 0 0ml2 8C高糖，不含L一谷氨酰胺与丙酮酸钠。 SH3 0 0 8 1、01500 ml2 8CSH30081、F S6 x 500 ml2-8C SH 3 0081、0 21 0 0 0 ml2 8CSH30 0 8 1、L S6x 1 0 00ml2 8C。S H30081、 0320 L袋装2-8O SH 3 0081、0410 L袋装2 8 °C高糖，含4、0 mM L 谷氨酰胺、丙酮酸钠.S H 30 2 43、01B5 00 ml2 -8 CS H3 0 243、FS6 x 50 0ml2 8CS H3 0 2 43、

43、021 0 00 m 128 CS H30 2 4 3、 LS6 x 1 00 0 m 12 8CC5H30 2 43、031 0 L袋装2 -8 °COS H 3 02 4 3、0 420 L袋装2-8 C高糖，含L一谷氨酰胺、HE PES,不含丙酮酸钠。SH30249、 01500 ml2 8CS H30249、 02100 0 ml2 8C高糖，不含钙、镁。SH30262、0 1500 ml2-8 QH30262l_0_2_100 0 ml2 8高糖，含L一谷氨酰胺，不含酚红与丙酮酸钠。S H302 8 4、015 0 0 m l2 8CSH 3 0 284、0 2100 0

44、ml2 8C高糖,含丙酮酸钠，不含L-谷氨酰胺。S H 3 0285、0 1500 ml2 -8 <SH3_02_851_F_S6 x 500 ml2-8 CSH30 2 85、02100 0 m 12 8CSH30285、 LS6 x 1000 ml2 8CQH3Q2_8_5r_0J_20 L袋装2 - 86H 3 0 285、0 41 0 L袋装28 C高糖,改良型，不含酚红、丙酮酸钠、L -谷氨酰胺。6H 3 05 85、0 1500 ml2-8 CSH3 0 5 85、02100 0 ml2-8 C高糖,改良型，不含酚红、L一谷氨酰胺 含丙酮酸钠.SH3O 604、0 1500

45、ml2 8CSH30 6 0 4、0 21000 m 128 C高糖,含丙酮酸钠，不含L-谷氨酰胺、甲硫氨酸、胱氨酸。6H3 0 6 0 6、0150 0 ml2-8 C6H 3 0 606、021 00 0 ml2 8C高度改良，含丙酮酸钠、25 mM HEPES,不含L-谷氨酰胺。6H30563、0 150 0 ml2-8COS H3 0 5 6 3、021 0 00 ml28 C高糖,含丙酮酸钠，不含L 一谷氨酰胺、磷酸盐.QH306_021_015 0 0 ml28 C低糖，含4、0 mM L 一谷氨酰胺、110 mg丙酮酸钠。SH30 0 21、0 1 B500 ml2 8CSH 3

46、 0 021、FSSH300 2 1、0 26 x 500 ml1000 ml2 8C2 8C含 2、50 mM L-谷氨酰胺、1 5 mM H EPESoS H30023、 01 B500 m 12-8 CSH 3 0023、F SS H .3 00 2 3、026 x 50 0m l1000 ml2 -8 °C2- 8 C含H E PES不含L 一谷氨酰胺。S H 3 012 6、0150 0 ml2 -8 CS H .3 0 1 2 6、F S6 x 5 0 0 ml2 8CSH30126、021 0 0 0 m 12 8含L-谷氨酰胺、H EPES、丙酮酸钠。S H30261

47、、 0 15 0 0 ml2 8CSH 3 0 2 6 1、0 21000 ml2 8C含L-谷氨酰胺，不含H EP E SoSH3 0 2 7 1、0 1500 ml2 8CSH3 0 2 7 1、F S6 x 5 0 0 ml2 81SH30 2 71、021000 ml2 -8 C含L一谷氨酰胺，不含HEPES、酚红。SH302 7 2、0 1SH30272、n 2500 ml1 0 0 0 ml2 82 8CH a m"s 培养基(Harri s Nutrient M i x t ure)F 10培养基，含L 一谷氨酰胺。S H3 0 0 2 5、0150 0 ml2-8 C

