对我国地方猪种若干特性的分子生物学研究

1、南京农业大学 动物科技学院2005-111对我国地方猪种若干特性的分子生物学研究王林云王林云 曾勇庆曾勇庆 高勤学高勤学 谈永松谈永松 周周 波波 刘刘 梅梅 黄瑞华黄瑞华（南京农业大学（南京农业大学 动物科技学院）动物科技学院）南京农业大学 动物科技学院2005-112围绕地方猪种进行研究的队伍围绕地方猪种进行研究的队伍 牵头人牵头人：王林云教授王林云教授 团队主要成员团队主要成员 教授教授：刘红林、徐银学、谢庄、王根林刘红林、徐银学、谢庄、王根林 其他成员其他成员：黄瑞华、韦习会、陈黄瑞华、韦习会、陈 杰、杰、周周 波、贾波、贾 超、刘根桃、孔令勇、超、刘根桃、孔令勇、 谈永松、刘谈永松、

2、刘 梅、孙梅、孙 梅、李隐侠、梅、李隐侠、 曾永庆、高勤学、徐世永、虞德宾等曾永庆、高勤学、徐世永、虞德宾等 南京农业大学 动物科技学院2005-113研究基金研究基金 国家自然科学基金项目国家自然科学基金项目 科技部科技部863项目项目 教育部博士点基金项目教育部博士点基金项目 农业部农业部948项目项目 江苏省科技厅自然科学基金、高新技术研究、科江苏省科技厅自然科学基金、高新技术研究、科技攻关等项目技攻关等项目 江苏省教育厅高新技术转化项目江苏省教育厅高新技术转化项目 江苏省农林厅三项工程项目江苏省农林厅三项工程项目 上海农委科教兴农项目上海农委科教兴农项目 企业委托项目企业委托项目南京农

3、业大学 动物科技学院2005-114研究工作涉及到的地方或培育猪种研究工作涉及到的地方或培育猪种 太湖猪（二花脸、梅山）太湖猪（二花脸、梅山） 姜曲海猪姜曲海猪 莱芜猪与新莱芜猪莱芜猪与新莱芜猪 五指山猪五指山猪 新淮猪与新淮猪瘦肉系新淮猪与新淮猪瘦肉系 苏太猪苏太猪 申农申农1号号 苏钟猪苏钟猪南京农业大学 动物科技学院2005-115研究工作涉及到的性状研究工作涉及到的性状 生长缓慢机理研究（太湖猪）生长缓慢机理研究（太湖猪） 高繁殖机理研究（太湖猪）高繁殖机理研究（太湖猪） 猪胴体品质与猪胴体品质与肉质肉质研究研究 免疫机理研究（太湖猪）免疫机理研究（太湖猪） 抗病机理研究（免疫球蛋白相

4、关性研究、抗病机理研究（免疫球蛋白相关性研究、MHC IIMHC II型型研究）研究） 涉及应急敏感基因涉及应急敏感基因( (HAL)HAL)、雌激素受体基因雌激素受体基因(ESR)(ESR)、促卵泡素促卵泡素(FSH)(FSH)基因和促卵泡素受体基因、瘦蛋基因和促卵泡素受体基因、瘦蛋白白( (肥胖肥胖) )基因基因(OB(OB基因基因) )、IGF-1IGF-1基因、基因、IGF-2IGF-2基因等基因等例子例子南京农业大学 动物科技学院2005-1161 1、莱芜猪肌肉组织中、莱芜猪肌肉组织中A-FABP mRNA A-FABP mRNA 表达量与肌内脂肪关系表达量与肌内脂肪关系（曾勇庆等

5、，（曾勇庆等，20042004）南京农业大学 动物科技学院2005-117肌肉脂肪含量肌肉脂肪含量（肌间脂和脂内脂，体重（肌间脂和脂内脂，体重9090kgkg） 莱芜猪达莱芜猪达10.42% 新莱芜猪（新莱芜猪（50%莱芜猪血统）下降，但仍达莱芜猪血统）下降，但仍达6.65% 3.263.262.852.855.425.423.093.096.846.843.363.367.547.545.095.099.659.655.325.3210.4210.426.656.656.276.270 02 24 46 68 810101212404050506060707080809090100100莱芜

