高效液相色谱法测定犬血清中加替沙星的浓度及其药动学_徐勤

1、 用。这与用分子杂交和放射自显影测定的雌二醇对心房肌细胞心钠素基因表达的促进作用结果是相似的。实验中双侧卵巢切除后小剂量使用雌二醇(雌二醇1组可使心肌细胞内颗粒含量几乎恢复到伪卵巢手术组水平;随剂量增加,胞内颗粒含量呈量效关系增加,但雌二醇3组的颗粒并未明显增加。提示外源性雌二醇的应用对特殊颗粒合成、储存的促进作用表现出剂量依赖性,但又不完全平行。可能与受体含量及激素受体饱和度有关,有实验表明,过多激素反而造成相应受体含量减少。本组实验结果提示,小剂量雌二醇可使大鼠心钠素水平恢复正常,为绝经期妇女使用小剂量雌二醇替代治疗提供了一个理论依据。心钠素还有强大的利尿作用,使肾小球滤过率升高,但不影响

2、各种离子在其他肾小管部位的转运,不造成酸碱平衡紊乱,是个理想的利尿剂。雌激素在上述女性生理、病理生理过程中可引起水钠潴留,同时又明显促进心钠素的合成,增加水钠排出,这对维持体液平衡有重要作用。本研究为临床解释某些与雌激素有关的疾病(冠心病、高血压、妊娠和口服避孕药引起的水钠潴留的产生机制及心钠素用于临床治疗提供理论依据。参考文献:1Maffei S ,Clerico A ,Iervasi G ,et al .Circulating levels of cardiacnatriuretic hormones measured in women during menstrual cycle J .

3、J Endocrinol Invest ,1999,22(1:1.2Cho MM ,Z iats NP ,Pal D ,et al .Estrogen modulates paracellularpermeahility of human endothelial cells by eNOS and iNOS 2related mechanismsJ .Am J Physiol ,1999,276(2pt 1:C3372349.3Anstead GM ,Carlson KE ,Katzenllenboger JA.The estradiol pha 2rmacophore :ligand str

4、uctuee 2estrogen receptor binding affinity re 2latiponships and a model for the receptor binding site J .Steroids ,1997,62:2682303.收稿日期2003211227基金项目广西自然科学基金资助项目作者简介徐勤,女,硕士,讲师,电话:0773-*高效液相色谱法测定犬血清中加替沙星的浓度及其药动学徐勤1,邓立东2(1.桂林医学院药物分析教研室,广西桂林541004;2.桂林医学院附属医院,广西桂林541001摘要目的:建立加替沙星犬血药浓度的高效液相色谱分析方法。方法:待测

5、血清中加入盐酸加替沙星与内标环丙沙星后,用二氯甲烷提取,进行高效液相紫外检测,色谱柱为Sphweisorb ODS 柱(5m ,200mm 4.6mm ;流动相为0.02mol L -1磷酸二氢钾缓冲液2甲醇2三乙胺(5544.50.5,p H 为3.1;流速1.0mL min -1,检测波长为293nm 。结果:血药浓度的线性范围为0.110mg L -1,相关系数为0.9983,血清的相对回收率为91.4%98.7%,绝对回收率为78.5%92.4%,日内日间变异均小于10%,血清中加替沙星的最低检测限为0.04mg L -1。结论:该法测定犬血清中药物浓度灵敏、可靠,可推广用于加替沙星的

6、药动学和生物利用度研究。关键词加替沙星;高效液相色谱法;血药浓度;药动学中图分类号R969文献标识码A 文章编号100125213(20040920539203Study on the determination of gatifloxacin in dog serum by HPLC and its pharmacokineticsXU Qin ,DEN G Li 2dong (Department of Pharmaceutical Analysis ,Guilin Medical College ,Guangxi Guilin 541004,China ABSTRACT :OB JECT

7、IVE To establish an HPLC method for determination of gatifloxacin in dog serum.METH ODS A simple ac 2curate and reproducible procedure with methylene chloride was employed for extraction of serum sample.The chromatographic condi 2tions were :Sphweisorb column (C 18,5m ,200mm 4.6mm ,0.02mol L -1phosp

8、hate buffer 2methanol 2triethylamine (5544.50.5,p H 3.1as mobile phase at 1.0mL min -1.Detective wavelength was 293nm.Ciprofloxacin was the internal stan 2dard.RESU LTS The drug serum concentration of gatifloxacin was in well linearity in the ranges of 0.1-10mg L -1by HPLCmethod with correlation coe

9、fficients of 0.9983.The detective limit of gatifloxacin was 0.04mg L -1.The absolute and relative re 2coveries of gatifloxacin in serum were 78.5%-92.4%and 91.4%-98.7%,respectively.The within day and between day derivation (RSD in the serum were less than 10%.CONC L USION The method is simple with h

