高效液相色谱法测定果汁中的有机酸—试剂和样品的准备

1、 1 标准溶液的配制二 食品营养与检测专业教学资源库 目录页检测依据和原理一样品的预处理三流动相的准备四 1 食品营养与检测专业教学资源库 一、检测依据和原理检测依据： GB/T 5009.157-2003 食品中有机酸的测定。检测原理： 食品试样经匀浆提取、离心后，样液经0.22m滤膜过滤，以(NH4)2HPO4H3PO4缓冲溶液（pH=2.7）为流动相，用高效液相色谱法在C18色谱柱上分离，于210 nm处经紫外检测器检测，用峰高或峰面积标准曲线测定有机酸的含量。高效液相色谱法测定果汁中的有机酸 1 食品营养与检测专业教学资源库 二、标准溶液的配制1、有机酸标准储备液 称取苹果酸、柠檬酸各

2、0.500 0 g，用超纯水溶解后，定容至50 mL。 苹果酸、柠檬酸的浓度分别为10.0 mg/mL，此液为标准储备液。 高效液相色谱法测定果汁中的有机酸2、有机酸标准使用液 取苹果酸、柠檬酸标准储备液各5. 00 mL于50 mL容量瓶中，用超纯水稀释到刻度。苹果酸、柠檬酸的浓度分别为1.0 mg/mL。 4 食品营养与检测专业教学资源库 3、混合标准工作液 取有机酸标准使用液（1.0 mg/mL）0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mL，加入0.2 mL 1 mol/L磷酸，用超纯水稀释至10mL，混匀。 经0.22m滤膜过滤，滤液供分析用。 此溶液有机酸浓度分别为50g/

3、mL、100g/mL、200g/mL、400g/mL、800g/mL。 4 食品营养与检测专业教学资源库 4、单标工作液的配制 （1）苹果酸单标：吸取1.00 mg/mL苹果酸标准使用液1.0 mL于10 mL容量瓶中，加入0.2 mL 1 mol/L磷酸，用超纯水定容至刻度，混匀。用0.22 um微孔滤膜（水系）过滤至样品瓶中，待上机分析。 （2）柠檬酸单标：吸取1.00 mg/mL苹果酸标准使用液1.0 mL于10mL容量瓶中，加入0.2 mL 1 mol/L磷酸，用超纯水定容至刻度，混匀。用0.22 um微孔滤膜（水系）过滤至样品瓶中，待上机分析。 1 食品营养与检测专业教学资源库 三、

4、试样的预处理取样：以市售果汁饮料为样品。准确吸取5.00 mL试样（若试样中含二氧化碳应先加热除去。加酸：加入1 mol/L磷酸溶液0.2 mL 。定容：定量转移至10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。过滤：用0.22 um微孔滤膜（水相）过滤至样品瓶中，待上机分析。高效液相色谱法测定果汁中的有机酸每个样品准备配制两个平行样。 1 食品营养与检测专业教学资源库 四、流动相的准备需要准备的的流动相：甲醇（色谱级）超纯水磷酸氢二铵-磷酸溶液（pH=2. 70）高效液相色谱法测定果汁中的有机酸程序：溶液配制流动相过滤流动相脱气 4 食品营养与检测专业教学资源库 1、0.01 mol/L磷酸氢二铵-磷酸溶液（pH2.7）的配制 称取1.3206 g磷酸氢二铵，加水溶解并稀释至1000 mL。用1 mol/L磷酸调至pH2.7。2、流动相的过滤 将准备好的甲醇、超纯水、磷酸氢二铵溶液用0.45 um微孔滤膜过滤到储液器中。（甲醇用有机系滤膜