维生素C注射液的检查和含量测定

1、1检查检查23v 通用名：维生素通用名：维生素C注射液注射液v 英文名：英文名：Vitamin C Injectionv 维生素维生素C C又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素，其水又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素，其水溶液呈酸性反应，溶液呈酸性反应，在空气中易被氧化在空气中易被氧化。v 维生素维生素C C注射液：无色或微黄色的澄明液体。含维生注射液：无色或微黄色的澄明液体。含维生素素C C（C C6 6H H8 8O O6 6）应为标示量的）应为标示量的90.0%110.0%90.0%110.0%溶液的澄清度与颜色检查溶液的澄清度与颜色检查v 原理：维生素注射剂在贮存期间易变色，且颜色随原理：维

2、生素注射剂在贮存期间易变色，且颜色随贮存时间的延长而逐渐变深。这是由于维生素贮存时间的延长而逐渐变深。这是由于维生素C C的水的水溶液在高于或低于溶液在高于或低于pH5-6pH5-6时，受空气、光线和温度的时，受空气、光线和温度的影响，分子中的内酯环可发生水解，并进一步发生脱影响，分子中的内酯环可发生水解，并进一步发生脱羧反应生成糠醛聚合成色。羧反应生成糠醛聚合成色。v 方法（注射剂）：取本品适量，加水稀释成方法（注射剂）：取本品适量，加水稀释成1ml1ml中含中含维生素维生素C 50mgC 50mg的溶液后，照分光光度法（的溶液后，照分光光度法（20052005版中国版中国药典附录药典附录l

3、V AlV A），在），在420nm420nm的波长处测定，吸收度不的波长处测定，吸收度不得过得过0.060.06。其他检查项目其他检查项目v 2005版药典规定维生素版药典规定维生素C注射液的检查除颜色外，注射液的检查除颜色外，还包括：还包括：pH值、细菌内毒素及注射剂项下的其他规值、细菌内毒素及注射剂项下的其他规定。定。v pH值值 应为（附录应为（附录Vl H）v 细菌内毒素细菌内毒素 取本品，依法检查（附录取本品，依法检查（附录XI E），每），每1ml中含内毒素量应小于中含内毒素量应小于2.5EUv 其他其他 应符合注射剂项下的其他规定（附录应符合注射剂项下的其他规定（附录I B）V

4、c注射液含量测定方法注射液含量测定方法含量测定含量测定色谱法色谱法容量分析法容量分析法光谱分析法光谱分析法容容 量量 分分 析析 法法碘碘 量量 法法1固固 定定 pH 滴滴 定定 法法23库库 仑仑 滴滴 定定 法法 碘碘 量量 法法v 实验原理：实验原理： 维生素维生素C分子中的烯二醇基具有还原性，能被分子中的烯二醇基具有还原性，能被I2 定定量地氧化成二酮基量地氧化成二酮基 v 实验方法：精密称取适量（约相当于维生素实验方法：精密称取适量（约相当于维生素C 0.2g），加水），加水15mL与丙酮与丙酮2mL，摇匀，放置，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸分钟，加稀醋酸4mL与淀粉与淀粉指示液指示

5、液1mL, 用碘滴定液（用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色）滴定，至溶液显蓝色并持续并持续30秒钟不褪。每秒钟不褪。每1mL碘滴定液（碘滴定液（0.1mol/L）相当于）相当于8.806mg的的C6H8C6。 OCO HH O H2CHH OO HO+I 2OCO HH O H2CHOOO+2 H I碘碘 量量 法法优点：容量分优点：容量分析简便快速、析简便快速、结果准确，被结果准确，被各国药典所采各国药典所采用。用。评价评价缺点：该法需缺点：该法需要使用剧毒基要使用剧毒基准物准物As2O3 且且样品易样品易氧氧化化需尽快操需尽快操作。作。固固 定定 pH pH 滴滴 定定 法法