6、莱芜新莱芜新莱芜南京农业大学 动物科技学院2005-118A-FABPA-FABP基因基因 脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（adipocyte fatty acid-binding protein, A-FABP）能与脂肪酸特异）能与脂肪酸特异性结合，参与甘油三脂的生成，并影响肌内脂肪性结合，参与甘油三脂的生成，并影响肌内脂肪（IMF）的沉积（）的沉积（ Veerkamp等等 1995） A-FABP基因位于基因位于4号染色体上，序列长号染色体上，序列长8144bp 有四个外显子分别编码有四个外显子分别编码24、58、34和和16个氨基酸个氨基酸;三个内含子，分别为三个内含

7、子，分别为2629bp、840bp和和471bp（Gerbens等，等，2000年）年） HH6,HL5,HL4,HL3,LL2,LL1,LL0 南京农业大学 动物科技学院2005-119莱芜猪和新莱芜猪间的差别莱芜猪和新莱芜猪间的差别 用荧光定量检测技术对莱芜猪和新莱芜用荧光定量检测技术对莱芜猪和新莱芜猪不同体重阶段的肌肉组织猪不同体重阶段的肌肉组织A-FABP mRNA表达量进行定量检测表达量进行定量检测 结果：结果： A-FABP mRNA丰度有一明显的峰值丰度有一明显的峰值 存在明显的品种差异（存在明显的品种差异（P0.05）新莱芜猪体重新莱芜猪体重70kg左左右出现峰值，体重右出现峰

8、值，体重90kg后，表达量趋于后，表达量趋于平缓（平缓（P0.05）南京农业大学 动物科技学院2005-11112 2 、猪苹果酸酶基因（、猪苹果酸酶基因（MEME）与肌肉脂肪关系的研究与肌肉脂肪关系的研究（高勤学等，（高勤学等，20042004）南京农业大学 动物科技学院2005-1112不同体重大约克和二花脸猪肌内脂不同体重大约克和二花脸猪肌内脂发育变化发育变化 南京农业大学 动物科技学院2005-1113不同日龄二花脸和大约克猪肌内脂发育变化不同日龄二花脸和大约克猪肌内脂发育变化 大约克大约克二花脸二花脸（体重（体重33.5kg）体重体重84.75kg体重体重87.90kg大约克猪与大约

9、克猪与180d前二花脸猪前二花脸猪IMF相当且变化平缓相当且变化平缓180d后二花脸后二花脸IMF增加，大约克如何？不得而知增加，大约克如何？不得而知南京农业大学 动物科技学院2005-1114苹果酸苹果酸酶（酶（MEME） 猪脂肪中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸猪脂肪中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）水平可估计产脂酶）水平可估计产脂酶（Lipogenic enzyme）活性）活性 猪猪NADPH的合成由四个酶控制：异柠檬酸的合成由四个酶控制：异柠檬酸脱氢酶（脱氢酶（ICDH）、）、6-磷酸果糖脱氢酶磷酸果糖脱氢酶（6PGDH）、苹果酸酶（）、苹果酸酶（ME）和葡萄糖六）和葡萄糖六磷酸脱氢酶（磷酸

10、脱氢酶（G6PDH） Young（1964）认为苹果酸酶和葡萄糖六）认为苹果酸酶和葡萄糖六磷酸脱氢酶是磷酸脱氢酶是NADPH的主要提供者的主要提供者南京农业大学 动物科技学院2005-1115苹果酸酶的基因型与肌内脂肪(%)o用用RT-PCR-SSCP技术对苹果酸酶分技术对苹果酸酶分出三种基因型出三种基因型o具有具有BB型的二花型的二花脸肌内脂肪较丰富脸肌内脂肪较丰富南京农业大学 动物科技学院2005-11163 3、猪、猪MyoGMyoG基因型与肌纤基因型与肌纤维数目关系维数目关系高勤学、刘梅等（高勤学、刘梅等（2005） 南京农业大学 动物科技学院2005-1117 肌纤维细（即单位面积肌

