纳豆激酶基因 毕赤酵母 克隆 表达 发酵论文

1、 我纳豆激酶基因论文：纳豆激酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达【中文摘要】纳豆是日本传统的发酵食品,在日本已经食用有两千年的历史。1987年日本的须见洋行等人首次从纳豆中分离出了具有纤溶活性的蛋白激酶,并将之命名为纳豆激酶(nattokinase,NK)。该酶为碱性丝氨酸蛋白酶,由枯草牙孢杆菌发酵产生,具有很强的溶血栓能力。目前心血管疾病已成为了人类健康的最大威胁之一,溶栓酶是治疗心血管疾病的有效方法。纳豆激酶是目前一种不错的溶栓物质,因其与传统的溶栓剂相比该酶具有安全性好、半衰期长、口服有效等优点而受到了广泛的关注。国内外血多学者对纳豆激酶进行了发酵、分离纯化、克隆表达等研究。它的等电点为8

2、.6±0.3,成熟肽由275个氨基酸组成,相对分子质量27 KDa。由于纳豆激酶的溶栓功能,目前主要将其发展为溶栓类药物和溶栓类保健品。它的获得主要有两种途径:一是发酵分离,通过改良菌种和优化纳豆生产工艺等方法来提高纳豆中纳豆激酶活性;另外通过基因工程方法,将纳豆激酶基因导入到特定的表达宿主中来提高纳豆激酶产量。本研究从本实验室保存的一株高溶栓的纳豆杆菌N07出发,提取纳豆激酶总基因组DNA,通过Primer 5设计引物,利用PCR手段扩增获得了纳豆激酶长为825bp的.【英文摘要】Natto is the Japanese traditional fermented food an

3、d has a very long history of at least 2,000 years. Nattokinase was first found and named by Hiroyuki Sumi in 1987. It is a serine proteinase of natto produced in the process of soybean fermentement, which was found to have high fibrinolytic activity.At present cardiovascular disease has become one o

4、f the biggest threats of human health. Streptokinase is an effective method for the treatment of cardiovascular disease.Now nattokinase becomes a hot study .【关键词】纳豆激酶基因 毕赤酵母 克隆 表达 发酵【英文关键词】nattokinase gene Picchia pastoris Cloning expression fermentation【目录】纳豆激酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达中文摘要5-7英文摘要7-8第一章 文献综述

5、11-211 纳豆及纳豆激酶11-141.1 纳豆111.2 纳豆激酶11-141.2.1 纳豆激酶理化性质11-121.2.2 纳豆激酶基因及蛋白结构12-131.2.3 纳豆激酶克隆表达研究进展13-142 纳豆激酶与血栓14-162.1 血栓14-152.2 溶栓剂15-162.3 纳豆激酶溶栓机理163 毕赤酵母表达系统16-203.1 毕赤酵母表达系统的特点16-173.2 表达菌株17-183.3 表达载体18-193.4 外源基因在毕赤酵母中分泌表达19-204 本研究的目的与意义20-21第二章 纳豆激酶基因的克隆21-291 材料21-222 方法22-253 结果与分析25-274 小结27-29第三章 重组载体pPICZaA/NK 的构建29-361 材料29-302 方法30-323 结果32-354 小结35-36第四章 重组酵母发酵研究36-481 材料36-372 方法37-393 结果39-474 小结47-48第五章 纳豆激酶的分离纯化及性质