6、v 实验原理：强碱(酸) 滴定剂滴定至某一固定pH 值时滴定剂消耗体积与弱酸(碱)物质的量之间的正比关系v 实验方法：以20ml 1mol/L KCl 和10ml 0.1mol/L HCl 的混合液作空白, 分别加入不同量的抗坏血酸, 加水至60m l, 用0.1mol/L NaOH滴定，绘制pHV 滴定曲线 确定测定时的固定pH 值, 以抗坏血酸含量对抗坏血酸所消耗的NaOH体积进行线性回归 测定样品在此pH值时所消耗的滴定剂体积库库 仑仑 滴滴 定定 法法I I3 3- -与抗血酸反应生成与抗血酸反应生成I I- -稍过量的稍过量的I I3 3- -与与I I- -形成形成I I- -/

7、/ I I3 3- -可逆电对可逆电对出现电流突跃，指示终点出现电流突跃，指示终点H2SO4介质中，以电解KI溶液产生的I2来测定抗坏血酸的含量光谱分析法光谱分析法紫外分光光度法紫外分光光度法1阻抑光度法阻抑光度法2比色法比色法3旋光法旋光法4紫外分光光度法紫外分光光度法v 实验原理：维生素实验原理：维生素C C在稀硫酸溶液中在稀硫酸溶液中, ,在在245nm245nm波长处有波长处有最大吸收最大吸收v 实验方法：实验方法： 绘制标准曲线绘制标准曲线 配制一系列浓度的维生素配制一系列浓度的维生素C C对照品溶液（对照品溶液（0.005mol/L0.005mol/L硫硫酸溶液为溶剂）酸溶液为溶剂

8、） 以溶剂为空白以溶剂为空白, ,在在245nm245nm波长处测定波长处测定吸收度吸收度 以浓度对吸收度作线性回归以浓度对吸收度作线性回归 样品含量测定样品含量测定 精密称取适量置精密称取适量置100ml 100ml 量瓶中量瓶中 加加0.005 mol/L0.005 mol/L硫酸硫酸溶液适量溶液适量, ,超声超声5 min5 min使溶解使溶解, ,再加再加0.005mol/L0.005mol/L硫酸溶液硫酸溶液至刻度至刻度, ,摇匀摇匀, ,滤过滤过 精密量取续滤液精密量取续滤液2.0ml 2.0ml 置置100ml100ml量瓶中量瓶中, ,加加0.005mol/L0.005mol/

9、L硫酸溶液至刻度硫酸溶液至刻度, ,摇匀摇匀 在在245nm245nm波长处测定吸收度波长处测定吸收度紫外分光光度法紫外分光光度法v 优点：与碘量法相比，操作简便、快速、准确、稳定优点：与碘量法相比，操作简便、快速、准确、稳定性好。且本法专属性较好，每种还原物质以及多种药性好。且本法专属性较好，每种还原物质以及多种药物辅料存在时，对物辅料存在时，对Vc的测定均无干扰。的测定均无干扰。v 缺点：仪器设备要求高。缺点：仪器设备要求高。阻抑光度法阻抑光度法v 实验原理：在实验原理：在H H2 2SOSO4 4-KBr-KBr介质中，维生素介质中，维生素C C对碘酸钾氧化对碘酸钾氧化氨基苯磺酸黄的褪色

10、反应有抑制作用，且抑制作用的强弱氨基苯磺酸黄的褪色反应有抑制作用，且抑制作用的强弱与维生素与维生素C C的含量之间呈良好的线性关系。的含量之间呈良好的线性关系。v 实验方法：实验方法：测定波长：测定波长：528nm528nm试剂：氨基苯磺酸黄，试剂：氨基苯磺酸黄，KBrKBr溶液，溶液，1mol/L H1mol/L H2 2SOSO4 4 ，0.005%KIO0.005%KIO3 3反应温度与时间：反应温度与时间：7575，3min3min比色法比色法v 实验原理：维生素实验原理：维生素C C与与Fe()-Fe()-邻菲啰啉生成复合物，后邻菲啰啉生成复合物，后者在者在510nm510nm波长处

11、有最大吸收。可采用比色法直接测波长处有最大吸收。可采用比色法直接测定维生素定维生素C C含量。含量。v 实验方法：实验方法：p 维生素着色复合物的吸收光谱测定维生素着色复合物的吸收光谱测定p 绘制标准曲线绘制标准曲线p 样品含量测定样品含量测定p 优点：操作简便快速、灵敏，可作为医院、药厂等对维优点：操作简便快速、灵敏，可作为医院、药厂等对维生素生素C注射液及中间品质量监测的参考。注射液及中间品质量监测的参考。旋光法旋光法v 实验原理：利用维生素实验原理：利用维生素C C的旋光度在不同条件下的差的旋光度在不同条件下的差示旋光进行测定示旋光进行测定v 实验方法：实验方法：p 标准曲线的绘制标准曲