11、纤维数多）则肌肌纤维细（即单位面积肌纤维数多）则肌肉品质好肉品质好 肌纤维形成于胎胚期肌纤维形成于胎胚期70d左右，出生后数目左右，出生后数目不再增加，受生肌调节因子家族（不再增加，受生肌调节因子家族（MyoD）调控调控 MyoD基因家族包括基因家族包括4个结构相关的基因：个结构相关的基因：MyoD1、MyoG（myogenin）、）、MYF5和和MYF6。其中。其中MyoG基因在肌细胞的早期分基因在肌细胞的早期分化过程处于中心位置化过程处于中心位置南京农业大学 动物科技学院2005-1118不同部位肌肉不同部位肌肉的的MyoGMyoG基因不同类型基因不同类型与肌纤维密度（个与肌纤维密度（个/

12、mm/mm2 2） 2312312592593333332232232512512772772382382282282672670 05050100100150150200200250250300300350350半腱肌半腱肌半膜肌半膜肌股二头肌股二头肌MMMMMNMNNNNN分分MM、NN和和MN三种基因型三种基因型不同基因型的不同基因型的肌纤维密度有差肌纤维密度有差异，具异，具NN型的型的猪肌纤维较细猪肌纤维较细南京农业大学 动物科技学院2005-11194 4、猪白细胞抗原、猪白细胞抗原IIII类基因（类基因（SLA-IISLA-II）中）中DQDQ及及DRDR基因的基因的cDNAcDN

13、A序列分析序列分析（谈永松、周波等，（谈永松、周波等，20042004）南京农业大学 动物科技学院2005-1120 90年代初年代初-90年代末，年代末，MHC I类类分子研究（刘根桃、孔令勇、韦分子研究（刘根桃、孔令勇、韦习会、黄瑞华等）习会、黄瑞华等） 00年始，年始， MHC II类分子类分子研究研究（谈永松、周波等）（谈永松、周波等）南京农业大学 动物科技学院2005-1121MHC IIMHC II类分子的空间结构示意类分子的空间结构示意南京农业大学 动物科技学院2005-1122MHC IIMHC II类基因形成分子过程示意类基因形成分子过程示意 南京农业大学 动物科技学院200

14、5-1123研究方法研究方法 提取淋巴细胞总提取淋巴细胞总RNA，RT-PCR扩增扩增SLA-II类类DQA、DQB、DRA及及DRB基基因，对扩增产物进行克隆测序，获得因，对扩增产物进行克隆测序，获得cDNA全序列全序列 到到GenBank中钩出四种基因所在猪基中钩出四种基因所在猪基因组序列因组序列 将获得的将获得的DQ及及DR基因的基因的cDNA序列及序列及基因组序列向美国基因组序列向美国GenBank进行提交进行提交南京农业大学 动物科技学院2005-1124研究进展研究进展 二花脸猪二花脸猪8 8个个cDNAcDNA序列及基因组序列获得序列及基因组序列获得GenBankGenBank认

15、可和登记，认可和登记，登录号登录号分别为：分别为：AY243100AY243100、AY243101AY243101、AY243102AY243102、AY243103AY243103、AY243104AY243104、AY243105AY243105、AY243106AY243106、AY243107AY243107以及以及AY303988AY303988、AY303989AY303989、AY303990AY303990和和AY303991AY303991 五指山猪五指山猪SLA-DQBSLA-DQB外显子外显子2 2发现一个新的等位基因，发现一个新的等位基因，获得获得GenBankGenBank认可和登记，认可和登记，登录号登录号为：为： AY281361AY281361 为五指山猪的抗病特性提供了