10、igh sensitivity and can be used for investigating the pharmacokinetics of gatifloxacin.KE Y WOR DS :gatifloxacin ;HPLC ;blood concentration ;pharmacokinetics加替沙星(gatifloxacin ,GTFX 是日本杏林制药公司继诺氟沙星、氟罗沙星之后研制开发的又一新型氟喹诺酮类抗菌药,为氟喹诺酮的C 7位用32甲基哌嗪基取代的衍生物,具有抗菌谱广,抗菌活性强的特点。对革兰阳性菌和革兰阴性菌、厌氧菌、需氧菌及非典型性致病原均有较强活性,而且没有

11、潜在的光敏不良反应13。参考有关文献4,建立了测定犬血清GTFX 浓度的高效液相色谱方法。适用于GTFX 的药物动力学及生物利用度研究。1仪器及试药HP -1100高效液相色谱系统,紫外检测器,柱温箱,威玛色谱工作站;GTFX 对照品(含量为99.9%,四川恒瑞制药有限公司,批号000516;环丙沙星(内标,含量99.0%,四川抗生素研究所,批号000426;甲醇为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。2方法和结果2.1色谱条件色谱柱:Sphweisorb ODS 柱(5m ,200mm 4.6mm ;流动相:0.02mol L -1磷酸二氢钾缓冲液2甲醇2三乙胺(5544.50.5,p H

12、 为3.1;流速:1.0mL min -1;柱温:35;检测波长:293nm ;灵敏度:10;进样量:20L 。在选定的色谱条件下测得的色谱图见图1。由图1可见,内标与加替沙星的保留时间分别为4.1和5.4min ,两者峰形良好,分离完全,无杂质峰干扰 。图1色谱图12内标(internal standard :t R1=4.1min ;22GTFX :t R2=5.4min ;A.空白血清;B.血清加标准品;C.血清样品Fig 1ChromatogramA.blank serum ;B.serum +standard ;C.sample of serum2.2溶液配制精密称取GTFX 对照品

13、20mg ,置100mL 量瓶中,用0.05mol L -1磷酸盐缓冲液(p H 7.0溶解并定容成200mg L -1标准贮备液。取5mL 于100mL 量瓶中用0.05mol L -1磷酸盐缓冲液(p H 7.0稀释至刻度,使成10mg L -1标准溶液备用。另称取环丙沙星(内标,ciprofloxacin ,CPFX 适量,置于 50mL 量瓶中用水溶解,并加至刻度,混匀。取该液4mL 置于50mL 量瓶中用水稀释至刻度,混匀后成80mg L -1的内标液。2.3血清样品预处理取健康犬血清200L 置10mL 离心管中,加入80mg L -1CPFX 液10L 、纯化水90L 、p H

14、7.0磷酸盐缓冲液0.5mL 、二氯甲烷5mL 混合,漩涡振荡2min ,3500r min -1离心20min 。吸取下层有机相200L ,真空40抽干,加入1.0mol L -1盐酸200L ,漩涡振荡1min ,20L 进样。2.4标准曲线制备精密量取GTFX 标准贮备液,用血清稀释成浓度为10.0,5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1mg L -1的GTFX 标准工作液,按样品处理项下方法处理后进样分析,以GTFX 峰面积与CPFX 峰面积的比值(Y 对浓度(X 进行线性回归,得血清中GTFX 标准曲线回归方程(n =5:Y =1.7683X +0.4743,r =0.99

15、88。线形范围为0.110mg L -1,检测限为0.04mg L -1(S/N 3。 2.5回收率及精密度试验按上述方法,配制高、中、低3个浓度(10,1.0,0.1mg L -1的血样,按血样处理方法处理后进样,由标准曲线求出各血样浓度,各点浓度测定5次,将求得的浓度与已知加入浓度相比,计算血清中GTFX 的相对回收率。另用1.0mol L -1盐酸溶液配制相应浓度GTFX 溶液,直接进相同量的样,以此为标准,将两组峰面积进行比较计算GTFX 在血清中的绝对回收率。日内浓度测定5次,并连续测定5d ,计算日内日间精密度。结果见表1。表1GTFX 血清回收率及精密度测定结果(n =5Tab

16、1Results of recovery and accuracy of intra 2day and inter 2day (n =5浓度/mg L -1相对回收率/%绝对回收率/%精密度(RSD /%日内日间1091.42.292.43.8 2.3 3.61.099.22.386.62.3 2.5 5.70.198.74.678.55.44.79.42.6药动学研究给药前禁食12h ,药物混于少许肉汤中饲服,剂量为5,10,20mg kg -1,每剂量组6只动物。分别于给药前及给药后0.25,0.5,0.75,1,2,3,4,8,12,16,24h 从动物前肢静脉取血,37保温30min