12、线的绘制 配制一系列浓度的维生素配制一系列浓度的维生素C C对照品溶液（用新沸过的对照品溶液（用新沸过的冷水与稀醋酸稀释）冷水与稀醋酸稀释） 以溶剂为空白，测定对照品以溶剂为空白，测定对照品溶液的差示旋光度溶液的差示旋光度 以浓度对差示旋光度线性回以浓度对差示旋光度线性回归归p 样品含量测定样品含量测定v 优点：根据维生素优点：根据维生素C具有旋光性的特点，本法测定结果准确，操具有旋光性的特点，本法测定结果准确，操作简便、快速。作简便、快速。v 缺点：仪器设备要求高。缺点：仪器设备要求高。色谱法色谱法HPLCHPLC法法v 色谱柱: Inertsil ODS-3, 4.6 250mmv 流动相

13、: 己烷磺酸钠溶液-甲醇(6:4), pH=3.1v 流速: 0.8mL/minv 柱温: 室温v 检测波长: 245nmv 进样量: 10Lv 色谱柱: C18 (4.0mm，3. 9150mm) v 流动相: 0.1%草酸 v 流速: 0.6ml/ min v 柱温: 25 v 检测波长: 254nm v 进样量: 10L色谱法色谱法薄层扫描法薄层扫描法v 实验原理：维生素实验原理：维生素C C具有较强还原性具有较强还原性, , 可使蓝色染料可使蓝色染料2, 2, 6-6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺, , 而本身被而本身被氧化成去氧抗坏血酸。氧化成

14、去氧抗坏血酸。v 实验方法：实验方法：制备制备2, 6-2, 6-二氯靛酚钠试纸二氯靛酚钠试纸配制柠檬酸缓冲溶液配制柠檬酸缓冲溶液(pH3.5)(pH3.5)确定扫描条件：维生素确定扫描条件：维生素C C 在在290nm290nm处有最大吸收处有最大吸收, , 420nm420nm处无吸收处无吸收, , 故选择故选择 s=290nm, s=290nm, R R=420nm, =420nm, 双波长反射式锯齿扫描双波长反射式锯齿扫描线性实验：线性实验：A A的积分值的积分值Y Y ( (峰面积峰面积) )为纵坐标为纵坐标, , 点样量点样量为横坐标为横坐标X X 样品的含量测定样品的含量测定参考

15、文献参考文献1 1 国家药典委员会国家药典委员会. . 中华人民共和国药典中华人民共和国药典( (二部二部). ). 北京北京: : 化学工业出版社，化学工业出版社，2005. 669.2005. 669.22李艳李艳, ,刘霁辉刘霁辉. .旋光法测定维生素旋光法测定维生素C C 注射液的含量注射液的含量. .辽宁辽宁药物与临床药物与临床,1999.5,2(2).,1999.5,2(2).3 3 邱健斌，刘云珍，郑瑛等邱健斌，刘云珍，郑瑛等. .固定固定pHpH滴定法测定滴定法测定VcVc片片中抗坏血酸中抗坏血酸. .福建师范大学学报福建师范大学学报( (自然科学自然科学版版),1998.12,14(4).),1998.12,14(4).4 4 张晓勤，刘云珍，江茂珍等张晓勤，刘云珍，江茂珍等. .库仑滴定法测定库仑滴定法测定VcVc片抗片抗坏血酸的含量坏血酸的含量. .福建化工福建化工,1999,1999年第年第1 1期期5 5 吕长淮吕长淮. .紫外分光光度法测定维生素紫外分光光度法测定维生素C C 片的含量片的含量. . 安安徽医药徽医药,2003.4,7(2).,2003.4,7(2).6 6 张振华，刘长，宁明远张振华，刘长，宁明远. .维生素维生素C C的阻抑光度法分析的阻抑光度法分析研究研究. .南华大学学报南华大学学报( (理