超声波提取木瓜叶总黄酮及其鉴别(一)

1、超声波提取木瓜叶总黄酮及其鉴别(一)    作者：黄锁义， 刘海花， 黎海妮， 唐玉莲， 张婧萱【关键词】 超声波提取；,木瓜叶；,总黄酮；,鉴别摘要：目的为充分利用木瓜叶植物资源，避免资源的浪费，探讨木瓜叶中总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从木瓜叶中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用紫外分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.988 0 mg/ml，回收率为97.79%，其纯度和产率均较高。结论 该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取木瓜叶黄酮类物质的有效途径。关键词：超声波提取； 木瓜叶； 总黄酮； 鉴

2、别Extraction and Identification of Total Flavanone from Papaya Leaves by Ultrasonic WaveAbstract：ObjectiveTo make use of papaya leaves ,avoid wasting and approach the extraction from total flavanone of papaya leaves.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from papaya leaves wit

3、h ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of papaya leaves. ResultsThe density of the total flavanone of papaya leaves was C=0.988 0 mg/ml and the rate of recovery was 97.79%. ConclusionThis method is a purely physical process and has not an

4、y pollution. It is an ideal way to extract the flavanone from papaya leaves.Key words：Ultrasonic wave extraction; Papaya leaves; Total flavanone; Identification 木瓜为蔷薇科木瓜属植物，用途广泛，集观赏、食用、药用于一体。木瓜在我国分布广泛，医学名著本草纲目本草遗拾等对木瓜的舒筋活络、解渴生津、平肝和胃、去风湿、治霍乱等功效都有详尽的记载。木瓜具有抗肝炎作用，用于治疗腰椎增生性关节炎、前列腺增生、术后疼痛及痹证等症状1。近年来的研究表明

5、，木瓜果实中除含有氨基酸、维生素、果胶、有机酸、矿物质等营养物质外，还含有具有生物活性的黄酮类物质2。有文献报道木瓜中总黄酮的提取方法采用乙醇提取2，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道3，4，表明其具有耗能低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响4。但超声技术应用于提取木瓜叶中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取

6、木瓜叶总黄酮及鉴别。1 仪器与试剂1.1 仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。1.2 试剂95%乙醇AR；60%乙醇AR ；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；正丁醇AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；镁粉AR；乙酸镁AR；冰醋酸AR；乙酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜木瓜叶采自右江民族医学院校园内。2 方法与结果2.1 总黄酮成分提取 取新鲜木瓜叶，烘干，粉碎。称取木瓜叶粉末约6

7、 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩57 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。2.2 测定方法依据 以芦丁为对照品测定木瓜叶中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。2.3 定量实验-总黄酮的含量测定2.3.1 波长的选择 取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420700 nm波长范围测定络合物的吸光度

8、，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。2.3.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度，结果见表1。表1 紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度（略）根据上表得回归方程：A=-6.967 1×

9、;103+8.418 1C，r=0.999 92.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10.00 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.409，根据回归方程：A=-6.967 1×103+8.418 1C，计算样品中总黄酮的含量C=0.988 0 mg/ml。2.3.4 回收实验精密量取样品液1.00 ml，加入标准芦丁对照品1.00 ml（0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为97.79% 。2.4 定性实验-总黄酮的鉴别2.4.1 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐

10、色并有荧光斑点。浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。2.4.2 纸层析 取样品溶液10l点在滤纸上。用正丁醇醋酸水=415（体积比）为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。3 讨

11、论3.1 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为97.79%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。3.2 黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等5。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、

12、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。 黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用610。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，木瓜叶分布广泛，本文实验结果表明，木瓜叶中含有较为丰富的黄酮。因此，木瓜叶具有广泛开发和利用价值，值得综合利用加强资源开发。参考文献：1 陈小刚.常用中草药临床新用M.广州：广东科技出版社，2005：69.2 王文平，梁海玲，姚元华. 木瓜提取物中总黄酮含量的测定J.贵州医药，2005，（6）：546. 3 刘祥义. 超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究J.云南化工，2003，30（1）：27.4 谢明杰，宋 明，邹翠霞，等. 超声波提取大豆异黄酮J.大豆科学，2004，23(1):75.5 夏杏洲，张 辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究J.食品研究与开发，2002，23(5):35.6 华光军，郭 勇.黄酮类化合物药理研究进展J.广东药学，1999，9（4）：9.7 黄河胜，马传庚，陈