超声波法提取黄芪中黄酮的最佳工艺研究

1、426医药工业超声波法提取黄芪中黄酮的最佳工艺研究常美玲薛彦朝李奉勤李晓瑞马静【摘要】目的优选黄芪的提取工艺。方法主要因素,并确定了最佳提取工艺。结果超声法提取黄芪总黄酮的最佳条件为:,15倍量80%乙醇,在温度70条件下提取30min,连续提取2次,此工艺简单可行,重现性好,适用于工业化生产。【关键词】超声波;黄酮;黄芪;提取黄芪为豆科植物膜荚黄芪Astragalus(Bge.的干燥根,为常用中药,:吸取一定量的提取液于10ml量,加0.1molL三氯化铝溶液2ml,1molL醋酸钾溶液3ml,加60%乙醇至刻度,摇匀,放置30min,同时作空白。在420nm的波长处测定吸收度A,从工作曲线

2、方程中查出黄酮含量,计算出黄酮提取率。2.2索氏法提取黄芪中总黄酮准确称取黄芪粗粉5.00g,用60%乙醇溶液进行索氏提取12了h至无色,提取液抽滤,定容。肌等作用。类、抗氧化、延缓衰老、改善心功能状态、,对其有效成分提取工艺研究,多以多糖为主。本文通过正交试验考察了超声波法从黄芪中提取黄酮类化合物影响的主要因素,研究了提取工艺的条件,探索一种快速、简便、提取率高的黄芪总黄酮提取方法。1仪器与试剂1.1仪器KQ5200DB型数控超声波清洗机(昆山市超声仪器按上述2.1.3方法测定A值,查出提取液中总黄酮含量,以此求出黄芪中总黄酮的含量为2.058mgg(以此作为黄芪中总黄酮的参照含量比较标准)

3、。3结果与分析3.1正交实验在材料粒度一定的条件下,所用乙醇的浓度、有限公司;频率:40kHz);UV2120型紫外分光光度计(日本岛津)。1.2试剂芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:008029705);黄芪原药材购自安国中药材市场,经我公司质检科溶剂用量、超声波提取温度及提取时间等因素都对黄芪中黄酮提取率有影响。为了全面考察这4个因素的影响,设计了四因素三水平正交试验,故选用L9(34)正交表进行试验。正交试验结果和方差分析结果分别见表2和表3。表1黄芪超声波提取条件实验因素水平水平12鉴定为膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.;试剂均为分

4、析纯。2实验方法2.1超声波法提取黄芪中黄酮2.1.1提取方法:提取工艺流程:黄芪粉碎成粗粉加一定量提取剂浸润超声处理抽滤定容取样检测提取率。准确称取2.00g黄芪粗粉于100ml三角烧瓶中。按要求加入一定量的乙醇,在一定温度下超声波辅助提取一定时间,趁热减压抽滤,加60%乙醇定容于100ml容量瓶中作为待测液。2.1.2标准曲线的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒因素)乙醇浓度A(%)乙醇用量B(倍)提取时间C(min)提取温度D(6010305070152060表2正交试验表试验号123456789K1K2K3A11122233368.1278.7982.84B12312312373.

5、2578.4478.05C12323131277.1876.6075.96D12331223166.4377.6185.70试验结果(%)55.2371.0378.0984.5969.8881.8979.9294.4275.51重的芦丁对照品5.8mg,置100ml量瓶中,加60%乙醇适量使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml中含无水芦丁58g)。精密吸取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml,分别置10ml量瓶中,各加0.1molL三氯化铝溶液2ml,1molL醋酸钾溶液3ml,加60%乙醇至刻度,摇匀,放置30min,同时作空白。在420nm的波长处测定吸收度,以吸收度(

6、A)为纵坐标,芦丁浓度C(gmL)为横坐标,绘制标准曲线。得回归曲线:A=5.013C+0.0356,r=0.9993。结果表明,芦丁在2.914.5gml范围表3方差分析方差来源ABCD离差平方和346.9350.232.22562.003P自由度2222F值P值显著性33333内,吸收度与浓度线性关系良好。156.1622.611.00252.960.0060.0420.5000.004注:F0.05(2,2)=19.00,3<0.01,差异有非常显著性;3P<0.05,差异有作者单位:050035河北省石家庄以岭药业股份有限公司显著性从表2和表3中可以看出:超声波辅助提取温度