48、6H 30025、02100 0 m 12 8C二12培养基，含1、00 mM L一谷氨酰胺。，1XSH300 2 6、0 1 B500 ml2 8CSH300 2 6、F S6 x 50 0m 12- 8 CS H3 0 0 26、021000 ml2- 8 CF 12培养基,Ka 1 ghn"s改良型。SH3 0 526、0 150 0 ml2-8C6H30 5 26、021 0 0 0 m 12-8 C昆虫培养基 (I n sect Me d i a)Grace”无添加剂培养基TNM FH培养基OS H30 6 1 0 > 01500 ml2 8C6H3061 0、0 2

49、1 0 0 0 ml2 8CSH3 0 2 8 0、025 0 0 m l2 8CSH3028O、0 3100 0 m l2- 8 CI MDM 培养基(Is c ove" s M o dified D u lb e cco"s Med i um )含L谷氨酰胺、HEPES,不含a一硫代甘油.SH 30228、0 1B50 0 m l2 -8 SH 3 0 2 2 8、FS6 x5 0 0 m12-8 CSH302 2 8、0 21 0 00 ml2 8C不含L 一谷氨酰胺.SH 3 02 5 9、01500 m 12 8CSH 3 02 5 9、02100 0 ml28L

50、eibovitz 培养基 (Leibovitz Medium) 15培养基，含2、0 5 mM L一谷氨酰胺。SH30525、 0150 0 m 12 8CSH30 5 25、0 21000 ml2 8CM199 培养基 (Medi um 199)EBSS* ,含L -谷氨酰胺.SH 3 0 253、0 1 B5 00 ml2 8C6H30253、FS6 x 50 0m l2-8 SH3025 3、021 0 00 ml2 -8 CHBSS* ,含L 一谷氨酰胺.OS H30 2 33、01100 ml2 8C6H 3 023 3、0 250 0 ml2 -8 CHBSS*,含L-谷氨酰胺、L

51、 一氨基酸。McCoy”s 5A 培养基 (McC o y” s 5 A Med i u m )CSH30 3 3 0、0150 0 m l2 86H30330、02100 0 ml2 8C含L-谷氨酰胺。SH 3 02 0 0、0 1500 ml2 8CSH 3 0 2 00、FS6 x 5 00 ml2 8CS H3020 0、0 21000 ml2-8C含L-谷氨酰胺，不含酚红。SH30270、0 1OS H3 0 270、02500 ml100 0 ml2 8C2- 8 C含L一谷氨酰胺、H EPES.CSH30_6_0_2_0J5 0 0 ml28 CC5H 306 0 2、0 21

52、 0 00 m l2- 8 C6H30602、03100 ml2 8MEM 培养基(M i nim u m E s s ent i al Mediu m)EB S S*,含2、0 mM L-谷氨酰胺。SH3002 4、0 1 B50 0 ml2 8CS H 3 0024、FS6x500m 128 CSH30O24、0 21 000 m 12 8CSH30 0 2 4、L S6 x 1 000m l28 CEBSS* ,含L 一谷氨酰胺，用于悬浮培养。6H 30 2 35、0 150 0 ml2 8CCH 30235 > 0 21000 ml2 8 °CEB SS*,不含L -谷

53、氨酰胺。S H302 4 4、0150 0 ml28SH30 2 44、F S6 x 50 0m l2 8CSH3 0 244、0 21000 ml2 8COS H3 0 244、L S6 x 1 0 00m 12-8 a改良型，含L一谷氨酰胺、核糖核普及脱氧核糖核普。SH30265、0 1 B50 0 ml2- 8 CS H302 6 5、02100 0 ml2- 8 CS H30265、 FS6 x 500 ml28 Ca改良型，不含L 一谷氨酰胺、核糖核普及脱氧核糖核普。SH3 0 5 6 8、01500 ml2- 8 CC5H 3 056 8、FS6x500 m 12 8 °C6H 3 05 6 8、021 0 0 0 ml2 8CR 1 ch t er" s改良型，不含酚红。OS H3060 O、0 1500 ml2 8COS H30600、 02100 0 m l2 8CRichte r " s改良型，含L -谷氨酰胺、酚红。SH3 0 601、01500 ml2 8CCSH30601、0 21 0 00 ml2-8 C用于悬浮培养，不含L 谷氨酰胺、氯化钙及镁。CSH 3 0603、0 150 0 m 12-8 CCSH 30 6 0 3、02100 0 ml2 8CRPMI 1640 培养基(RPMI