实训六细菌的药物敏感性试验

1、项目四项目四 消毒与灭菌消毒与灭菌实训六实训六 细菌的药物敏感性试验细菌的药物敏感性试验项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验实验目标实验目标 根据药敏实验结果，筛选用于试验菌临床治疗的敏感药物。 掌握纸片法药敏试验的临床应用意义、操作方法及结果的判定。项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验实验器材实验器材 大肠杆菌培养物 普通营养琼脂平板 药敏片 酒精灯 眼科镊 接种环项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验药敏片制作方法药敏片制作方法纸片的选择与制作 ：在医药公司购买新华1号定性滤纸，用打孔器把滤纸打成直径为6毫米的圆形纸片，装入干洁的青霉素小瓶内，每瓶装入5O片，将若干个装有纸片的小瓶放入

2、高压锅内进行高压灭菌121、20min，80 烘干，置48条件下保存。 药物浓度的配比 ：选择现有的抗菌药物，根据药物的说明进行配比浓度。纸片的浸泡与干燥 ：取配好的药物溶液放入灭好菌的盛有纸片的青霉素小瓶内 (药液的多少以浸透纸片为宜)，浸泡24小时后，将多余的药液倒掉，放在无菌条件下晾干或放在37的恒温箱内烘干，置48的冰箱中保存备用。项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验纸片法药敏试验的原理纸片法药敏试验的原理 将含有定量抗菌药物的药敏片贴在已接种试验菌的琼脂平板上，药敏片上含有的抗菌药物吸收琼脂中水分，溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内试验菌的生长被抑

3、制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌圈。项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验抑菌圈抑菌圈抑菌圈抑菌圈项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验纸片法药敏试验的方法步骤纸片法药敏试验的方法步骤1 1无菌操作取菌无菌操作取菌2 2接种平板接种平板3 3贴药敏片贴药敏片4 4培养培养 接种环灼烧灭菌，冷却，从培养物中勾取菌落。项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验纸片法药敏试验的方法步骤纸片法药敏试验的方法步骤3 3贴药敏片贴药敏片4 4培养培养1 1无菌操作取菌无菌操作取菌2 2接种平板接种平板 接种环取菌后在平板表面密集划线项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验纸片法药敏试验的方法步骤纸片法药敏试验

4、的方法步骤纸片平板 各纸片中心距大于24mm，纸片距平皿边缘大于15mm。 药敏片贴好后压实 药敏片一次贴好，不得移动1 1无菌操作取菌无菌操作取菌2 2接种平板接种平板3 3贴药敏片贴药敏片4 4培养培养项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验纸片法药敏试验的方法步骤纸片法药敏试验的方法步骤1 1无菌操作取菌无菌操作取菌2 2接种平板接种平板3 3贴药敏片贴药敏片4 4培养培养 将平板倒置于37温箱培养1824小时后取出，观察抑菌圈。项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验药敏试验结果药敏试验结果抑菌圈抑菌圈根据药敏片周围抑菌圈的大小，判定药物的敏感度敏感

5、表示被测菌株所引起的感染可以用该抗菌药物的常规剂量治愈。中介 表示被测菌株对常规用药体液或组织中的药物浓度的反应率低于敏感菌株，使用高于常规剂量有疗效。耐药 表示被测菌株不能被该抗菌药物的常规剂量抑制，临床疗效不佳。药物敏感度定义项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验药敏试验结果药敏试验结果 细菌对不同抗菌药物敏感度标准：药物名称抑菌圈直径（mm）敏感度青霉素无抑菌圈10112020不敏感耐药中介高敏链霉素及其他抗菌药物无抑菌圈10111515不敏感耐药中介高敏项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验筛选临床治疗用药物应考虑的因素筛选临床治疗用药物应考虑的因素1. 敏感度：应是高敏药物2. 价格

6、合理3. 药物的用药途径4. 药物副作用项目四 消毒与灭菌-细菌的药物敏感试验注意事项注意事项1.纸片法适合快生长菌和少数苛养菌检测，有些菌无标准化的药敏试验。2.操作全程应注意无菌操作。3.抑菌圈直径：以肉眼见不到细菌明显生长的边缘为限。 变形杆菌属菌株可漫延生长至某些抗微生物药物的抑菌圈内，表现为一种细薄变形杆菌属菌株可漫延生长至某些抗微生物药物的抑菌圈内，表现为一种细薄微弱的生长，形成一层明显的抑制性生长环，对于这种情况应忽略不计。微弱的生长，形成一层明显的抑制性生长环，对于这种情况应忽略不计。 对于磺胺类药物，应忽略抑菌圈内轻微的细菌生长（少于对于磺胺类药物，应忽略抑菌圈内轻微的细菌生长（少于20%20%的菌苔），以明的菌苔），以明显的边缘为抑菌