7、和乙醇浓度对黄芪中黄酮的提取率影响的差异具有非常显著性;乙醇用量对黄芪中黄酮的提取率影响的差异具有显著性;超声波辅助提取时间对黄芪中黄酮的提取率的影响不明显。超声波法最佳提取条件为A3B2C1D3,即使用15倍80%乙醇,在温度70条件下,超声波提取30min;各因素对黄芪总黄酮提取效果影响的主次顺序依次为提取温度D>乙醇浓度A>乙醇用量B>超声波提取时间C。3.2浸提次数的确定按上述A3B2C1D3方案进行超声提取,4270.24%。而只需提取2次,即可将98.2%以上的黄酮类化合物从黄芪中提取出来。3.3最佳工艺验证取同一批药材按确定的最佳工艺进行提取,提取三批,结果平均

8、提取率为98.31%,RSD=0.15%。此结果说明该工艺稳定可行,重现性好,适宜工业化生产。4讨论根据以上结果与分析,物。结果表明,:,加15倍量80%,70,30min。在最佳提取结果见表4。表4浸提次数实验数据提取次数相对提取率(%)总提取率(%)194.5294.5223.30.2498.94%以上;,黄酮的总提取率可达98.27%。本法的黄酮提取率较高,且节省了大量的时间和溶剂,从而降低了生产成本,提高了经济效益,为开发利用该资源提供了有益的参考。由表4可知,越高,;第3提取率较低,只有短篇报道中暑26例治疗体会周云霞中暑是夏季急诊常见病,是由于高温、高湿环境致机体体温调节中枢障碍,

9、汗腺功能障碍和水电解质丢失过多为特征的疾病。严重者可并发多脏器功能衰竭而死亡,重症中暑病死率为20%70%,50岁以上者可高达80%1,故需引起重视。我院在2004年7月至2005年8月收治中暑患者26例,现报告如下。1资料与方法2结果本组26例患者中,11例症状34h内改善。15例意识障碍患者中10例经综合治疗后体温12h内降至38.5以下,13h内神志转清,4例高热持续达3h,10h内神志转清,4例中2例持续精神异常1周,15例中1例高热持续4h,于入院后第7天死于多脏器功能衰竭。3讨论本组26例,男19例,女7例;年龄1959岁,平均39岁;发病至就诊时间在1h内16例,12h5例,超过

10、3h5例。热射病15例,热痉挛4例,热衰竭7例。临床表现:意识障碍15例,抽搐4例,躁动不安7例,大小便失禁10例,呕吐4例,体温超过4015例,低血压9例,血清酶谱升高15例,其中2例CK最高分别为15000UL、11000UL。此2例患者持续精神异常1周。低血钾10例,低血钠、低血氯9例,中暑合并脑、心、肝、肾等功能损害15例,中暑合并多脏器功能衰竭3例。26例患者均迅速置于2025空调病房,脱外衣,反复冷中暑时,由于高热不断袭击机体,对机体细胞膜及细胞内结构的直接作用,导致线粒体氧化磷酸化发生障碍,严重者可引起全身细胞产生不可逆的损伤和衰竭,影响到全身器官系统,最后产生不可逆转的病变2。

11、因此快速有效地降温是治疗的关键,降温措施的迟早快慢、得当与否决定着预后。重症中暑可造成多脏器功能障碍。中暑并发多脏器功能损害时病死率很高,因此,降温的同时应高度重视防治并发症。中暑并发多脏器功能障碍早期症状隐匿,有的以某一脏器功能障碍为主,逐渐累及其他脏器。因此,重症患者应严密动态监测多脏器功能情况,及时发现异常而调整治疗。中暑高热时,由于肌肉局部温度增加,缺氧和代谢性酸中毒,常可发生严重的肌肉损伤,横纹肌溶解,血清肌酶明显升高,其中CK升高最为敏感,其次为LDH、AST和ALT。血清酶活性可作为对中暑病情及其预后判断的重要指标。因此,对重症中暑患者,临床上在严密进行心、肝、肾等重要脏器功能检查的同时,应及时检测血清酶活性。参考文献1叶任高主编.内科学.第5版.北京:人民卫生出版社,2001.986.2刘仁树,黄建群,史以珏主编.现代急症内科学.第1版1北京:人民军医出版社,2003.5592563.水擦试皮肤,不断按摩皮肤、肌肉,在头部及身体大动脉处放置冰袋,对高热昏迷的15例患者,给予5%葡萄糖液500ml+氯丙嗪2550ml,静