17、后离心分离血清。上述方法处理后进样,测定药物浓度。犬口服高、中、低剂量加替沙星的各时间点血药浓度与剂量呈线性关系,给药后24h 仍保持一定的血药浓度,其药时曲线见图2。经3P97程序计算该药物药动学符合一室模型,该药在犬体内吸收迅速,消除半衰期较长,AUC 与剂量呈正比,见表2。图2狗口服GTFX 的药时曲线(n =6Fig 2Concentrations 2time curves of GTFX after oral administration in dogs (n =6表2GTFX 犬口服药物动力学参数(n =6Tab 2Pharmacokinetic parameters of GTF

18、X after oral administration in dogs (n =6剂量/mg kg -1K a /h -1t 1/2ka /ht 1/2ke /hCL/F/mg (kg h -1V/F/mL AUC 024/mg h L -1C max /mg L -1T max /h52.660.26 5.700.252.1419.422.11 1.2510 2.070.41 6.480.28 2.6536.183.20 1.80201.800.377.330.202.08105.488.72 1.633讨论3.1流动相的选择以不同的配比进行反复试验,发现甲醇20.02mol L -1磷酸二

19、氢钾缓冲液(4555为流动相时,样品分离较好;在此比例下,考察了缓冲液的p H ,当p H 为4.0,4.5时,主峰出峰时间明显延长,1h 时未见主峰;当p H为3.5时,样品分离较好但主峰出峰时间较长;p H 为3.1时,样品分离较好且大大缩短分析时间(约7min ;将三乙胺加到甲醇中再与0.02mol L-1磷酸二氢钾缓冲液混合,且其加入量为0.5%时,可明显改善拖尾。3.2乳化现象用乙醚、醋酸乙酯提取时,提取率很低;用二氯甲烷提取2次,每次用量3mL 时,易产生乳化现象。为解决提取过程中的乳化问题,我们将p H 7.0磷酸盐缓冲液的量减至0.5mL ,加入二氯甲烷5mL 一次性提取,改变

20、其水相与油相比例,从而可避免乳化现象的产生。二氯甲烷提取物用1mol L -1的盐酸液溶解,GTFX 和CPFX 完全溶解,峰形良好且分离完全;若改用流动相溶解,因流动相中含有甲醇,加替沙星有前延峰出现,且出峰时间较长(约14min ,而内标不出峰;故提取物用1mol L -1的盐酸液溶解后进样。参考文献:1Perry CM ,BF ,Lamb HM ,et al .G atifloxacinJ .Drugs ,1999,58(4:683.2DU Yu ,GUO Hui 2yuan.A new fluoroquinolone antibiotic withextended antibacter

21、ial activity 2gatifloxacin J .World Notes onAntibiotics ,2001,22(1:34.3孙涛,宋坤改,林赴田.盐酸加替沙星的药代动力学研究J .中国新药杂志,2000,9(11:758.4朱曼,王睿,方翼,等.人体血浆及尿液中甲磺酸加替沙星浓度的HPLC 测定法J .药物分析杂志,2003,23(1:53.收稿日期2003211220 作者简介王西平,男,主任医师,电话:020-*,E 2mail :wxp113839益欣康泰胶囊对冠心病心绞痛的疗效及其对血浆内皮素和一氧化氮水平的影响王西平,韦建瑞,郭晓碧(广州市红十字会医院,广东广州51

22、0220摘要目的:研究益欣康泰胶囊对冠心病心绞痛患者的临床疗效及其对血浆内皮素(ET 和一氧化氮(NO 水平的影响。方法:选择100例冠心病心绞痛的住院老年患者,随机分为两组,每组各50例。两组患者均采用常规的口服抗心绞痛药物治疗,其中治疗组加用益欣康泰胶囊1.5g ,tid ,连用4周。结果:治疗组(益欣康泰组临床总有效率为86%,心电图总有效率为80%,对照组分别为70%和60%,两组比较差异有显著性(P 0.05。结论:益欣康泰具有改善冠心病心绞痛患者的临床症状和内皮功能的作用。关键词益欣康泰;心绞痛;内皮素;一氧化氮中图分类号R969文献标识码A 文章编号100125213(20040

23、920541202E ffect of Yixin K angtai capsule on plasma endothelins and nitric oxides in patients with angina pectoris of coronary heart diseaseWAN G Xi 2ping ,WEI Jian 2rui ,GUO Xiao 2bi (Guangzhou Red Cross Hospital ,Guangdong Guangzhou 510220,China ABSTRACT :OB JECTIVE To investigate the effect of y

24、ixinkangtai capsule on plasma endothelins (ET and nitrogen monoxides (NO in patients with angina pectoris of coronary heart disease.METH ODS 100old 2age patients had been confirmed with angina pectoris have been randomized divided into two groups (treated group and control group ,50Patients in each group.Two groups have been treated with ordinary oral anti 2angina medicines.The treeted gronp received both ordinary and Y ixin K angtai capsule treatment ,1.5g ,three tine